【摘要】： 【目的】研究核轉(zhuǎn)錄因子-κB在實(shí)驗(yàn)性肝纖維化過(guò)程中在肝臟的表達(dá)、分布及意義,探討肝纖維化的發(fā)病機(jī)制。 【方法】雌性Wistar大鼠70只,體重相近(220g±20g),隨機(jī)分為正常組(n=6)、肝纖維化模型組(n=32)和PDTC組(n=32),后兩組各自又被隨機(jī)分為1周,2周,4周和6周組(每組n=8)。PDTC組各組大鼠在給40%CCl_4的同時(shí)給予PDTC(150mg/kg/d)灌胃。各組動(dòng)物按設(shè)計(jì)在1周末、2周末、4周末和6周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),用乙醚麻醉,在無(wú)菌無(wú)熱源條件下,進(jìn)行腹主動(dòng)脈采血和肝組織取材。常規(guī)HE染色觀察肝臟病變,天狼猩紅膠原染色、肝組織羥脯氨酸(Hyp)含量測(cè)定觀察肝纖維化程度,產(chǎn)色基質(zhì)偶氮法鱟試劑定量測(cè)定血漿內(nèi)毒素,賴氏法測(cè)定血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT),TBA法檢測(cè)肝組織丙二醛(MDA)的水平,免疫組化法測(cè)定NF-κB和ED2在各組肝臟中的表達(dá),原位雜交和Western-blot檢測(cè)肝纖維化過(guò)程中CTGF在肝臟的表達(dá)。 【結(jié)果】肝纖維化模型組與正常對(duì)照組比較:(1)肝纖維化模型組血漿內(nèi)毒素含量從第2周開(kāi)始顯著升高,以后呈遞增趨勢(shì),于第6周時(shí)達(dá)最高值;肝組織NF-κB表達(dá)從第2周開(kāi)始顯著升高,呈遞增趨勢(shì),6周時(shí)達(dá)最高;CTGF表達(dá)從第4周開(kāi)始明顯升高,第6周達(dá)最高,且兩兩都呈正相關(guān),CTGF表達(dá)升高滯后于血漿內(nèi)毒素含量升高;(2)免疫組化結(jié)果顯示:NF-κBp65在正常肝組織中少量表達(dá)于中央靜脈周圍的肝細(xì)胞胞漿內(nèi),在模型肝組織可見(jiàn)程度不等的細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核表達(dá),主要分布于纖維化區(qū)、肝竇區(qū)、血管壁及部分膽管細(xì)胞、變性的肝細(xì)胞也可見(jiàn)陽(yáng)性染色;ED2表達(dá)在正常對(duì)照組沿肝血竇少量散在分布,纖維化模型組陽(yáng)性信號(hào)明顯增多,主要分布在增生的纖維組織及纖維間隔,在肝實(shí)質(zhì)內(nèi)也有少量分布,陽(yáng)性信號(hào)隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程呈遞增趨勢(shì),且陽(yáng)性細(xì)胞胞漿豐富、體積變大,外形為星形、多角形和不規(guī)則形。PDTC組與模型組相比較:(1)血漿內(nèi)毒素含從第2周末起,顯著高于同期模型組,第4周達(dá)到最高值(P＜0.05),第6周末開(kāi)始回降,但仍顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05),與同期模型組無(wú)顯著性差異;(2)肝組織NF-κBp65和CTGF表達(dá)顯著低于同期纖維化模型組(P＜0.05),且二者呈正相關(guān)(r=0.815,P＜0.01);(3)PDTC組血漿內(nèi)毒素含量與NF-κBp65和CTGF表達(dá)均無(wú)相關(guān)性;(4)ED2表達(dá)也明顯減少。 【結(jié)論】 1.內(nèi)毒素可能通過(guò)激活NF-κB通路上調(diào)CTGF的表達(dá),從而加速肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。 2.內(nèi)毒素可能通過(guò)NF-κB活化枯否氏細(xì)胞,從而參與肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。 3.PDTC有明顯的抗肝纖維化作用。 【目的】觀察水飛薊賓(Silybinin)在大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化過(guò)程中抗肝維化作用及其可能的機(jī)制。 【方法】雌性Wistar大鼠70只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=5)、肝纖維化模型組(n=33)和水飛薊賓治療組(n=32),后兩組各自再隨機(jī)分為1周、2周、4周、6周組(n為6～11)。肝纖維化模型組以40%CCl_4造成化學(xué)性肝損傷;水飛薊賓治療組注射40%CCl_4的同時(shí)以水飛薊賓50 mg/kg/d灌胃。各組動(dòng)物(也包括正常對(duì)照組)按設(shè)計(jì)分別于給藥后1周、2周、4周、6周末模型形成后,在乙醚麻醉、無(wú)菌無(wú)熱源條件下,行腹主動(dòng)采血和肝組織取材進(jìn)行病理學(xué)觀察。用Western-blot和原位雜交方法檢測(cè)各組肝臟結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)的表達(dá);測(cè)定各組血漿內(nèi)毒素(ET)含量,同時(shí)也測(cè)定羥脯氨酸(Hyp)、丙二醛(MDA)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的水平。 【結(jié)果】肝纖維化模型組和水飛薊賓治療組與正常對(duì)照組比較,各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著升高,且ET含量升高先于CTGF;與肝纖維化模型組比較,水飛薊賓治療組肝臟病理學(xué)損傷性改變有明顯的減輕,血漿ET、ALT水平以及肝組織MDA、Hyp含量均有顯著的降低,CTGF表達(dá)也明顯的下調(diào)。 【結(jié)論】水飛薊賓可有效地改善實(shí)驗(yàn)性肝纖維化程度,其機(jī)制可能與其降低腸源性內(nèi)毒素血癥、下調(diào)CTGF的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R575.2;R285
【圖文】：

