【摘要】：目的:探討乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBx)對(duì)體外培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白CD59和Crry表達(dá)的影響。方法:培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞分為乙型肝炎病毒(HBV)X基因轉(zhuǎn)染組(Ad-X)、空白足細(xì)胞組(B)和腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組(Ad),PT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HBVX基因轉(zhuǎn)染對(duì)CD59和Crry基因和蛋白的表達(dá),MTT法檢測(cè)其對(duì)補(bǔ)體激活的影響;觀察ERK1/2、P38MAPK、PI-3K通路抑制劑對(duì)足細(xì)胞CD59和Crry表達(dá)的影響。結(jié)果:與空白足細(xì)胞組(B)相比,腺病毒空載體組(Ad)對(duì)小鼠足細(xì)胞CD59和Crry的基因和蛋白表達(dá)無(wú)顯著影響(P值均0.05),轉(zhuǎn)染HBVX基因組(Ad-X )CD59在蛋白表達(dá)水平上顯著高于B組(P0.005)和Ad組(P0.005),在基因表達(dá)水平上也明顯高于B組(P0.05)和Ad組(P0.05)。Ad-X組Crry在蛋白表達(dá)水平上顯著高于B組(P0.005)和Ad組(P0.005),在基因表達(dá)水平上也明顯高于B組(P0.05)和Ad組(P0.05)。通路抑制劑加入Ad-X組后, SB203580組與無(wú)抑制劑的Ad-X組比較,CD59蛋白表達(dá)明顯降低(P0.01), Crry蛋白表達(dá)也明顯降低(P0.01)。LY294002組、U0126組、DMSO組與無(wú)抑制劑的Ad-X組比較CD59和Crry蛋白的表達(dá)無(wú)顯著差異(P值均0.05)。MTT法提示在各個(gè)血清稀釋點(diǎn)上,Ad-X組細(xì)胞裂解抑制率均明顯高于B組和Ad組(P值均0.05), B組和Ad組細(xì)胞存活率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:HBx可能通過(guò)活化P38MAPK通路上調(diào)小鼠足細(xì)胞CD59和Crry蛋白和基因的表達(dá),抑制補(bǔ)體介導(dǎo)的足細(xì)胞裂解,這可能導(dǎo)致HBV在足細(xì)胞潛伏感染,不易被清除,從而在HBV-GN發(fā)生中發(fā)揮作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R512.62;R692
【圖文】：

圖 1 分化態(tài)足細(xì)胞空白組（B）、腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組(Ad)、轉(zhuǎn)染 HBx 病毒組(Ad-X)CD59和 Crry 陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率（流式細(xì)胞術(shù)散點(diǎn)圖和統(tǒng)計(jì)后柱形圖），*表示 CD59 和 Crry 兩種蛋白Ad-X 組與對(duì)照組相比 P 值均<0.005.2. ERK1/2、P38MAPK、PI-3K 通路抑制劑對(duì)足細(xì)胞 CD59 和 Crry 表達(dá)的影響SB203580 組與 Ad-X 組比較， CD59 和 Crry 的表達(dá)明顯減少， P 均＜0.01,LY294002 組、U0126 組、DMSO 組與 Ad-X 組比較，CD59 和 Crry 的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見(jiàn)圖 2。

圖 2 各組細(xì)胞加入抑制劑后轉(zhuǎn)染 Ad-X 48 小時(shí)后表達(dá) CD59 和 Crry 的流式散點(diǎn)圖和統(tǒng)計(jì)柱形圖。*表示 CD59 和 Crry 兩種蛋白 SB 與 Ad-X 組相比 P 值均＜0.01。3. RT-PCR 結(jié)果 轉(zhuǎn)染 Ad-X 48 小時(shí)后 CD59 及 Crry mRNA 較空白組和腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組均表達(dá)增高（P 均<0.05）。而腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組和空白組 CD59 及 CrrymRNA 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)圖 3。半定量 RT-PCRCD59 和 Crry mRNA 凝膠電泳結(jié)果

圖 3 分化態(tài)足細(xì)胞空白組（B）、腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組(Ad)、轉(zhuǎn)染 HBx 病毒組(Ad-X)CD59 和Crry mRNA 表達(dá)的電泳凝膠圖和統(tǒng)計(jì)柱形圖（RT-PCR），*表示 P＜0.05。4. 表達(dá) HBx 的足細(xì)胞補(bǔ)體激活的抵抗性與空白組和腺病毒空載體轉(zhuǎn)染組比較，轉(zhuǎn)染 Ad-X 48 小時(shí)后的分化態(tài)足細(xì)胞對(duì)補(bǔ)體的激活有顯著的抑制作用，P 均＜0.05。見(jiàn)表 1 及圖 4。表 1 B 組、Ad 組及 Ad-X 組小鼠足細(xì)胞對(duì)人血清補(bǔ)體激活的相對(duì)裂解抑制率（xˉ±s）B Ad Ad-X1：4 0.17±0.17 0.18±0.18 0.43±0.1991：8 0.25±0.22 0.32±0.31 0.72±0.321：16 0.34±0.24 0.34±0.33 0.82±0.381：32 0.44±0.32 0.36±0.3 0.83±0.291：64 0.48±0.36 0.42±0.38 0.86±0.191：128 0.58±0.39 0.45±0.35 1.08±0.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 郭曉;潘];;ERK阻滯劑U0126對(duì)白血病細(xì)胞K562細(xì)胞周期的作用及機(jī)制[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年05期

2 李水仙,楊歡,肖波,胡玨,黃R

本文編號(hào)：2759082