【摘要】：研究背景長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long noncoding RNA,LncRNA)H19是最早發(fā)現(xiàn)的lncRNA之一,首次在小鼠和人類肝臟中發(fā)現(xiàn),是人體在胎兒期和成人期表達(dá)差異最大的lncRNA。H19在膽汁淤積性肝纖維化組織中表達(dá)增高,,且其過表達(dá)可加重膽汁淤積性肝纖維化的病變進(jìn)展。肝纖維化的發(fā)病機(jī)制是多種炎性細(xì)胞因子如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factor beta 1,TGFβ1)等分泌增多,導(dǎo)致肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cells,HSCs)活化,細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)合成增多。HSCs活化是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)。自噬可以促進(jìn)HSCs活化。H19參與了自噬的調(diào)控,其過表達(dá)可加重HSCs的活化。胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白1(Insulin-like growth factor binding protein-related protein 1,IGFBPrP1)是導(dǎo)師課題組十余年來研究發(fā)現(xiàn)的一種新的致肝纖維化因子。前期一系列研究表明,IGFBPrP1能夠活化HSCs,產(chǎn)生過多的ECM,促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。另外,IGFBPrP1和TGFβ1可以相互調(diào)節(jié),共同促進(jìn)HSCs活化。TGFβ1可以通過自噬促進(jìn)HSCs活化,PI3K/AKT信號(hào)通路參與其中。TGFβ1也能促進(jìn)H19的表達(dá),其機(jī)制可能與PI3K/AKT的活化有關(guān)。鑒于TGFβ1與H19和自噬有關(guān),而IGFBPrP1與TGFβ1可互為因果,那么,IGFBPrP1在誘導(dǎo)肝纖維化過程中,H19與自噬的表達(dá)如何,是否對(duì)其具有調(diào)控作用,PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路是否參與其中,目前國(guó)內(nèi)外尚未報(bào)道。為此,本研究擬以長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19和自噬作為切入點(diǎn),研究H19是否通過自噬調(diào)控IGFBPrP1致肝纖維化形成的作用及其機(jī)制。實(shí)驗(yàn)分為兩大部分:第一部分首先是驗(yàn)證經(jīng)典模型BDL致小鼠肝纖維化形成過程中,是否存在H19、自噬以及IGFBPrP1的改變;其次研究IGFBPrP1誘導(dǎo)小鼠肝纖維化形成過程中是否有H19與自噬的改變。第二部分是通過體外實(shí)驗(yàn)首先研究IGFBPrP1過表達(dá)JS-1(小鼠肝星狀細(xì)胞株)后,H19與自噬的表達(dá)變化特點(diǎn);其次研究上調(diào)或下調(diào)H19是否會(huì)對(duì)自噬產(chǎn)生影響,該影響是否會(huì)調(diào)控IGFBPrP1誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞活化,并闡明其可能機(jī)制。第一部分小鼠肝纖維化形成中IGFBPrP1對(duì)長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19與自噬的影響實(shí)驗(yàn)一膽總管結(jié)扎致小鼠肝纖維化形成中H19與自噬的動(dòng)態(tài)變化目的:觀察膽總管結(jié)扎(BDL)致小鼠肝纖維化形成過程中H19與自噬的動(dòng)態(tài)變化。方法:C57BL/6野生雄性小鼠88只隨機(jī)分為三組:正常組:正常飼養(yǎng);偽手術(shù)組:僅分離膽總管而不結(jié)扎;BDL組:分離并結(jié)扎膽總管。三組動(dòng)物分別于2w、4w、6w末各取8只麻醉后留取肝組織,HE染色觀察肝臟病理學(xué)改變,免疫組化及Western blot方法檢測(cè)IGFBPrP1、TGFβ1、α-SMA、collagen I、LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62蛋白表達(dá),qRT-PCR檢測(cè)IGFBPrP1、lncRNA H19的表達(dá)。結(jié)果:(1)HE染色:BDL作用于小鼠后,隨著病變進(jìn)展,肝細(xì)胞減少,匯管區(qū)擴(kuò)大,膽管擴(kuò)張,小膽管增生,膠原增生和沉積,病變隨著時(shí)間延長(zhǎng)而加重。(2)免疫組化及Western blot方法檢測(cè)IGFBPrP1等蛋白表達(dá):BDL作用于小鼠后,肝組織中IGFBPrP1、TGFβ1、α-SMA、collagen I蛋白表達(dá)隨著肝纖維化進(jìn)展逐漸升高(P0.05)。(3)免疫組化及Western blot方法檢測(cè)LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62蛋白表達(dá):BDL作用于小鼠后,肝組織蛋白表達(dá)LC3B、Beclin1隨著肝纖維化進(jìn)展逐漸升高(P0.05),而SQSTM1/p62表達(dá)逐漸降低(P0.05)。(4)肝組織IGFBPrP1與LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62蛋白表達(dá)的相關(guān)性:在BDL作用的小鼠肝組織中,IGFBPrP1與LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62的相關(guān)系數(shù)分別為r=0.948,0.955,0.953,P0.01。