【摘要】：目的:研究COX-2敲除對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響,為臨床上逆轉(zhuǎn)肝纖維化提供新的依據(jù)以及策略。方法:1.體外培養(yǎng)的大鼠HSC-T6細(xì)胞,經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)傳代后,按照病毒最適用量MOI=10,將LV-COX-2-sgRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染至HSC-T6細(xì)胞,獲得HSC-T6-COX-2~(-/-)細(xì)胞,LV-NC-sgRNA轉(zhuǎn)染至HSC-T6細(xì)胞獲得HSC-T6-NC細(xì)胞,并將細(xì)胞分為3組:KO組(HSC-T6-COX-2~(-/-)細(xì)胞)、NC組(HSC-T6-NC細(xì)胞)、CON組(HSC-T6細(xì)胞)。2.病毒轉(zhuǎn)染72小時(shí)后,于熒光顯微鏡下觀察,再計(jì)算轉(zhuǎn)染效率;病毒轉(zhuǎn)染成功后,分別于72h及96h提取3組中的COX-2蛋白,應(yīng)用Western Blot方法在基因和蛋白水平上進(jìn)行敲除驗(yàn)證;克隆形成、CCK8方法檢測(cè)細(xì)胞增殖。結(jié)果:1.LV-COX-2-sgRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞72 h后,于熒光顯微鏡下觀察,CON組未見綠色熒光出現(xiàn),KO、NC組細(xì)胞可見綠色熒光,轉(zhuǎn)染效率在80%以上,證明病毒轉(zhuǎn)染成功。2.Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明:慢病毒轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞72h及96h后,KO組COX-2蛋白表達(dá)量較CON組和NC組均顯著下調(diào),提示COX-2基因敲除成功,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3.克隆形成、CCK8檢測(cè)結(jié)果表明:KO組較NC組、CON組HSC-T6細(xì)胞的增殖出現(xiàn)明顯抑制作用,提示COX-2基因敲除可抑制HSC-T6細(xì)胞的增殖,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。結(jié)論:敲除HSC-T6細(xì)胞的COX-2基因,能夠抑制HSC-T6細(xì)胞的增殖。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R575
【圖文】：

第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果gRNA 轉(zhuǎn)染效果X-2-sgRNA 質(zhì)粒為熒光標(biāo)記，慢病毒轉(zhuǎn)染入 HSC-T6 細(xì)胞，感染后 72 h 左光顯微鏡下觀察，細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)綠色熒光。隨機(jī)選擇 10 個(gè)視野，計(jì)算陽性細(xì)胞之比作為質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率指標(biāo)，熒光率即為陽性感染率。從圖 3.1、圖 3.2染 72 小時(shí)后，CON 組未見綠色熒光出現(xiàn)，KO、NC 組細(xì)胞均可見綠色熒效率達(dá) 80%以上，且細(xì)胞狀態(tài)正常，說明病毒轉(zhuǎn)染成功。Bright GFP

13圖 3.2 左右分別是同一視野下光學(xué)顯微鏡圖和熒光顯微鏡圖（×200 倍） 組（HSC-T6 細(xì)胞組）；NC 組（LV-NC-sgRNA 病毒轉(zhuǎn)染組）；KO 組（LV-COX-2-sgRNA組）；熒光表達(dá)效率達(dá)到 80%以上。X-2 敲除效果-T6 細(xì)胞被慢病毒轉(zhuǎn)染 72h、96h 后，分別收集 CON、NC、KO 三組

的 COX-2 蛋白，利用 WB 檢測(cè) COX-2 蛋白質(zhì)表達(dá)量，內(nèi)參選擇 GAPDH。結(jié)果示：72h 后 KO 組細(xì)胞的灰度值為 0.068±0.00001，較 CON 組的灰度值 0.456±106 以及 NC 組的灰度值 0.449±0.084 均顯著下調(diào)，組間灰度值呈顯著性差異，具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）。96h 后 KO 組細(xì)胞的灰度值為 0.065±0.020，較 CON 組灰度值 1.220±0.097 以及 NC 組的灰度值 0.397±0.122 均顯著下調(diào)，組間灰度值顯著性差異，具有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.01）。（圖 3.3，3.4）。

