【摘要】：肝細(xì)胞胞質(zhì)中甘油三酯(TG)的過多積累形成脂肪肝。脂肪肝是多種肝病包括肝硬化和肝癌的主要原因。目前,關(guān)于TG在肝細(xì)胞胞質(zhì)中積累的代謝途徑尤其是肝細(xì)胞的脂解尚不清楚,但有證據(jù)表明脂肪組織甘油三酯水解酶(ATGL)在脂解中發(fā)揮十分重要的作用。ATGL全身性敲除鼠肝臟積累脂肪,但由于此小鼠心臟積累過多脂肪而早期致死,因而無法進(jìn)行肝臟脂解的研究。本論文首次創(chuàng)造了肝臟組織特異性ATGL敲除小鼠(ATGLLKO),通過系統(tǒng)的研究得出以下幾點(diǎn)結(jié)果: 1.肝臟特異性ATGL缺失引起明顯的脂肪肝,且脂肪肝的程度隨年齡的增長而加重。組織形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)ATGLLKO小鼠肝臟脂滴呈明顯的規(guī)律性分布:大脂滴分布于肝臟門靜脈周邊而小脂滴則主要集中于中心靜脈周邊。 2. ATGLLKO小鼠體重正常,并不肥胖,且DEXA掃描發(fā)現(xiàn)該小鼠的肌肉量顯著高于對照組。血液指標(biāo)檢測顯示,ATGLLKO小鼠的葡萄糖,TG和膽固醇水平和對照鼠相似。 3.除肝細(xì)胞外,ATGL缺失同時(shí)引起膽管上皮細(xì)胞脂質(zhì)的大量積累,但血液GGT及ALP的水平正常。 4. ATGLLKO小鼠肝臟炎癥細(xì)胞的分布和數(shù)量以及TNFα和IL-6的mRNA含量與對照組相似或低于對照。TUNEL染色顯示,ATGLLKO小鼠與對照組肝臟凋亡細(xì)胞的數(shù)量相似。12月齡ATGLLKO肝臟Masson trichrome staining結(jié)果呈陰性。ATGLLKO小鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)VLDL分泌正常。肝臟脂肪酸氧化試驗(yàn)顯示β氧化水平和對照相比下降30%。 5.生理水平檢測表明,ATGLLKO小鼠具有正常的葡萄糖和胰島素耐受量以及以丙酮酸為底物的糖異生功能。肝臟水平上胰島素刺激的Akt磷酸化水平正常。這些結(jié)果表明ATGLLKO小鼠具有正常的胰島素敏感性。 6.盡管ATGLLKO小鼠的脂肪酸氧化下降30%,但48h饑餓條件下ATGLLKO小鼠與野生型鼠的呼吸交換率相似,同時(shí)ATGLLKO小鼠血液3-HB與對照組的升高水平相似,表明LKO小鼠完全可以滿足應(yīng)激狀態(tài)下的能量需求。 7. ATGLLKO小鼠肝臟調(diào)控TG合成的重要酶DGAT2的mRNA水平下降了50倍;同時(shí)肝臟切片中溶酶體脂質(zhì)體(lipolysosome)的數(shù)量增加了2.7倍,表明TG合成的降低以及溶酶體介導(dǎo)的TG的降解是緩解脂解缺陷的潛在補(bǔ)償機(jī)制。 綜上所述,肝臟ATGL缺失引起不伴隨肥胖及代謝綜合癥的原發(fā)性脂肪肝。盡管ATGLLKO小鼠的脂肪肝高達(dá)20%,但肝臟依然維持正常的功能。ATGLLKO小鼠膽管內(nèi)脂肪的累積并未影響其功能,表明ATGL也是膽管細(xì)胞重要的TG水解酶且無毒害作用。通過對溶酶體自噬作用的研究發(fā)現(xiàn),溶酶體介導(dǎo)的肝細(xì)胞胞質(zhì)中TG的降解是緩解脂肪肝的有效途徑。與肥胖和糖尿病引起的脂肪肝相比,ATGL敲除引起的脂肪肝在代謝上具有緩解多種代謝綜合癥的保護(hù)作用,從而推測單純性脂肪肝對機(jī)體起保護(hù)作用,而肥胖引起的繼發(fā)性脂肪肝癥狀是機(jī)體在引發(fā)代謝綜合癥的前提下所產(chǎn)生的次級效應(yīng),因而ATGLLKO小鼠是研究脂肪肝以及其形成機(jī)理的理想模型。
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R575.5
【圖文】：