IGFBPrP1與LC3B、Beclin1呈正相關(guān)關(guān)系,與SQSTM1/p62呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。(5)qRT-PCR檢測(cè)IGFBPrP1、lncRNA H19的表達(dá):BDL作用于小鼠后,肝組織中IGFBPrP1 mRNA隨著肝纖維化進(jìn)展逐漸升高(P0.05),H19 RNA表達(dá)也逐漸增高(P0.05)。(6)肝組織IGFBPrP1 mRNA與H19 RNA表達(dá)的相關(guān)性:在BDL作用的小鼠肝組織中,IGFBPrP1與H19的相關(guān)系數(shù)分別為r=0.930,P0.01。IGFBPrP1與H19呈正相關(guān)關(guān)系,結(jié)論:膽總管結(jié)扎致小鼠肝纖維化形成中,IGFBPrP1與H19、自噬均表達(dá)增高。實(shí)驗(yàn)二IGFBPrP1致小鼠肝纖維化形成中自噬與長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19的動(dòng)態(tài)變化目的:研究IGFBPrP1過表達(dá)致小鼠肝纖維化形成過程中自噬與長(zhǎng)鏈非編碼RNAH19的動(dòng)態(tài)變化。方法:C57BL/6野生雄性小鼠144只隨機(jī)分為三組:Control組:尾靜脈注射0.1ml生理鹽水;CAd組:尾靜脈注射空病毒2×109pfu/只0.1ml;AdIGFBPrP1組:尾靜脈注射AdIGFBPrP1基因2×109pfu/只0.1m。分別于1w、2w、4w、8w、12w末各取8只麻醉后留取血清及肝組織,ELISA檢測(cè)血清ALT、AST表達(dá),HE及Sirius red染色觀察肝臟病理學(xué)改變,免疫組化及Western blot方法檢測(cè)IGFBPrP1、TGFβ1、α-SMA、collagen I、LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62、Atg5、Atg7蛋白表達(dá),qRT-PCR方法檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、LC3B、H19的表達(dá)。結(jié)果:(1)熒光顯微鏡觀察EGFP表達(dá):AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染小鼠1w后,肝組織可見明亮綠色熒光,2w時(shí)綠色熒光減弱,4w時(shí)可見微弱的綠色熒光。(2)ELISA檢測(cè)ALT、AST:AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染小鼠1w后,ALT、AST迅速升高,2w、4w逐漸下降,8w、12w降至正常。(3)HE和Sirius red染色:AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染小鼠后,隨著時(shí)間延長(zhǎng),肝組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝細(xì)胞腫脹,胞漿疏松,肝細(xì)胞變性、壞死,匯管區(qū)膠原纖維逐漸增生。(4)免疫組化及Western blot方法檢測(cè)IGFBPrP1等蛋白表達(dá):AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染小鼠后,肝組織中IGFBPrP1蛋白表達(dá)于1w達(dá)高峰,2w、4w、8w逐漸下降,12w降至正常(P0.05)。TGFβ1、α-SMA、collagen I蛋白表達(dá)隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高(P0.05)。(5)免疫組化及Western blot方法檢測(cè)LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62、Atg5、Atg7蛋白表達(dá):AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染小鼠后,肝組織中LC3B、Beclin1、Atg5、Atg7蛋白表達(dá)于1w達(dá)高峰,2w、4w、8w、12w略降低(P0.05)。而SQSTM1/p62在1w降至最低,2w、4w、8w、12w略升高(P0.05)。(6)qRT-PCR檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、LC3B、lncRNAH19的表達(dá):AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染小鼠后,IGFBPrP1 mRNA于1w達(dá)高峰,2w、4w、8w逐漸下降,12w降至正常(P0.05),α-SMA mRNA隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增高(P0.05),LC3B mRNA于1w達(dá)高峰,2w、4w、8w、12w略降低(P0.05),H19 RNA于1w達(dá)高峰,2w、4w、8w、12w略降低(P0.05)。結(jié)論:IGFBPrP1過表達(dá)致小鼠肝纖維化形成過程中可促進(jìn)自噬和H19的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)三上調(diào)或下調(diào)自噬對(duì)IGFBPrP1致小鼠肝纖維化形成的影響目的:明確IGFBPrP1是否能通過自噬誘導(dǎo)小鼠肝纖維化。方法:C57BL/6野生雄性小鼠200只隨機(jī)分為五組:Control組:尾靜脈注射0.1ml生理鹽水;CAd組:尾靜脈注射空病毒2×109pfu/只0.1ml;AdIGFBPrP1組:尾靜脈注射AdIGFBPrP1 2× 109pfu/只0.1ml;AdIGFBPrP1+LY294002組:尾靜脈注射AdIGFBPrP1 2×109pfu/只0.1ml,同時(shí)腹腔注射LY294002(4mg/kg/d);AdIGFBPrP1+雷帕霉素組:尾靜脈注射AdIGFBPrP1 2×109pfu/只0.1ml,同時(shí)腹腔注射雷帕霉素(2mg/kg/d),分別于1w、2w、4w、8w、12w采集標(biāo)本及檢測(cè),HE和Sirius red染色觀察肝臟病理學(xué)變改變,免疫組化及Western blot方法檢測(cè)IGFBPrP1、TGFβ1、α-SMA、collagen I、LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62、Atg5、Atg7、p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá),qRT-PCR方法檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、LC3B表達(dá)。