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2 陳岳祥,張興榮,謝渭芬,張忠兵,李石;�；撬釋�(duì)離體肝星狀細(xì)胞增殖及凋亡的影響[J];中華消化雜志;2003年05期

3 李繼強(qiáng),陸倫根,華靜,吳亞云,曾民德;氧化苦參堿對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖的影響[J];胃腸病學(xué);1998年02期

4 李森林;李振方;趙琦;;化積湯對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響[J];山東醫(yī)藥;2007年01期

5 盧清,張清波,鄔祥惠,譚英姿,劉成海;氧化苦參堿對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖的影響[J];肝臟;2001年01期

6 盧春鳳,陳廷玉,王淑秋,王淑香;槲皮素抑制離體大鼠肝星狀細(xì)胞增殖[J];中國病理生理雜志;2005年06期

7 馬雪梅,王寶恩,尤紅;丹參對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2000年07期

8 陳艷軍;高旭珍;張麗虹;張艷杰;高月秋;;玉米須對(duì)大白鼠肝星狀細(xì)胞增殖分化的影響[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2012年10期

9 李萬平;任美萍;李曉冰;劉明華;章卓;;氯沙坦對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡的作用[J];中國新藥雜志;2010年12期

10 林明華;孟慶媛;郭夢(mèng)凡;;燈盞花素對(duì)離體大鼠肝星狀細(xì)胞增殖的影響[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2007年01期

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2 張曉嵐;申建剛;霍曉霞;;黏著斑相關(guān)非激酶對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響與機(jī)制研究[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 劉娜;張曉嵐;;去甲腎上腺素對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

4 王春瑩;陳永平;劉俊;李春艷;林鐲;陽韜;路小劅;申春燕;;骨成形蛋白7對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖的抑制作用[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會(huì)感染科醫(yī)師大會(huì)暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

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6 朱萱;中月明;;熊果酸對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11屆全國內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

7 陳永平;程瑗;金曉芝;歐陽韜;王春瑩;劉俊;鄭明華;;CD4+CD25+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖及功能的影響[A];第四屆中國醫(yī)師協(xié)會(huì)感染科醫(yī)師大會(huì)暨傳染病診治高峰論壇、浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)肝病、感染病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2011年

8 季光;曹承樓;邢練軍;張瑋;王奕;王育群;;清肝活血方對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖及膠原生成的影響[A];第十三次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

9 王興鵬;劉文濱;吳愷;;洛沙坦對(duì)人胰腺星狀細(xì)胞增殖、凋亡和膠原合成的影響效應(yīng)[A];2005年全國慢性胰腺炎學(xué)術(shù)大會(huì)專集[C];2005年

10 喻劍華;黃兆勝;趙珍東;;大黃素對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖及細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶的影響[A];2006年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

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2 張平;丹酚酸B可抑制原代肝星狀細(xì)胞增殖[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

3 于世瀛；王��；河福金;益氣活血藥能抑制肝星狀細(xì)胞增殖[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

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1 魯臨;血管緊張素Ⅱ?qū)Υ笫笠刃菭罴?xì)胞增殖和活化的作用機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 陳國忠;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)控肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡和RhoA表達(dá)的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

3 張迪;肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

4 張曉嵐;RGD依賴的整合素信號(hào)通路與肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及丹參單體干預(yù)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2002年

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3 趙景潤;姜黃素對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響的初步研究[D];暨南大學(xué);2004年

4 孟云超;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子影響肝星狀細(xì)胞增殖及凋亡的機(jī)制[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

5 姚文敏;自噬現(xiàn)象對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

6 王蕾;1，25-二羥基維生素D3對(duì)體外大鼠肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及遷移的影響及其機(jī)制的研究[D];承德醫(yī)學(xué)院;2016年

7 張麗君;P53在沉默COX-2抑制肝星狀細(xì)胞增殖中的作用[D];南華大學(xué);2017年

8 王東旭;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 石明亮;泡球蚴囊液對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡影響[D];青海大學(xué);2014年

10 徐永鋒;磷脂酰肌醇3激酶信號(hào)途徑在血小板源生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞增殖與Ⅰ型膠原合成中的作用[D];蘇州大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2762316