【摘要】：【目的】通過對潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者和健康人腸道菌群的多樣性、相似性以及種屬構(gòu)成等研究,闡明UC不同虛實(shí)證候間腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性,進(jìn)一步通過虛實(shí)證候與腸道菌群結(jié)構(gòu)差異的差異性分析,為闡明UC虛實(shí)證候的物質(zhì)基礎(chǔ)和病理機(jī)制以及UC不同虛實(shí)證候患者之間腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。【方法】以UC患者與健康志愿者為研究對象,建立中醫(yī)證候診斷、納入和排除標(biāo)準(zhǔn),分為濕熱內(nèi)蘊(yùn)證組、脾胃氣虛證組、脾虛濕熱證組和健康對照組,采集糞便標(biāo)本并提取糞便菌群總DNA;經(jīng)16Sr DNA V3區(qū)PCR擴(kuò)增后,采用變性梯度凝膠電泳(DGGE)進(jìn)行腸道菌群DNA指紋圖譜分析;Mi Seq測序技術(shù)開展腸道菌群16SV3+V4區(qū)高通量測序及生物信息學(xué)分析;基于16Sr DNA指紋圖譜和16SV3+V4區(qū)生物信息學(xué)數(shù)據(jù),研究分析UC不同虛實(shí)證候組患者與健康人群腸道菌群結(jié)構(gòu)的差異性�！窘Y(jié)果】腸道菌群DNA指紋圖譜分析結(jié)果表明:圖譜中三種證型所呈現(xiàn)的條帶數(shù)沒有明顯差異。三種UC證型患者腸道菌群多樣性、相似性有差異,并且三種UC證型的患者腸道菌群的組內(nèi)相似性系數(shù)高于組間相似性系數(shù)。脾胃氣虛證組UC患者組內(nèi)相似性系數(shù)最高,脾虛濕熱證組UC患者組內(nèi)相似性系數(shù)最低。三種證型中,濕熱內(nèi)蘊(yùn)證組UC患者的多樣性指數(shù)最低,脾胃氣虛證組UC患者的多樣性指數(shù)最高。16SV3+V4區(qū)測序及生物信息學(xué)分析結(jié)果表明:UC患者擬桿菌和厚壁菌門所占比例相對其他組較大且數(shù)量基本恒定,但它們在不同虛實(shí)證候組內(nèi)中所占的比例有顯著差異。厚壁菌門在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組及脾虛濕熱組中所占比例低于健康人組(P0.05),其中韋榮球菌在厚壁菌門中較為突出,在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組及脾虛濕熱組中所占比例低于健康人組(P0.05),其在脾胃氣虛組中所含比例高于濕熱內(nèi)蘊(yùn)組(P0.05)。變形桿菌門在脾虛濕熱組中所占比例高于脾胃氣虛組(P0.05)。變形桿菌門中嗜血桿菌在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組中所占比例高于脾胃氣虛組和脾虛濕熱組(P0.05)。擬桿菌門中擬桿菌和普氏菌在四組中所占比例也有所不同。擬桿菌在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組中所占比例高于健康人組(P0.05)。普氏菌在三組虛實(shí)證型的潰瘍性結(jié)腸炎受試者腸道菌群中所占比例均低于健康人組(P0.05)。放線菌門中棒狀桿菌在濕熱內(nèi)蘊(yùn)組中所占比例高于脾胃氣虛組(P0.05)。真桿菌屬在脾胃氣虛組和脾虛濕熱組中所占比例均小于健康人組(P0.05)。DGGE法和測序結(jié)果反映出的UC患者不同虛實(shí)證候組及健康人組的腸道菌群結(jié)構(gòu)差異性和相似性結(jié)果基本一致。【結(jié)論】1.UC三類虛實(shí)證候患者與健康人比較,腸道菌群的相似性、多樣性均存在差異。2.UC三類虛實(shí)證候患者與健康人比較,腸道菌群門水平和種屬水平的細(xì)菌構(gòu)成存在差異性,門水平上差異可能存在于厚壁菌門所占比例;種屬水平的差異可能存在于韋榮球菌、擬桿菌和普氏菌所占比例。3.UC三類虛實(shí)證候患者之間腸道菌群差異性可能存在于厚壁菌門和變形菌門的構(gòu)成比。
【學(xué)位授予單位】：陜西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R574.62
【圖文】：

PCR產(chǎn)物的完整性檢測結(jié)果

圍的確定（見圖 2）理，即當(dāng)變性劑濃度逐漸增大時(shí)，DNA雙 DNA雙鏈遷移的速率不同，最終導(dǎo)致停留量多的解開雙鏈所需要的濃度自然大，反原理可以區(qū)分出 DNA大小不同片段。槽中移動(dòng)的方向與增大凝膠濃度的方向互型，測量橫軸顯著變化的變性劑范圍，觀擴(kuò)增產(chǎn)物 DGGE 分析合適的變性梯度范圍

從左向右依次觀察條帶可以得到：標(biāo)記 2-24 號為濕熱內(nèi)蘊(yùn)證，1-36 號為脾胃氣虛證，4-43 號為脾虛濕熱證。對不同組之間進(jìn)行多樣性分析可以得到如下結(jié)果。首先比較樣本的條帶數(shù)目（表 5），可以看到三組證型的糞便樣本條帶數(shù)無顯著差別（P＞0.05）。多樣性用 Shannon（H’）表示（見圖 3）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 張聲生;;潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)診療共識意見[J];中華中醫(yī)藥雜志;2010年06期

2 柳樹英;楊志華;原睿;任耀全;;微生態(tài)制劑與腸道菌群平衡觀在小兒腹瀉中的應(yīng)用[J];西部中醫(yī)藥;2014年12期

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李e

本文編號：2756191