結(jié)果:(1)HE和Sirius red染色:在AdIGFBPrP1致小鼠肝纖維化過程中,腹腔注射LY294002,肝細(xì)胞變性、壞死較輕,膠原纖維增生較少。腹腔注射雷帕霉素后,炎性細(xì)胞增多,肝細(xì)胞變性、壞死嚴(yán)重,膠原纖維增多。(2)免疫組化及Western blot方法檢測(cè)肝組織LC3B、Becli1、SQSTM1/p62、Atg5、Atg7蛋白表達(dá):在AdIGFBPrP1致小鼠肝纖維化過程中,腹腔注射LY294002,肝組織中LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值及Beclin1、Atg5、Atg7蛋白表達(dá)均降低(P0.05),SQSTM1/p62蛋白表達(dá)增多(P0.05)。腹腔注射雷帕霉素,肝組織LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值及Beclin1、Atg5、Atg7蛋白表達(dá)均增高(P0.05),SQSTM1/p62蛋白表達(dá)降低(P0.05)。(3)免疫組化及Western blot方法檢測(cè)肝組織α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá):在AdIGFBPrP1致小鼠肝纖維化過程中,腹腔注射LY294002,肝組織α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá)相對(duì)減少(P0.05)。腹腔注射雷帕霉素,肝組織α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá)增多(P0.05)。(4)Western blot方法檢測(cè)肝組織p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá):AdIGFBPrP1可抑制AKT和mTOR的磷酸化水平,腹腔注射LY294002或雷帕霉素,可進(jìn)一步抑制AKT和mTOR的磷酸化水平(P0.05)。(4)qRT-PCR檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、LC3B表達(dá):在AdIGFBPrP1致小鼠肝纖維化過程中,腹腔注射LY294002,IGFBPrP1、α-SMA、LC3B mRNA表達(dá)減少(P0.05)。腹腔注射雷帕霉素,IGFBPrP1、α-SMA、LC3B mRNA表達(dá)增多(P0.05)。結(jié)論:IGFBPrP1可通過自噬誘導(dǎo)小鼠肝纖維化。實(shí)驗(yàn)四IGFBPrP1致小鼠肝纖維化形成中自噬對(duì)長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19的調(diào)控作用目的:探討IGFBPrP1致小鼠肝纖維化形成中,抑制或促進(jìn)自噬對(duì)H19的影響。方法:實(shí)驗(yàn)分組同實(shí)驗(yàn)三。qRT-PCR檢測(cè)H19 RNA表達(dá)。結(jié)果:(1)qRT-PCR檢測(cè)小鼠肝組織H19 RNA表達(dá):在IGFBPrP1致小鼠肝纖維化過程中,LY294002明顯抑制H19 RNA表達(dá)(P0.05),雷帕霉素增強(qiáng)了H19 RNA表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:IGFBPrP1致小鼠肝纖維化形成中,改變自噬可影響H19的表達(dá),其與IGFBPrP1影響PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路有關(guān)。第二部分 長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19與自噬在IGFBPrP1過表達(dá)JS-1(小鼠肝星狀細(xì)胞株)中的作用及其機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)五長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19與自噬在IGFBPrP1過表達(dá)JS-1中的動(dòng)態(tài)變化目的:探討IGFBPrP1過表達(dá)JS-1后,H19與自噬的變化特點(diǎn)。方法:首先用不同MOI(10,50,100,200)的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染JS-1細(xì)胞,篩選出最適MOI,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分三組:Control組:未做處理;CAd組:空病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞;AdIGFBPrP1組:AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞。分別于6h、12h、24h、48h、72h收集細(xì)胞,Western blot檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、collagen I、LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62蛋白表達(dá)。qRT-PCR檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、LC3B、H19的表達(dá)。結(jié)果:(1)最適MOI確定:AdIGFBPrP1 MOI 100的轉(zhuǎn)染效率明顯高于MOI 10、MOI 50、MOI 200(P0.05)。