【摘要】：【目的】 HSP47在器官纖維化形成過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,能與多種類型膠原及前膠原肽特異性結(jié)合,輔助膠原蛋白的正確折疊,是前膠原正常加工、合成和分泌所需的分子伴侶,而HSP47與肝纖維化的研究目前尚處于探索階段,尤其是在血吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵肉芽腫的影響下,HSP47的表達(dá)及功能尚需進(jìn)一步探討。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)收集臨床病例及建立小鼠模型,研究HSP47在慢性血吸蟲(chóng)病肝纖維化中的表達(dá)狀況并探討相關(guān)機(jī)制。 【方法】 1.收集2008年～2010年間同濟(jì)醫(yī)院門(mén)診和住院部的部分血吸蟲(chóng)病肝纖維化患者肝穿標(biāo)本及臨床資料(20例);另收集病理證實(shí)未發(fā)生肝纖維化者(5例)。肝組織行免疫組織化學(xué)和Real-time PCR檢測(cè)HSP47的表達(dá),此外行HE染色和Masson染色觀察病理改變和膠原纖維沉積狀況。 2.建立實(shí)驗(yàn)性血吸蟲(chóng)病肝纖維化小鼠模型:采用Balb/c小鼠,用血吸蟲(chóng)尾蚴經(jīng)腹部皮膚感染,同時(shí)設(shè)正常對(duì)照組比較。感染后第12周時(shí)取小鼠肝臟,制作肝組織石蠟切片行HE及Masson染色,免疫組織化學(xué)和Real-time PCR反應(yīng)檢測(cè)HSP47的表達(dá)。 【結(jié)果】 1.血吸蟲(chóng)病肝纖維化組肝臟標(biāo)本與對(duì)照組肝臟標(biāo)本相比,在肝纖維化發(fā)展過(guò)程中HSP47及膠原表達(dá)明顯增多,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。HSP47主要分布于肉芽腫周圍活化的HSC胞漿中。 2.實(shí)驗(yàn)性血吸蟲(chóng)肝纖維化小鼠模型中,于感染尾蚴后第12周取肝組織檢測(cè),感染組與對(duì)照組相比,HSP47表達(dá)增多,差別有顯著性差異(P0.05),且陽(yáng)性表達(dá)多分布于肉芽腫周圍活化的HSC胞漿中。 【結(jié)論】 1. HSP47的表達(dá)促進(jìn)肝纖維化的發(fā)展,其過(guò)程可能是通過(guò)調(diào)節(jié)HSC細(xì)胞的功能,影響膠原的分泌,使得ECM的成分發(fā)生變化。 2. HSP47的表達(dá)多局限于活化的HSC中,推測(cè)HSP47可能是眾多刺激HSC活化的因子作用通路下游的關(guān)鍵蛋白之一,參與ECM過(guò)多合成和分泌。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R575.2
【圖文】：

血吸蟲(chóng)病患者組（20 例） 對(duì)75.00% 44.80±10.68 L) 30.75±13.75 L) 26.10±12.91 ol/L) 13.47±4.03 ol/L) 3.48±1.46 27.45±15.48 3.00±0.92 纖維化患者肝組織 HE 病理染色及 Masson纖維化患者行肝穿刺送病理活檢。光鏡下 HE 染色卵肉芽腫為中心發(fā)生干線性纖維化為特點(diǎn)，蟲(chóng)卵周由肝間質(zhì)細(xì)胞包裹，纖維組織延肉芽腫周圍延伸。細(xì)胞聚集浸潤(rùn)的地方膠原沉積較多，呈明顯灰藍(lán)色

3. 免疫組化檢測(cè)肝組織中 HSP47 和α-SMA 的表達(dá)：經(jīng)免疫組化實(shí)驗(yàn)，20 例血吸蟲(chóng)病肝纖維化患者肝穿組織中有 17 例 HSP47 檢測(cè)陽(yáng)性(陽(yáng)性率 85% ) ，棕黃色顆粒代表 HSP47 陽(yáng)性，可見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)的范圍集中于纖維化區(qū)域。紅色部分代表α-SMA 陽(yáng)性（用于標(biāo)記活化 HSC），陽(yáng)性部分集中在纖維化區(qū)域。行雙染實(shí)驗(yàn)后，棕黃色顆粒與紅色區(qū)域大部分重合說(shuō)明 HSP47 主要表達(dá)于活化HSC（α-SMA 標(biāo)記）中。而對(duì)照組肝組織中未見(jiàn)明顯的 HSP47 表達(dá)。

HSP47 α-SMA 圖 2 血吸蟲(chóng)病肝纖維化患者肝組織4. RT-PCR 檢測(cè)肝組織中 HSP47 的在血吸蟲(chóng)病肝纖維化患者肝組織中，可中只見(jiàn) HSP47 極弱的表達(dá)，其分子量大小約為 189bp。1 2 3 4 5 6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

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本文編號(hào)：2752138