【摘要】：研究背景及目的 膽汁淤積是由于多種原因所導(dǎo)致的膽汁流動異常而引起的常見臨床綜合癥，直接導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷、肝功能衰竭。其共同的分子發(fā)生機(jī)制為：肝細(xì)胞表面膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋的表達(dá)異常。在生理狀態(tài)下，機(jī)體內(nèi)膽汁酸處于穩(wěn)定狀態(tài)，而分布于“極性化”肝細(xì)胞膜上的膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白系統(tǒng)的精密調(diào)節(jié)是維持這種穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵，它們主要包括：肝細(xì)胞頂膜的MRP2(multidrug resistance-associated protein2)、BSEP (Bile salt export pump)等；基底側(cè)膜的MRP3(multidrug resistance-associated protein3)、MRP4(multidrugresistance-associated protein4)等。先天或后天獲得性致病因素常導(dǎo)致肝細(xì)胞膜膽酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白異常表達(dá)，致使膽酸排泌障礙，膽汁酸穩(wěn)態(tài)失衡，發(fā)生、發(fā)展為膽汁淤積癥。正常情況下，MRP3低表達(dá)或不表達(dá)，而在膽汁淤積情況下則高表達(dá)。因此，膽汁淤積情況下MRP3高表達(dá)被認(rèn)為是肝臟自我保護(hù)性反應(yīng)機(jī)制之一。MRP4與MRP3相似，它能夠促使更多的膽汁酸排入血液。我們及國外同行前期在動物實(shí)驗(yàn)和人體標(biāo)本研究發(fā)現(xiàn)，MRP3分子在膽汁淤積中對保護(hù)肝細(xì)胞起到了關(guān)鍵作用。在膽汁淤積的大鼠模型、梗阻性黃疸及Dubin綜合征患者的肝臟組織標(biāo)本中，均發(fā)現(xiàn)了MRP3蛋白的高表達(dá)。而MRP4基因敲除的大鼠膽汁淤積的模型中發(fā)現(xiàn)其肝損傷的程度明顯嚴(yán)重于野生型大鼠膽汁淤積模型。 目前，膽汁淤積的臨床治療缺乏有效的藥物，UDCA是唯一應(yīng)用于臨床且公認(rèn)有一定療效的藥物，但其治療效果有限、個(gè)體差異大、副作用大；利福平、苯巴比妥等藥物的治療效果不理想。川西獐芽菜是治療“肝膽濕熱癥”功效獨(dú)特的名貴藥材。我們從中分離出了24種對治療膽汁淤積可能有效單體，其中發(fā)現(xiàn)龍膽苦苷不僅可以刺激MRP3分子的高表達(dá)，同時(shí)還可能上調(diào)促進(jìn)膽酸排泌的MRP2、MRP4、BSEP基因的表達(dá)。這在膽汁淤積狀態(tài)下將更有利于膽汁酸、膽紅素等有毒物質(zhì)及時(shí)排泌出肝細(xì)胞，起到保護(hù)肝臟的作用，其治療膽汁淤積的效果理論上也應(yīng)該更優(yōu)越于UDCA。因此，川西獐牙菜單體“龍膽苦苷”為解決“膽汁淤積的臨床治療缺乏特效藥物”這一難題提供了新的重要線索。 研究方法 1.龍膽苦苷50μM體外刺激HepG2細(xì)胞，以UDCA50μM為陽性對照、DMSO50μM為陰性對照。Real Time PCR檢測藥物對HepG2細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、MRP4及其相關(guān)核受體VDR、PXR、CAR、RXR及RAR基因mRNA表達(dá)的影響；Western Blot檢測藥物對HepG2細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、MRP4及其相關(guān)核受體VDR、PXR、CAR、RXR及RAR蛋白表達(dá)的影響。 2.建立膽道結(jié)扎的大鼠膽汁淤積模型，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組：龍膽苦苷100mg/kg、陽性對照組：UDCA90mg/kg、陰性對照組：生理鹽水。處理7d后，HE染色觀察肝臟損傷情況；Real Time PCR檢測大鼠肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Mrp3、Mrp4及其相關(guān)核受體VDR、PXR、CAR、RXR及RAR基因mRNA水平的變化；Western Blot檢測大鼠肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Mrp3、Mrp4及其相關(guān)核受體VDR、PXR、CAR、RXR及RAR蛋白水平的變化。 結(jié)果 1.細(xì)胞水平：Real Time PCR結(jié)果表明：龍膽苦苷不僅能夠明顯上調(diào)HepG2細(xì)胞表面膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、MRP4基因的表達(dá)也能夠調(diào)節(jié)核受體CAR、PXR基因mRNA的表達(dá)；Western Blot結(jié)果表明：在蛋白水平，龍膽苦苷即能刺激HepG2細(xì)胞表面膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、MRP4的表達(dá)，又能夠促進(jìn)其相關(guān)核受體CAR及PXR的表達(dá)，這與mRNA水平變化一致，且龍膽苦苷的作用明顯強(qiáng)于UDCA。 2.動物水平： Real Time PCR及Western Blot結(jié)果表明龍膽苦苷不僅在mRNA水平也能夠在蛋白水平調(diào)節(jié)肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Mrp3、Mrp4的表達(dá)且核受體CAR及PXR的表達(dá)也增高。 結(jié)論 本項(xiàng)研究的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均表明：龍膽苦苷能夠刺激肝細(xì)胞表面膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、MRP4及其相關(guān)核受體CAR及PXR在mRNA和蛋白水平的表達(dá)，且其作用明顯強(qiáng)于UDCA。因此，我們推測：龍膽苦苷通過核受體CAR及PXR調(diào)節(jié)肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP3、MRP4的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 杜永江;呂時(shí)銘;姚琦瑋;;ABCB11基因在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥中研究進(jìn)展[J];國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2008年04期