(2)Western blot方法檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、collagen I蛋白表達(dá):AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染JS-1后,IGFBPrP1蛋白表達(dá)在6h、12h、24h逐漸增多,48h達(dá)高峰,72h降低(P0.05)。α-SMA、collagen I蛋白表達(dá)隨著時(shí)間推移逐漸增多(P0.05)。(3)Western blot方法檢測(cè)LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62表達(dá):AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染JS-1后,LC3B、Beclin1蛋白表達(dá)在6h、12h、24h逐漸增多,48h達(dá)高峰,72h降低(P0.05)。SQSTM1/p62在6h、12h、24h逐漸降低,48h降至最低,72h增高(P0.05)。(4)qRT-PCR檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、LC3B、H19表達(dá):AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染JS-1后,IGFBPrP1、LC3B mRNA表達(dá)量在6h、12h、24h逐漸增多,48h達(dá)高峰,72h降低(P0.05)。α-SMA mRNA表達(dá)量隨著時(shí)間推移逐漸增多(P0.05)。H19 RNA表達(dá)量在6h、12h、24h逐漸增多,48h達(dá)高峰,72h降低(P0.05)。結(jié)論:IGFBPrP1過表達(dá)JS-1后,H19與自噬的表達(dá)增高。實(shí)驗(yàn)六上調(diào)或下調(diào)自噬對(duì)IGFBPrP1過表達(dá)JS-1合成ECM(細(xì)胞外基質(zhì))的影響目的:明確抑制或促進(jìn)自噬是否會(huì)影響IGFBPrP1對(duì)HSCs活化及ECM合成。方法:實(shí)驗(yàn)分組如下:Control組:正常培養(yǎng);CAd組:空病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h;AdIGFBPrP1組:MOI 100的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h;AdIGFBPrP1+LY294002組:MOI100的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h,LY294002 10μmol/L、20μmol/L、25 μmol/L轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h;AdIGFBPrP1+雷帕霉素組:MOI 100的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h,雷帕霉素100nmol/L轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h,所有細(xì)胞均使用10%FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)。Western blot檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、collagen I、LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62、p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá)。qRT-PCR檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、LC3B mRNA的表達(dá)。結(jié)果:(1)Western blot方法檢測(cè)LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62蛋白表達(dá):在AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)上,LY294002低、中、高劑量干預(yù)后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值及Beclin1蛋白表達(dá)均降低(P0.05),SQSTM1/p62蛋白表達(dá)增多(P0.05),其中LY294002高劑量組對(duì)自噬的抑制作用更為顯著(P0.05)。雷帕霉素干預(yù)后,LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值及Beclin1蛋白表達(dá)均增高(P0.05),SQSTM1/p62蛋白表達(dá)降低(P0.05)。(2)Western blot方法檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá):在AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)上,LY294002低、中、高劑量干預(yù)后,IGFBPrP1、α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá)均降低(P0.05),其中LY294002高劑量組的抑制作用更為顯著(P0.05)。雷帕霉素干預(yù)后,IGFBPrP1、α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá)均增高(P0.05)。(3)Western blot方法檢測(cè)p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá):AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染JS-1后,可抑制AKT、mTOR的磷酸化水平,LY294002低、中、高劑量干預(yù)后,AKT和mTOR的磷酸化水平進(jìn)一步降低(P0.05),其中LY294002高劑量組的抑制作用更為顯著(P0.05)。