發(fā)布時間：2020-07-18 02:29

【摘要】：目的：本次試驗以大鼠H4-ⅡE細胞作為研究對象,采用含有不同濃度乙醇之細胞培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng),觀察乙醇對H4-ⅡE細胞PPAR-α、AMPK-α1及細胞凋亡的影響。 方法：1、大鼠H4-ⅡE細胞以適量濃度接種于培養(yǎng)瓶中,加入DIdEM培養(yǎng)液(含10%胎牛血清、4500mg/L D-葡萄糖、584mg/L L-谷氨酰胺、3700mg/L Na2CO3、青霉素100u/m1、鏈霉素100μg/ml,pH值7.0-7.4。)置于37℃,5%C02細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每3-5日傳代1次,視細胞密度及后續(xù)操作需求以1：4-1：12比例傳代。分設對照組和實驗組,實驗組在上述培養(yǎng)液中分別加入乙醇并調定濃度至0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L。在培養(yǎng)12小時末進行凋亡檢測,在培養(yǎng)12h、24h、48h末進行HE染色和免疫組化染色。2、應用倒置顯微鏡、HE染色進行形態(tài)學觀察；免疫組化染色觀察PPARβ、AMPKα1在各組細胞內的表達；流式細胞術、Annexin V-FITC/PI雙染色、TUNEL染色檢測各組細胞凋亡。 結果：1、形態(tài)學：①倒置顯微鏡：對照組細胞為梭形,排列密集,體積較大,正常貼壁,胞膜完整,胞質豐富,飽滿透亮,分布均勻,核仁大小不一,可見核分裂相；乙醇組細胞數(shù)量減少明顯,部分明顯變圓,凋亡明顯增多。②HE染色：對照組細胞呈梭形,細胞排列致密,細胞之間空隙少,細胞體積大,胞漿豐富,胞核染色明顯,胞核中可見多個核仁,可有核分裂相；乙醇組細胞排列明顯疏松,部分細胞明顯變圓,胞漿濃縮,視野中凋亡細胞、顆粒明顯比對照組低濃度乙醇組增多。2、流式細胞術：乙醇干預組H4-ⅡE細胞正�；罴毎壤^對照組減少(P0.05),早期凋亡細胞比例增多(P0.05),晚期凋亡細胞及死亡細胞比例增多(P0.05)。3、Annexin V-FITC/PI雙染色：對照組：使用FITC濾鏡(藍光)觀察,極少數(shù)細胞可見紅色熒光,使用Rhodamine濾鏡(綠光)觀察,少數(shù)細胞可見綠色熒光；乙醇組細胞：使用FITC濾鏡觀察,可見較多紅色熒光,使用Rhodamine濾鏡觀察,可見較多綠色熒光,視野中細胞皺縮明顯,可見較多細胞碎片。4、TUNEL法檢測細胞凋亡：對照組細胞呈梭形,大多數(shù)細胞呈無色透明,個別細胞胞核呈藍色；乙醇組細胞排列明顯疏松,部分細胞明顯變圓,胞核被染色之細胞數(shù)量較低濃度乙醇組明顯增多(P0.05)。5、免疫組化染色：①乙醇對大鼠H4-ⅡE細胞PPAR-α表達的影響：與對照組相比,0.5M乙醇處理12h后H4-ⅡE細胞PPAR-α表達無顯著改變(P0.05),其他乙醇組H4-ⅡE細胞PPAR-α表達明顯減少(P0.05)；②乙醇對大鼠H4-ⅡE細胞AMPK-α1表達的影響：與對照組相比,0.5M乙醇處理12h后H4-ⅡE細胞AMPK-α1表達無顯著改變(P0.05),其他乙醇組H4-ⅡE細胞AMPK-α1表達明顯減少(P0.05)。 結論：1、乙醇減少肝細胞PPAR-α的表達；2、乙醇減少肝細胞AMPK α1的表達；3、乙醇誘導肝細胞凋亡與PPAR-α的表達下調有關。
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R575.5

【參考文獻】

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1 劉俠;;乙醇對慢性乙型病毒性肝炎影響的臨床分析[J];臨床和實驗醫(yī)學雜志;2007年02期

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本文編號：2760271