發(fā)布時間：2020-07-24 13:34

【摘要】： 第一部分幽門螺桿菌CagA基因3’端多態(tài)性與胃十二指腸疾病的關(guān)系 目的探討幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, H.pylori)細(xì)胞毒素相關(guān)基因(CagA基因)3’端可變區(qū)序列特征及其與胃十二指腸疾病的關(guān)系。 方法湖南地區(qū)有明顯上消化道癥狀患者235例,其中慢性胃炎(CG)57例,胃潰瘍(GU)62例,十二指腸潰瘍(DU)70例,胃癌(GC)46例。于胃鏡檢查時用滅菌活檢鉗取胃竇組織1塊,分離培養(yǎng)出H.pylori89株,用PCR法對上述菌株的CagA基因擴(kuò)增及測序,根據(jù)CagA基因羧基端EPIYA重復(fù)序列的不同,將CagA陽性菌株分為東亞型和西方型兩種類型,并通過生物信息學(xué)軟件進(jìn)行多重序列比對和相似性分析。 結(jié)果H.pylori培養(yǎng)陽性率為37.9%(89/235),其中H.pylori CagA陽性者占91.7%(77/84),GU組、DU組和GC組CagA陽性率高于CG組,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。77株H.pylori CagA基因3’端均具有3個EPIYA重復(fù)序列,其中第2個EPIYA序列存在3種突變型,占18.2%(14/77)。H.pylori CagA基因3’端序列特征以東亞型為主,占88.3%(68/77),東亞型的CagA陽性菌株在GU組、DU及GC組高于CG組(P0.05)。所有東亞型CagA陽性菌株CagA序列特征類似于Yamaoka報道的A型。 結(jié)論(1)湖南地區(qū)H.pylori CagA陽性菌株以東亞型為主,均具有3個EPIYA重復(fù)序列,第2個EPIYA(EPIYA-B)存在3種突變型；(2)東亞型CagA+H.pylori感染與消化性潰瘍和胃癌的發(fā)生密切相關(guān)。 第二部分不同類型幽門螺桿菌對GES-1細(xì)胞Cx32、Cx43及GJIC功能的影響 目的觀察不同類型幽門螺桿菌(Helicobacter pylori, H.pylori)對人胃粘膜上皮細(xì)胞(GES-1)間隙連接蛋白(Connexin,Cx) 32和43的表達(dá)及其細(xì)胞間隙連接通訊功能(gap junction intercellular communication, GJIC)的影響,探討與Cx32、Cx43表達(dá)及GJIC功能異常有關(guān)的H.pylori菌株類型。 方法將臨床培養(yǎng)分離的不同H.pylori菌株類型包括東亞型CagA+H.pylori、西方型CagA+H.pylori及CagA-H.pylori與GES-1細(xì)胞共培養(yǎng)24h及48h,對照組不加H.pylor培養(yǎng)24h及48h。采用間接免疫熒光方法及計算機(jī)圖像分析技術(shù)檢測GES-1細(xì)胞Cx32、Cx43表達(dá),劃痕標(biāo)記熒光染料示蹤技術(shù)(SLDT)檢測GES-1細(xì)胞GJIC功能,四唑藍(lán)比色法(MTT)檢測細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果(1)GES-1細(xì)胞Cx32、Cx43表達(dá)改變：對照組24h和48h Cx32、Cx43表達(dá)陽性率均為100%,表達(dá)強(qiáng)度48h較24h增強(qiáng)(P0.05); CagA-H.pylori組24h和48h Cx32表達(dá)陽性率分別為100%與98.5%,與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),但48h表達(dá)強(qiáng)度較對照組降低(P0.05),Cx43 48h表達(dá)陽性率及24h和48h表達(dá)強(qiáng)度均低于對照組(P0.05)；西方型CagA+H.pylori組24h和48h Cx32表達(dá)陽性率分別為100%與93.5%,Cx43表達(dá)陽性率分別為100%與88.0%,其48h表達(dá)陽性率及表達(dá)強(qiáng)度均低于對照組和CagA-H.pylori組(P0.05)；東亞型CagA+H.pylori組24h和48h Cx32表達(dá)陽性率分別為100%與85.50%,Cx43表達(dá)陽性率分別為100%與74.0%,其48h表達(dá)陽性率及24h和48h表達(dá)強(qiáng)度均低于對照組、CagA-H.pylori組和西方型CagA+H.pylori組(P0.05)。(2)GJIC功能改變：對照組劃痕標(biāo)記熒光染料向鄰近細(xì)胞傳遞4-5列；CagA-H.pylori組24h和48h熒光染料向鄰近細(xì)胞傳遞3列,其熒光擴(kuò)散平均細(xì)胞數(shù)均低于對照組(P0.05)；西方型CagA+H.pylori組24h和48h熒光染料分別向鄰近傳遞2列和1列細(xì)胞,其熒光擴(kuò)散平均細(xì)胞數(shù)低于對照組和CagA-H.pylori組(P0.05)；東亞型CagA+H.pylori組24h熒光染料向鄰近傳遞2列細(xì)胞,48h熒光染料局限于劃痕旁的單列細(xì)胞,其熒光擴(kuò)散平均細(xì)胞數(shù)均低于對照組和CagA-H.pylori組及西方型CagA+H.pylori組。(3)細(xì)胞增殖情況：CagA-H.pylori組細(xì)胞增殖與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；西方型CagA+H.pylori組24h及48h細(xì)胞增殖在細(xì)菌/細(xì)胞比例100：1組和200：1組均高于對照組(P0.05),且200：1組較100：1組增高更明顯(P0.05)；東亞型CagA+H.pylori組24h及48h細(xì)胞增殖在細(xì)菌/細(xì)胞比例100：1組和200：1組均高于對照組(P0.05),且200：1組較100：1組增高更明顯(P0.05),但48h 400：1組細(xì)胞增殖明顯低于對照組(P0.05)。 結(jié)論(1) H.pylori下調(diào)GES-1細(xì)胞Cx32、Cx43表達(dá),降低細(xì)胞GJIC功能,并以CagA+H.pylori菌株特別是東亞型CagA+H.pylori菌株更明顯；(2) H.pylori下調(diào)GES-1細(xì)胞Cx32、Cx43表達(dá)的作用隨共培養(yǎng)時間的延長而增強(qiáng)；(3) H.pylori對GES-1細(xì)胞的促增殖作用與毒力因子CagA有關(guān),東亞型CagA+H.pylori低濃度時促進(jìn)細(xì)胞增殖,高濃度時抑制細(xì)胞增殖。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R57

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 卿晨;不同類型CagA~+H.pylori對GES-1細(xì)胞Cx32、Cx43mRNA表達(dá)的影響及機(jī)制初探[D];中南大學(xué);2011年

本文編號：2768916