雷帕霉素干預(yù)后,AKT和mTOR的磷酸化水平亦進(jìn)一步降低(P0.05)。(4)qRT-PCR檢測(cè)IGFBPrP1、α-SMA、LC3B mRNA表達(dá):在AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)上,高劑量LY294002可明顯抑制IGFBPrP1、LC3B、α-SMA mRNA表達(dá)(P0.05),雷帕霉素增強(qiáng)了IGFBPrP1、LC3B、α-SMA mRNA表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:IGFBPrP1可通過自噬促進(jìn)HSCs活化,ECM合成增多。實(shí)驗(yàn)七IGFBPrP1過表達(dá)JS-1中改變自噬對(duì)長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19的影響目的:探討IGFBPrP1活化HSCs過程中,改變自噬對(duì)H19表達(dá)的影響。方法:實(shí)驗(yàn)分組同實(shí)驗(yàn)六。qRT-PCR檢測(cè)H19 RNA表達(dá)。結(jié)果:(1)qRT-PCR檢測(cè)JS-1中H19 RNA表達(dá):在AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)上,LY294002明顯抑制H19 RNA表達(dá)(P0.05),雷帕霉素增強(qiáng)了H19 RNA表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:IGFBPrP1活化HSCs過程中,改變自噬可影響H19的表達(dá),該作用可能與PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路有關(guān)。實(shí)驗(yàn)八上調(diào)或下調(diào)長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19對(duì)IGFBPrP1過表達(dá)JS-1中自噬的調(diào)控作用目的:探討上調(diào)或下調(diào)H19如何影響IGFBPrP1誘導(dǎo)的HSCs自噬及活化。方法:實(shí)驗(yàn)分六組:Control組:正常培養(yǎng);AdIGFBPrP1組:MOI 100的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h;AdIGFBPrP1+pcDNA3.1-H19組:轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-H196h后換用MOI100的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h;AdIGFBPrP1+pcDNA3.1-control組:轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-control 6h后換用MOI 100的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h;AdIGFBPrP1+siRNA-H19組:轉(zhuǎn)染siRNA-H19 6h后換用MOI 100的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h;AdIGFBPrP1+siRNA-NC組:轉(zhuǎn)染siRNA-NC 6h后換用MOI 100的AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h。所有細(xì)胞均使用10%FBS培養(yǎng)基培養(yǎng)。Western blot方法檢測(cè)α-SMA、collagen I、LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62蛋白表達(dá);qRT-PCR檢測(cè)H19、IGFBPrP1、α-SMA、LC3B mRNA表達(dá)。結(jié)果:(1)Western blot方法檢測(cè)LC3B、Beclin1、SQSTM1/p62蛋白表達(dá):在AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)上,pcDNA3.1-H19可升高LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值及Beclin1蛋白表達(dá)(P0.05),而降低SQSTM1/p62蛋白表達(dá)(P0.05)。siRNA-H19可降低LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值及Beclin1蛋白表達(dá)(P0.05),而升高SQSTM1/p62蛋白表達(dá)(P0.05)。(2)Western blot方法檢測(cè)α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá):在AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)上,pcDNA3.1-H19可升高α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá)(P0.05)。siRNA-H19可降低α-SMA、collagen Ⅰ蛋白表達(dá)(P0.05)。(3)qRT-PCR檢測(cè)H19 RNA、α-SMA、LC3B mRNA表達(dá):在AdIGFBPrP1轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ)上,pcDNA3.1-H19可升高H19、α-SMA、LC3B RNA表達(dá)(P0.05)。siRNA-H19可降低H19、α-SMA、LC3B RNA表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:上調(diào)H19可促進(jìn)IGFBPrP1誘導(dǎo)的HSCs自噬及活化;下調(diào)H19可抑制IGFBPrP1誘導(dǎo)的HSCs自噬及活化。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R575.2