根據(jù)目的條帶的值與內(nèi)參照p一actin的值之比行半定量分析，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果表明在正常肝組織有少量CTGF表達(dá)，肝纖維化過(guò)程中肝組織CTGF的表達(dá)隨著Ca4損傷周期延長(zhǎng)而逐漸升高，與正常對(duì)照組比較從第4周起有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖7)(尸<0.05)。PDTC組與模型組同期相比CTGF表達(dá)從第2周末起顯著減少(P<0.05)，見(jiàn)(表2)，(圖5、7)。正常對(duì)照模型Iw模型ZW模型4W模型 6WPDTCIWPDTCZWPDTC4WPDTC6W乍煦絕敷尸像落思毖羅氣三照然竺拼愁泛三巴思岔戶一，竺黑烹黑羅一CTGF，臼腳翻...口，.口......峭...，.......側(cè)....，......

山西醫(yī)科大學(xué)項(xiàng)士學(xué)正常對(duì)照組大鼠肝臟幾乎末檢測(cè)到CTGFmRNA陽(yáng)性表達(dá)(圖13D);纖維化CTGFmRNA陽(yáng)性表達(dá)主要分布在胞漿，多見(jiàn)于肝星狀細(xì)胞和匯管區(qū)、纖維間隔中，間隔分布的梭形間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)為主，少數(shù)平滑肌細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)可表達(dá)，在炎癥區(qū)的肝細(xì)胞也偶見(jiàn)表達(dá)，CTGF表達(dá)量纖維化模型組明顯高于正常(尸<0.05)，且與肝纖維化的程度呈正相關(guān)(圖13E)。水飛薊賓治療組(4周、6周)與組同期相比cTGF表達(dá)顯著減少(P<0.05)，見(jiàn)表3，圖n、圖12、圖13Fo正常對(duì)照纖維化模型1周模型2周模型4周模型6周水飛薊賓治療lw治療Zw治療4W治療6w，..目口口...側(cè)丫一一，旅麟域娜栩口口響...曰...目.護(hù)

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本文編號(hào)：2764137