【摘要】：目的：重度黃疸患者交感神經(jīng)興奮性降低，并且自主神經(jīng)功能下降與血漿膽紅素濃度相關(guān)。交感神經(jīng)通過突觸前釋放乙酰膽堿（acetylcholine, ACh）作用于突觸后煙堿型乙酰膽堿受體（nicotinic acetylcholine receptors, nAChRs）通道調(diào)控節(jié)后纖維末端的遞質(zhì)（兒茶酚胺）釋放，從而調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)功能。頸上交感神經(jīng)節(jié)（superiorcervical ganglia, SCG）細(xì)胞上的nAChRs在突觸信息的加工、處理和傳遞過程中起重要作用。因此我們研究膽紅素對SCG上nAChRs通道電流的影響以闡明黃疸患者自主神經(jīng)功能降低的機(jī)制。 方法：將SD大鼠（5-12d）斷頭，快速取出SCG，放入含I型膠原酶、蛋白酶E和脫氧核糖核酸酶的氧飽和的31.5℃孵育液中消化25-40min，之后用吸管將消化好的神經(jīng)元細(xì)胞打散，獲取單個神經(jīng)元細(xì)胞，將其放置培養(yǎng)皿30min，灌流液沖洗后行膜片鉗實驗。所有的電生理測量均在室溫（22-25℃）下通過全細(xì)胞膜片鉗記錄模式進(jìn)行，玻璃電極采用P-97微電極拉制儀四部法拉制而成。利用微操縱儀將玻璃電極放置在神經(jīng)元上，當(dāng)封接阻抗大于1G時吸破電極腔內(nèi)細(xì)胞膜，形成全細(xì)胞封接，補償電阻。給與鉗制電壓-60mV，濾波1KHz，記錄乙酰膽堿受體通道電流。不同濃度的ACh和膽紅素等通過自制Y型快速加藥系統(tǒng)于細(xì)胞旁給藥。實驗所用灌流液中含有1umol/L阿托品，以阻止毒蕈堿受體的活化。數(shù)據(jù)采用PatchMaster和Origin8.0軟件進(jìn)行分析。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，配對資料t檢驗，p0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)果：在鉗制電壓-60mV下，ACh濃度依賴性的誘發(fā)一快速激活且快速衰減的內(nèi)向電流即乙酰膽堿受體電流（ACh-induced currents, IACh）。低濃度（0.5μmol/L）膽紅素使100μmol/L的ACh誘發(fā)的IACh增加1.13（P0.05）倍，脫敏感衰減率降低8.63%（P0.05）；而高濃度（5.0μmol/L）膽紅素使100μmol/L的ACh誘發(fā)的IACh分別降低72.61%（P0.05），脫敏感衰減率分別降低96.49%（P0.05）。4μM膽紅素干預(yù)下，100、200、400、800μM的ACh誘發(fā)電流的波幅分別為635.37±172.72、1669.67±177.02、4370.86±206.25和6916.9±73.66（pA）。Forskolin（PKA活化劑）使100μMACh誘發(fā)的相對IACh波幅由0.44±0.11降低到0.30±0.96（p0.05），相對脫敏感衰減率由0.05±0.07增加到0.30±0.29（p0.05）；而H-89（PKA抑制劑）使100μM ACh誘發(fā)的相對IACh峰值由0.38±0.05增加到0.43±0.08（p0.05），相對脫敏感衰減率由0.004±0.002增加到0.014±0.003（p0.05）。 結(jié)論：膽紅素以可逆性恢復(fù)的方式影響SCG細(xì)胞IACh。低濃度膽紅素明顯增強IACh，其機(jī)制可能與降低其通道脫敏感衰減率有關(guān)；高濃度膽紅素競爭性的抑制IACh，其機(jī)制可能與膽紅素競爭性結(jié)合ACh位點有關(guān)。膽紅素濃度依賴性的降低SCG細(xì)胞乙酰膽堿受體通道電流脫敏感衰減率。環(huán)磷酸腺苷-蛋白激酶A磷酸化途徑也參與了膽紅素對IACh的抑制作用的影響。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R575
【圖文】：

ACh激活nAChRs?

RAG對nAChfis通道電流影響的電流圖

ROC對nAChRs電流

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 郭志梅;劉芳;周春風(fēng);杜志方;;新生兒黃疸對心率變異性的影響及其臨床意義[J];臨床軍醫(yī)雜志;2010年04期

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3 張成密;沈浩;徐子鋒;王瑩恬;俞衛(wèi)鋒;鄭吉建;;咪達(dá)唑侖對大鼠頸上交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞乙酰膽堿受體通道的影響[J];中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2011年07期

本文編號：2756137