【摘要】：肝硬化是世界范圍的疾病,嚴重威脅人們的身體健康。肝纖維化是許多慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)階段。硬化的肝臟能否轉(zhuǎn)歸正常目前還不清楚,但近來研究表明通過有效治療,纖維化肝臟能夠恢復正常,因此肝纖維化階段是治療的關鍵階段。肝纖維化是損傷修復的反應,包含著肝細胞的凋亡壞死和再生,慢性炎癥反應,基質(zhì)的合成和降解等過程�？估w維化研究和治療主要圍繞這幾方面進行。 Notch信號是進化上高度保守的信號途徑之一,介導相鄰細胞間直接的信號轉(zhuǎn)導,廣泛參與細胞命運決定,細胞增殖,分化,凋亡等生理病理過程。但是目前還沒有Notch信號與肝纖維化關系的研究。以往研究表明Notch信號參與調(diào)節(jié)肝再生和膽管發(fā)育,并且在免疫細胞的發(fā)育和功能調(diào)節(jié)中起著十分重要的作用,因此我們推測Notch信號在肝纖維化中必然發(fā)揮重要作用。 我們主要進行了如下幾方面的研究: 1.建立小鼠CCl4肝纖維化模型,實時定量PCR和免疫熒光方法檢測肝臟Notch信號變化。 2.在RBP-J敲除小鼠上建立肝纖維化模型,HE、Masson、Sirius Red和αSMA等肝臟組織學染色檢測Notch信號阻斷后肝纖維化水平。 3.骨髓移植實驗判斷RBP-J敲除影響的肝臟本身因素和骨髓來源的因素在肝纖維化中的作用。 4. FACS分析肝臟浸潤的炎性細胞,檢測發(fā)生異常變化的細胞群。 5.檢測巨噬細胞的功能變化,主要包括吞噬能力,MMPs的表達和巨噬細胞的極化。 6. microRNA芯片技術篩選因RBP-J敲除而變化的miRNAs。 7.體內(nèi)外實驗以候選miRNA對巨噬細胞進行功能挽救。結論:肝纖維化過程中Notch信號激活;RBP-J敲除后肝臟有大量的炎性細胞浸潤,肝損傷加重,肝纖維化水平明顯加重;骨髓移植實驗發(fā)現(xiàn)Notch信號部分通過骨髓來源的細胞群影響肝纖維化水平;FACS檢測發(fā)現(xiàn)RBP-J敲除小鼠肝臟浸潤有大量的中性粒細胞和巨噬細胞;RBP-J敲除小鼠肝纖維化的緩解減慢;RBP-J敲除巨噬細胞吞噬能力下降,MMP2和MMP13的表達水平下降,并向傷口愈合型巨噬細胞極化;Notch信號通過間接的途徑調(diào)節(jié)MMP2和MMP13的表達;發(fā)現(xiàn)一組因RBP-J敲除而變化的miRNAs,其中miR-188-5p在Notch阻斷后表達上調(diào);3’UTR報告基因?qū)嶒炞C明miR-188-5p調(diào)節(jié)MMP2和MMP13;Notch信號抑制miR-188-5p所在的非編碼的轉(zhuǎn)錄本Clcn5-005的表達;體外LPS刺激的巨噬細胞促進小鼠肝纖維化的緩解,當RBP-J敲除時這種作用消失,進一步抑制miR-188-5p時又能恢復促肝纖維化緩解的作用。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R575.2
【圖文】：

圖 1 肝臟慢性損傷與肝硬化圖片來源于參考文獻[2]（一）肝星型細胞 HSCs 與肝纖維化隨著人們對肝星狀細胞（HSCs）的了解肝纖維化的研究迅速增多。肝星狀細胞又稱為貯脂細胞，Ito細胞，是膠原纖維的主要分泌細胞[20]。肝臟由許多特化的細胞組成，它們行使各種不同的功能[21]。其中HSCs位于竇血管內(nèi)皮與肝細胞板之間的間隙，占正常肝臟的 15%，是ECM的主要來源細胞HSCs處于靜息狀態(tài)時，壽命長，核周有大量脂滴，其中富含維生素A。當肝組織受到慢性損傷時，HSCs發(fā)生轉(zhuǎn)分化，分化為肌成纖維樣細胞。此時富含維生素A的脂滴丟失，出現(xiàn)大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復合物[22-24]。不同于一般的成纖維細胞，肌成纖維樣細胞表達骨架蛋白αSMA和GFAP[25, 26]。肝星型細胞 HSCs 的活化

圖 2 正常肝臟組織結構和肝臟損傷后肝臟各種細胞的改變圖片來源于文獻[24]啟動階段HSCs最早期的改變因素是臨近細胞的旁分泌刺激物，包括Kupffer細胞，肝細胞，淋巴細胞，白細胞和血竇內(nèi)皮細胞[3, 27]。Kuffer細胞的浸潤和活化在HSCs細胞的活化過程中發(fā)揮著十分重要的作用。Kuffer細胞能夠通過活性氧物質(zhì)ROS，細胞因子TGF-β，TNFα，MMP9等刺激HSCs細胞增殖，基質(zhì)的合成和類視黃醇的丟失[28]。Nieto等的研究表明損傷的肝細胞能釋放ROS，而ROS能促進HSCs分泌膠原。在體外培養(yǎng)模型中，加入抗氧化劑CYP2E1 抑制劑和過氧化氫酶，能降低HSCs的活化[29, 30]。此外凋亡的肝細胞也可能是一種促纖維化的刺激物，Canbay等證明凋亡小體能促進HSCs分泌膠原[31-34]。淋巴細胞，特別是CD4+的輔助性T細胞（Th）在肝纖維化過程中發(fā)揮重

第四軍醫(yī)大學博士學位論文HSCs，促進膠原表達和細胞增殖[37]。在肝損傷時募集到肝臟的中性粒細胞也能調(diào)節(jié)HSCs的行為。中性粒是ROS的重要來源，它們通過超氧化物直接刺激HSCs的膠原合成[38]。除中性粒細胞后并不影響肝纖維化的發(fā)展[39]，這提示中性粒細胞在肝損早期發(fā)揮作用，且并非必不可少。內(nèi)皮細胞也參與 HSCs 的活化，它們能分泌纖維粘連蛋白，使 TG活，從而發(fā)揮促肝纖維化的角色。

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 賈繼東,莊輝;中國慢性乙型肝炎治療進展研討會會議紀要[J];中華肝臟病雜志;2004年11期

2 ;Inhibition on the production of collagen type Ⅰ, Ⅲ of activated hepatic stellate cells by antisense TIMP-1 recombinant plasmid[J];World Journal of Gastroenterology;2003年02期

本文編號：2751684