及纖維化的分子機(jī)理目前并不清楚。氧化應(yīng)激，線粒因素是近年來報(bào)道的可能原因。量攝入是引起脂肪肝的主要原因之一。然而，最近的謝綜合癥及其并發(fā)癥之前。肝臟儲存脂肪本身是為了用。那么如何研究沒有伴隨肥胖的原發(fā)性脂肪肝對機(jī)問題之一。肪酸的簡單代謝總結(jié)為圖 1-1。首先從分析引起脂肪肥胖的主要因素，包括高脂飲食介導(dǎo)的高能量攝入及除了由于某些先天性遺傳代謝疾病導(dǎo)致線粒體氧化代質(zhì)中貯存的 TG 是線粒體 beta 氧化及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中 TG 重液中 TG 的水平，那么阻斷肝細(xì)胞胞質(zhì)中 TG 的分解代性中間產(chǎn)物的累積，如長鏈脂肪酸等，進(jìn)而避免血液從而起到保護(hù)肝臟，并且避免全身性代謝綜合癥的發(fā)脂解研究很少。近年來新發(fā)現(xiàn)的甘油三酯水解酶(ad為在肝細(xì)胞 TG 分解中起重要作用。

圖 2-1 小鼠肝臟 ATGL 特異性敲除載體的構(gòu)建Figure 2-1 Vector construction of specific ATGL knockout因組中 Pnpla2 位點(diǎn)示意圖，外顯子用填充的長方形表示；向載體（含有 Neo 及 TK 位點(diǎn)，分別為正負(fù)篩選的靶基因，兩個(gè)同方向的；基因。 靶基因底下的短臂片段用作基因組 Southern blotting 的探針（TK,nase, 胸苷激酶）。成功重組的靶基因?yàn)楹?Neo 但沒有 TK 的基因。步驟簡述如下：增小鼠 ATGL 基因外顯子 1 和 5’端 336 核苷酸序列的非翻譯區(qū)以及內(nèi)含子苷酸序列，將此擴(kuò)增子連接到 pMC1neoPolyA 工程載體（Stratagen, La Jolla,抗性基因(Neo)下游 BamHI 限制位點(diǎn)；含有 LoxP 位點(diǎn)的寡核苷酸序列克隆插入到以上序列的 5’和 3’端；擴(kuò)增小鼠 Pnpla2 基因 5’端非翻譯區(qū)的一段 1035 bp 序列，將其克隆到 loxP游，作為構(gòu)建載體的短臂；具有磷酸甘油激酶(phosphoglycerate kinase，PGK)啟動(dòng)子的胸腺核苷激酶

H 10.5) 終止反應(yīng)之后在渦流器上劇烈渦流混射性標(biāo)記脂肪酸的上層液體用于閃爍計(jì)數(shù)。 mean ± SEM 方式表達(dá)。處理和對照之間的差 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和胚胎顯微注射后，我們從 60 個(gè)基因的陽性克隆。將兩個(gè)胚胎移植后得到 色的雄性小鼠和 C57BL/6 雌性小鼠雜交，得，結(jié)果顯示存在 ATGLlox/+小鼠及 ATGL +/+

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 郭吟;運(yùn)動(dòng)—飲食干預(yù)與局部按揉對脂代謝和減肥效果的研究[D];上海體育學(xué)院;2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張文濤;沙苑子、澤瀉降脂作用的比較研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

本文編號：2762305