發(fā)布時(shí)間：2020-07-16 19:02

【摘要】：幽門螺桿菌(Hp)是一種世界性流行的革蘭氏陰性細(xì)菌，Hp的人群感染率約20.80％，是十二指腸潰瘍和慢性活動(dòng)性胃炎的主要致病因素之一，與胃癌的發(fā)生有一定的關(guān)系。由此吸引了眾多學(xué)者對(duì)Hp的廣泛深入的研究，但仍有許多問題有待解決，如口腔是不是Hp的寄居環(huán)境之一；為何Hp感染后，臨床結(jié)局和轉(zhuǎn)歸有很大差異；如何判斷Hp根治性治療失敗后是屬再感染抑或復(fù)燃等。故本研究同時(shí)采用16sRNA和vacA為模板設(shè)計(jì)的引物，對(duì)唾液和胃粘膜中的Hp直接進(jìn)行擴(kuò)增，并與常規(guī)Hp檢測(cè)法--快速尿素酶(RUT)和組織學(xué)銀染法進(jìn)行比較，觀察其特異性和靈敏度。由于采用了一對(duì)以vacA基因的特殊部位為模板設(shè)計(jì)的引物，可將Hp擴(kuò)增出259bp、286bp兩種產(chǎn)物，而每一種Hp只能擴(kuò)增出一種片段，前者來源于可表達(dá)VacA蛋白的60190菌株的信號(hào)序列，稱為vacA_1；后者來源于不表達(dá)VacA蛋白的Tx30a菌株的信號(hào)序列，稱為vacA_2。同時(shí)，對(duì)Hp的vacA PCR產(chǎn)物進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(PCR-SSCP)，期望用Hp的毒力因子(vacA)，將不同Hp區(qū)分開來，尋找與臨床某一疾病相關(guān)的細(xì)菌DNA單鏈構(gòu)象。另外，根據(jù)PCR-SSCP分型結(jié)果，對(duì)3例DU的PCR產(chǎn)物行基因序列分析，觀察是否有某處或某幾處vacA基因有點(diǎn)突變或缺失及其與臨床疾病的關(guān)系。并利用Southern雜交來證實(shí)PCR產(chǎn)物的特異性。此外，利用蛋白印跡法(western blot)來判斷Hp的vacA和cagA基因型與表現(xiàn)型間的關(guān)系，以期建立一種簡(jiǎn)單、實(shí)用的臨床診斷法來初步判斷Hp的毒力強(qiáng)弱。最后，采用原位凋亡檢測(cè)法和電鏡分析，對(duì)Hp感染的胃十二指腸疾病進(jìn)行研究，來探討細(xì)胞凋亡與Hp感染在胃十二指腸疾病中的意義。本文結(jié)果及意義如下： 1．本文利用16sRNA和vacA為模板設(shè)計(jì)的引物對(duì)149例Hp陽性患者的胃粘膜直接行PCR檢測(cè)，其特異性和靈敏度均與臨床常規(guī)的Hp診斷法
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1997
【分類號(hào)】：R573
【圖文】：

andPCRassayofvacAZofsaliva，gastriebioPsysPeeiPCRassriebioPsysPecimens困)Se川mRUTIgGPositive困)困)GastriebioPsylogicstain一PositiveP(149)logiestain一negativeP(10)l(159)146/(149)77/(80)35/(149)2/(10)l/(4)159840/(10)159:Ote:括弧中的N代表每組實(shí)際可用的病例數(shù)NumbersinParenthesesindieatethenumberofavasamPlestestedineaehgrouPM65432IM

3以vacA標(biāo)準(zhǔn)參照物為模板的唾液和胃PCR產(chǎn)物在1.5%瓊脂糖上的1陰性對(duì)照，23陽性對(duì)照(11637，11639)4，5:各來自于同一病人，奇數(shù)為唾液標(biāo)本，偶數(shù)為胃粘膜標(biāo)本analysisofpCRproductsrfomvastomaeh.，6;7，8;9，10MpBR322lllinflInegativecontr0I;11，12rePresentaPatient，resPeetively，AgarosegeleleetroPherosis2，3Positoddnumbsaliva，evennumbershowinggastrie38bioPsysPeeimen

2M以vacA為模板的胃PCR產(chǎn)物在2%瓊脂掂上的電泳圖pBR322luinnl陰性對(duì)照2陽性對(duì)照3，4，5胃粘膜標(biāo)本garosegeleleetroPhoresisanalysisofPCRProductsfromvaeAin2lHinn1negativeeontrol2Positiveeontrol3，5，6gastriebioPsysP_286b

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

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相關(guān)會(huì)議論文 前2條

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本文編號(hào)：2758382