【摘要】：熱量限制(Calories Restrictions, CR)有利于延長壽命,防止與年齡相關(guān)疾病的發(fā)生。蛋氨酸限制(Methionine Restrictions, MR)也表現(xiàn)出相似的作用。增強(qiáng)緊密連接(Tight Junction, TJ)蛋白Claudin表達(dá)、提高上皮細(xì)胞屏障功能,是MR的重要特征之一。作為蛋氨酸替代物的蛋氨酸羥基類似物(2-hydroxy-4-(methylthio) butanoic acid, HMTBA)及其鈣鹽(2-hydroxy-4-(methylthio) butyrate calcium, HMTBA-Ca)在體內(nèi)不能直接被吸收利用,必須先轉(zhuǎn)化為L-蛋氨酸才能參與機(jī)體代謝從而發(fā)揮作用,具有緩慢釋放蛋氨酸的特點(diǎn),可能達(dá)到MR的目的。本研究假設(shè)蛋氨酸類似物可發(fā)揮MR作用,調(diào)節(jié)TJ蛋白表達(dá)。旨在研究蛋氨酸類似物影響TJ蛋白表達(dá)的規(guī)律及機(jī)制。 以250只1日齡雄性羅斯肉雞(42±3g)為動(dòng)物模型,隨機(jī)分為對(duì)照組(Control)、蛋氨酸限制組(MR1、MR2、MR3)和蛋氨酸替代物組(H1、H2、H3、HC1、HC2.HC3)。分別飼喂基礎(chǔ)日糧添加不同劑量蛋氨酸與蛋氨酸替代物(蛋氨酸羥基類似物及其鈣鹽),在實(shí)驗(yàn)的第21日和第46日斷頸取血處死取樣,并測(cè)定體重和腹脂率。取十二指腸、空腸、回腸和盲腸,測(cè)定還原型與氧化型谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)、過氧化氫酶(CAT)、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)。采用熒光原位雜交-流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法(FISH-FC)分析盲腸內(nèi)容物中菌群結(jié)構(gòu)。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分析十二指腸、空腸和盲腸組織Claudin-3、Occludin、TLRs、MyD88、NF-κB、AvBDs、IL-2、 IL-8、IL-18等基因的表達(dá)。 21日齡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：H2與H3組均可顯著提高腸道組織T-AOC水平(P0.05),降低MDA水平(P0.05)。HC2與HC3組可顯著提高十二指腸、空腸和回腸的CAT水平并降低MDA含量(P0.05)。此外,H2組中十二指腸、回腸和盲腸的GSH/GSSG顯著提高(P0.05)。與Control相比,H3和HC3組中十二指腸、空腸的Claudin-3、Occludin基因相對(duì)表達(dá)量均顯著提高(P0.05),MR3組中十二指腸Claudin-3、Occludin基因表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05)。H3與HC3組中十二指腸TLRs、MyD88、NF-κB、AvBDs基因表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05),空腸TLR1、TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB、AvBD7基因表達(dá)也顯著上調(diào)(P0.05)。H2組可顯著提高盲腸中乳桿菌、雙歧桿菌等有益菌含量,使糞腸球菌、大腸桿菌等顯著降低。此外,H2、H3組的腹脂率顯著降低(P0.05)。相關(guān)性分析顯示,十二指腸Claudin-3、Occludin與MyD88、NF-κB、TLR4等基因均呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(P0.01),與CAT顯著正相關(guān)(P0.05),與MDA顯著負(fù)相關(guān)(P0.01)�？漳cClaudin-3、Occludin與MyD88、NF-κB、TLR2、TLR4、IL-2等免疫相關(guān)基因呈顯著正相關(guān)(P0.01)。46日齡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：H1組中十二指腸和回腸的T-AOC水平顯著提高(P0.05),空腸和盲腸的GSH/GSSG顯著升高(P0.05)。HCl組中回腸和盲腸的GSH/GSSG與T-AOC水平顯著提高(P0.05)。H1、H2、HC1和HC2組中空腸MDA含量顯著降低(P0.05)。H1與HC1組可顯著降低回腸MDA水平(P0.05)。H2與HC2組中十二指腸Claudin-3、Occludin、TLRs、MyD88、NF-κB、AvBDs基因表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05),空腸Claudin-3、Occludin、TLR1、TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB、AvBD7基因表達(dá)顯著上調(diào)(P0.05)。H2組盲腸中乳桿菌、雙歧桿菌等有益菌含量顯著升高,糞腸球菌、大腸桿菌含量顯著降低。相關(guān)性分析顯示,十二指腸Claudin-3、Occludin基因與GSH/GSSG、MyD88、NF-κB、TLR4、IL-2等呈顯著正相關(guān)(P0.01),與MDA顯著負(fù)相關(guān)(P0.01)�？漳cClaudin-3、Occludin基因與MyD88、NF-κB、TLR4、TLR6等基因顯著正相關(guān)(P0.01),與MDA顯著負(fù)相關(guān)(P0.01)。說明蛋氨酸替代物可能通過影響腸道氧化還原狀態(tài)以及腸道菌群從而調(diào)節(jié)TLRs的表達(dá),并通過TLRs傳遞信號(hào)激活MyD88、NF-κB等基因,最終影響TJ相關(guān)蛋白Claudin-3、Occludin以及AvBDs、細(xì)胞因子等的表達(dá)。 本研究主要結(jié)論為：1)蛋氨酸限制與蛋氨酸羥基類似物均能提高雞腸道TJ相關(guān)蛋白Claudin-3、Occludin基因表達(dá)。2)蛋氨酸羥基類似物能夠緩解腸道氧化應(yīng)激,提高其抗氧化能力,并且效果優(yōu)于蛋氨酸限制。此外,腸道抗氧化能力的增強(qiáng)與TJ蛋白表達(dá)上調(diào)有關(guān)。3)蛋氨酸羥基類似物能夠激活TLR-MyD88/NF-κB-β-防御素信號(hào)系統(tǒng),是其上調(diào)TJ蛋白表達(dá)的原因之一。4)調(diào)節(jié)腸道菌群構(gòu)成是蛋氨酸羥基類似物有別于蛋氨酸限制的特征,促進(jìn)乳桿菌、雙歧桿菌增殖是其上調(diào)TJ蛋白表達(dá)的原因之一。本研究對(duì)闡明MR影響TJ相關(guān)蛋白表達(dá)機(jī)制和提出利用蛋氨酸羥基類似物改善腸道功能的營養(yǎng)措施具有一定理論和應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R574.62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2755594