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2 李黎;季漪;李文婷;馬艷霞;李沐涵;吳勉華;;基于細(xì)胞自噬的中醫(yī)藥抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥雜志;2019年01期

3 韓蘇夏;蔡夢(mèng)嬌;;自噬在腫瘤治療策略中的角色[J];西部醫(yī)學(xué);2018年09期

4 周岐鳴;劉洋;季光;宋海燕;;調(diào)節(jié)自噬改善非酒精性脂肪性肝病的藥物研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2018年10期

5 李曉瓊;何玲玲;李新毅;;自噬與中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病研究進(jìn)展[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2018年10期

6 馬文科;戴舒惠;羅鵬;楊悅凡;費(fèi)舟;;線粒體自噬的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2017年06期

7 付婉;董笛;趙穎;;自噬的相關(guān)分子機(jī)制[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2017年05期

8 方聰聰;毛善平;董慧敏;劉寶輝;王舜;;線粒體自噬與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J];卒中與神經(jīng)疾病;2017年02期

9 李旭卉;吳習(xí)習(xí);張凱;羅海霞;李敏;;線粒體自噬與癌癥關(guān)系的研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2017年09期

10 陳延斌;黃建安;;自噬在呼吸系統(tǒng)的研究現(xiàn)狀[J];中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志;2017年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 肖伊寧;呂佩源;;選擇性自噬的研究進(jìn)展[A];7th中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì)全國(guó)中青年神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)暨第十屆全國(guó)神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病與腦脊液細(xì)胞學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2014年

2 胡成楓;胡春蘭;陳良標(biāo);;自噬在斑馬魚細(xì)胞冷應(yīng)激過程中的作用機(jī)制探究[A];2017年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2017年

3 肖伊寧;呂佩源;;選擇性自噬的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2014年

4 秦正紅;粱中琴;陶陸陽(yáng);黃強(qiáng);劉春風(fēng);蔣星紅;倪宏;邢春根;;自噬在細(xì)胞生存與死亡中的作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

5 秦正紅;;自噬與腫瘤和神經(jīng)細(xì)胞生存——藥物作用的新靶位[A];全國(guó)生化與分子藥理學(xué)藥物靶點(diǎn)研討會(huì)論文摘要集[C];2008年

6 余慧芬;唐李;李妍;;自噬現(xiàn)象對(duì)腫瘤發(fā)生影響的研究進(jìn)展[A];2017第七屆泛環(huán)渤海生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2017年

7 王菲菲;邱學(xué)敏;王凌;;自噬對(duì)骨代謝的調(diào)節(jié)作用[A];第9屆中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科專業(yè)委員會(huì)第二次學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2017年

8 申森森;李林楠;徐林楠;白玉;劉虎威;;基于氣相色譜-高分辨質(zhì)譜的饑餓誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞自噬過程的代謝組學(xué)研究[A];第21屆全國(guó)色譜學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)及儀器展覽會(huì)會(huì)議論文集[C];2017年

9 任栓成;倪娜娜;胡志安;;睡眠覺醒期神經(jīng)元自噬活動(dòng)的變化[A];中國(guó)睡眠研究會(huì)第九屆學(xué)術(shù)年會(huì)匯編[C];2016年

10 蔣緒順;;自噬在棕櫚酸誘導(dǎo)的足細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制[A];2016年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2016年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 記者 李潔尉　通訊員 周飛;花櫚木通過“自噬”殺死癌細(xì)胞[N];科學(xué)時(shí)報(bào);2011年

2 王建新 主持;“自噬”的快車剛剛啟動(dòng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2016年