2 周雪玲;喬靜;;多藥耐藥相關(guān)蛋白家族生物學(xué)功能的研究現(xiàn)狀[J];海南醫(yī)學(xué);2010年20期

3 羅亮;夏先明;李波;;回腸Na~+/膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(IBAT)及相關(guān)疾病[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年03期

4 聶萌;王林;;肝細(xì)胞極性與膜蛋白分選的分子機(jī)制[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2014年01期

5 李亮亮;王建禎;;腦膠質(zhì)瘤超選擇動脈化療的研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2014年02期

6 李袤;劉付寶;耿小平;趙紅川;趙義軍;王國斌;張志功;黃帆;謝坤;方德寶;;安徽地區(qū)肝內(nèi)膽管結(jié)石危險(xiǎn)因素的流行病學(xué)研究[J];中華全科醫(yī)學(xué);2014年07期

7 王繼紅;李西川;蔣伶活;;第10個(gè)溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族(SLC10)的細(xì)胞功能[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2009年06期

8 李可洲;駱樂;姚豫桐;張曉;閆洪濤;;cFLIP和caspase-8在犬膽道良性損傷修復(fù)過程中的表達(dá)[J];世界華人消化雜志;2010年08期

9 孟強(qiáng);劉克辛;;轉(zhuǎn)運(yùn)體在肝臟中的作用[J];世界華人消化雜志;2011年09期

10 韓俊;彭惠萍;李遼閩;;法尼酯衍生物X受體調(diào)節(jié)代謝作用研究進(jìn)展[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;2011年13期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 黃永建;黃芩苷對小鼠巨細(xì)胞病毒肝炎的治療作用及其機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2011年

2 孫玉琳;應(yīng)用不同蛋白質(zhì)組研究策略分離鑒定肝臟和胰腺腫瘤相關(guān)蛋白[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

3 董秀山;腸道膽汁酸缺乏對肝臟再生的影響及其機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

4 孫永剛;核干細(xì)胞因子RNA干擾對HT29細(xì)胞CDX2表達(dá)的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 徐慶;中鏈脂肪酸對小鼠膽固醇代謝的調(diào)節(jié)及其機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

6 倪長偉;抗MRP3單鏈抗體與sTRAIL融合蛋白的克隆表達(dá)及其對多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的靶向凋亡誘導(dǎo)作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馮俊;腸道Na~+/膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)體與高脂血癥關(guān)系的研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

2 文正榮;建立大鼠膽管良性狹窄模型的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

3 胡凱;茶葉功能性成分體外降血脂的機(jī)理研究[D];華南理工大學(xué);2011年

4 張艷梅;藏茵陳單體成分龍膽苦苷、芒果苷對肝細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白MRP2和MRP3表達(dá)的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

5 徐俠;膽石病患者的膽汁酸成份分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

6 杜永江;浙江省12年妊娠合并重型肝炎死亡病例分析[D];浙江大學(xué);2008年

7 孟強(qiáng);頭孢妥侖膽汁排泄的分子機(jī)制及其對肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白調(diào)節(jié)作用的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

8 趙磊;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的誘導(dǎo)和肝細(xì)胞極化分子表達(dá)與調(diào)節(jié)[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

9 吳華春;梗阻性黃疸膽汁成分失衡在膽管損傷中的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

10 駱樂;NF-κB及其下游抗凋亡因子在膽道損傷愈合過程中的表達(dá)的基礎(chǔ)研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2010年

本文編號：2755631