【摘要】：【目的】 HSP47在器官纖維化形成過程中發(fā)揮著重要作用,能與多種類型膠原及前膠原肽特異性結合,輔助膠原蛋白的正確折疊,是前膠原正常加工、合成和分泌所需的分子伴侶,而HSP47與肝纖維化的研究目前尚處于探索階段,尤其是在血吸蟲蟲卵肉芽腫的影響下,HSP47的表達及功能尚需進一步探討。本實驗旨在通過收集臨床病例及建立小鼠模型,研究HSP47在慢性血吸蟲病肝纖維化中的表達狀況并探討相關機制。 【方法】 1.收集2008年～2010年間同濟醫(yī)院門診和住院部的部分血吸蟲病肝纖維化患者肝穿標本及臨床資料(20例);另收集病理證實未發(fā)生肝纖維化者(5例)。肝組織行免疫組織化學和Real-time PCR檢測HSP47的表達,此外行HE染色和Masson染色觀察病理改變和膠原纖維沉積狀況。 2.建立實驗性血吸蟲病肝纖維化小鼠模型:采用Balb/c小鼠,用血吸蟲尾蚴經(jīng)腹部皮膚感染,同時設正常對照組比較。感染后第12周時取小鼠肝臟,制作肝組織石蠟切片行HE及Masson染色,免疫組織化學和Real-time PCR反應檢測HSP47的表達。 【結果】 1.血吸蟲病肝纖維化組肝臟標本與對照組肝臟標本相比,在肝纖維化發(fā)展過程中HSP47及膠原表達明顯增多,差別有統(tǒng)計學差異(P0.05)。HSP47主要分布于肉芽腫周圍活化的HSC胞漿中。 2.實驗性血吸蟲肝纖維化小鼠模型中,于感染尾蚴后第12周取肝組織檢測,感染組與對照組相比,HSP47表達增多,差別有顯著性差異(P0.05),且陽性表達多分布于肉芽腫周圍活化的HSC胞漿中。 【結論】 1. HSP47的表達促進肝纖維化的發(fā)展,其過程可能是通過調節(jié)HSC細胞的功能,影響膠原的分泌,使得ECM的成分發(fā)生變化。 2. HSP47的表達多局限于活化的HSC中,推測HSP47可能是眾多刺激HSC活化的因子作用通路下游的關鍵蛋白之一,參與ECM過多合成和分泌。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R575.2
【圖文】：

血吸蟲病患者組（20 例） 對75.00% 44.80±10.68 L) 30.75±13.75 L) 26.10±12.91 ol/L) 13.47±4.03 ol/L) 3.48±1.46 27.45±15.48 3.00±0.92 纖維化患者肝組織 HE 病理染色及 Masson纖維化患者行肝穿刺送病理活檢。光鏡下 HE 染色卵肉芽腫為中心發(fā)生干線性纖維化為特點，蟲卵周由肝間質細胞包裹，纖維組織延肉芽腫周圍延伸。細胞聚集浸潤的地方膠原沉積較多，呈明顯灰藍色

3. 免疫組化檢測肝組織中 HSP47 和α-SMA 的表達：經(jīng)免疫組化實驗，20 例血吸蟲病肝纖維化患者肝穿組織中有 17 例 HSP47 檢測陽性(陽性率 85% ) ，棕黃色顆粒代表 HSP47 陽性，可見陽性表達的范圍集中于纖維化區(qū)域。紅色部分代表α-SMA 陽性（用于標記活化 HSC），陽性部分集中在纖維化區(qū)域。行雙染實驗后，棕黃色顆粒與紅色區(qū)域大部分重合說明 HSP47 主要表達于活化HSC（α-SMA 標記）中。而對照組肝組織中未見明顯的 HSP47 表達。

HSP47 α-SMA 圖 2 血吸蟲病肝纖維化患者肝組織4. RT-PCR 檢測肝組織中 HSP47 的在血吸蟲病肝纖維化患者肝組織中，可中只見 HSP47 極弱的表達，其分子量大小約為 189bp。1 2 3 4 5 6

【參考文獻】

相關期刊論文 前7條

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本文編號：2752138