3 記者 周潔;解密“自噬”，抗癌治病更近一步[N];河北日?qǐng)?bào);2016年

4 記者 陸琦 見習(xí)記者 谷雙雙;細(xì)菌通過誘導(dǎo)線粒體自噬求存活[N];中國(guó)科學(xué)報(bào);2019年

5 本報(bào)記者 房琳琳;“自噬機(jī)制”帶來對(duì)抗衰老新希望[N];科技日?qǐng)?bào);2016年

6 生命學(xué)院;俞立課題組在《科學(xué)》發(fā)文揭示自噬調(diào)控的重要機(jī)制[N];新清華;2012年

7 本報(bào)實(shí)習(xí)生 劉如楠 記者 李晨陽(yáng);最新研究揭秘植物是怎樣衰老的[N];中國(guó)科學(xué)報(bào);2019年

8 本報(bào)首席記者 唐聞佳;上海與新科諾獎(jiǎng)得主頗有學(xué)術(shù)緣[N];文匯報(bào);2016年

9 記者 陶婷婷;成功揭示代謝降解調(diào)控新機(jī)制[N];上�？萍紙�(bào);2013年

10 記者 白毅;浙大二院發(fā)現(xiàn)大氣顆粒污染誘導(dǎo)呼吸道自噬性損傷新機(jī)制[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 鄭艷榕;軸突線粒體回運(yùn)促進(jìn)的神經(jīng)元線粒體自噬在缺血性神經(jīng)損傷中的保護(hù)作用研究[D];浙江大學(xué);2019年

2 毛立;外泌體和自噬在山羊副流感病毒3型感染中的作用研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

3 王現(xiàn)濤;MiR-30e-3p調(diào)控的自噬在冠狀動(dòng)脈微栓塞致心肌損傷中的作用及機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

4 張丹;黃蜀葵花總黃酮通過NF-κB信號(hào)通路調(diào)控自噬治療克羅恩病的作用機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

5 楊勃;小反芻獸疫病毒誘導(dǎo)宿主細(xì)胞持續(xù)自噬的分子機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2019年

6 張志華;京尼平苷對(duì)APP/PS1小鼠行為學(xué)損傷和病理變化的保護(hù)作用及分子機(jī)制—抑制mTOR信號(hào)通路增強(qiáng)自噬的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

7 黃婷娟;長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19通過調(diào)控自噬影響IGFBPrP1致小鼠肝纖維化形成的機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

8 孫蘭弟;基于提高親電性的策略設(shè)計(jì)天然導(dǎo)向的抗炎試劑和自噬激活劑及其作用機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

9 楊烽;Klotho對(duì)糖尿病腎臟病中細(xì)胞自噬作用的影響及其機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

10 曹文婷;miR-125b-5p在UVB影響SLE自噬中的作用機(jī)制[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊娟娟;家蠶Bmo-miR-34在脂肪體自噬發(fā)生過程中的功能研究[D];南陽(yáng)師范學(xué)院;2019年

2 黃燕寧;錳通過BNIP3介導(dǎo)的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元線粒體自噬[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

3 楊雄;兔自體動(dòng)靜脈瘺術(shù)后內(nèi)膜增生中的自噬現(xiàn)象[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

4 侯含;PVY侵染對(duì)煙草過氧化物酶體自噬的調(diào)控研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2019年

5 張陽(yáng)陽(yáng);自噬基因ATG13在人類紅系發(fā)育過程中的功能研究[D];鄭州大學(xué);2019年

6 王遠(yuǎn)卓;與家蠶自噬相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA的篩選和功能初探[D];南陽(yáng)師范學(xué)院;2019年

7 高久翔;FUNDC1在運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)骨骼肌線粒體自噬中的作用機(jī)制[D];北京體育大學(xué);2019年

8 楊永樂;見血封喉苷H誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞線粒體自噬機(jī)制研究[D];海南醫(yī)學(xué)院;2018年

9 王玉琳;自噬對(duì)PM_（2.5）誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎性小體活化的調(diào)控機(jī)制研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2019年

10 都沙沙;牙周炎對(duì)2型糖尿病大鼠胰腺組織自噬的影響及機(jī)制的初步研究[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2762027