【摘要】：肝硬化是世界范圍的疾病,嚴(yán)重威脅人們的身體健康。肝纖維化是許多慢性肝病發(fā)展至肝硬化的必經(jīng)階段。硬化的肝臟能否轉(zhuǎn)歸正常目前還不清楚,但近來(lái)研究表明通過(guò)有效治療,纖維化肝臟能夠恢復(fù)正常,因此肝纖維化階段是治療的關(guān)鍵階段。肝纖維化是損傷修復(fù)的反應(yīng),包含著肝細(xì)胞的凋亡壞死和再生,慢性炎癥反應(yīng),基質(zhì)的合成和降解等過(guò)程�？估w維化研究和治療主要圍繞這幾方面進(jìn)行。 Notch信號(hào)是進(jìn)化上高度保守的信號(hào)途徑之一,介導(dǎo)相鄰細(xì)胞間直接的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),廣泛參與細(xì)胞命運(yùn)決定,細(xì)胞增殖,分化,凋亡等生理病理過(guò)程。但是目前還沒(méi)有Notch信號(hào)與肝纖維化關(guān)系的研究。以往研究表明Notch信號(hào)參與調(diào)節(jié)肝再生和膽管發(fā)育,并且在免疫細(xì)胞的發(fā)育和功能調(diào)節(jié)中起著十分重要的作用,因此我們推測(cè)Notch信號(hào)在肝纖維化中必然發(fā)揮重要作用。 我們主要進(jìn)行了如下幾方面的研究: 1.建立小鼠CCl4肝纖維化模型,實(shí)時(shí)定量PCR和免疫熒光方法檢測(cè)肝臟Notch信號(hào)變化。 2.在RBP-J敲除小鼠上建立肝纖維化模型,HE、Masson、Sirius Red和αSMA等肝臟組織學(xué)染色檢測(cè)Notch信號(hào)阻斷后肝纖維化水平。 3.骨髓移植實(shí)驗(yàn)判斷RBP-J敲除影響的肝臟本身因素和骨髓來(lái)源的因素在肝纖維化中的作用。 4. FACS分析肝臟浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞,檢測(cè)發(fā)生異常變化的細(xì)胞群。 5.檢測(cè)巨噬細(xì)胞的功能變化,主要包括吞噬能力,MMPs的表達(dá)和巨噬細(xì)胞的極化。 6. microRNA芯片技術(shù)篩選因RBP-J敲除而變化的miRNAs。 7.體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)以候選miRNA對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行功能挽救。結(jié)論:肝纖維化過(guò)程中Notch信號(hào)激活;RBP-J敲除后肝臟有大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝損傷加重,肝纖維化水平明顯加重;骨髓移植實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)部分通過(guò)骨髓來(lái)源的細(xì)胞群影響肝纖維化水平;FACS檢測(cè)發(fā)現(xiàn)RBP-J敲除小鼠肝臟浸潤(rùn)有大量的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞;RBP-J敲除小鼠肝纖維化的緩解減慢;RBP-J敲除巨噬細(xì)胞吞噬能力下降,MMP2和MMP13的表達(dá)水平下降,并向傷口愈合型巨噬細(xì)胞極化;Notch信號(hào)通過(guò)間接的途徑調(diào)節(jié)MMP2和MMP13的表達(dá);發(fā)現(xiàn)一組因RBP-J敲除而變化的miRNAs,其中miR-188-5p在Notch阻斷后表達(dá)上調(diào);3’UTR報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證明miR-188-5p調(diào)節(jié)MMP2和MMP13;Notch信號(hào)抑制miR-188-5p所在的非編碼的轉(zhuǎn)錄本Clcn5-005的表達(dá);體外LPS刺激的巨噬細(xì)胞促進(jìn)小鼠肝纖維化的緩解,當(dāng)RBP-J敲除時(shí)這種作用消失,進(jìn)一步抑制miR-188-5p時(shí)又能恢復(fù)促肝纖維化緩解的作用。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R575.2
【圖文】：

圖 1 肝臟慢性損傷與肝硬化圖片來(lái)源于參考文獻(xiàn)[2]（一）肝星型細(xì)胞 HSCs 與肝纖維化隨著人們對(duì)肝星狀細(xì)胞（HSCs）的了解肝纖維化的研究迅速增多。肝星狀細(xì)胞又稱為貯脂細(xì)胞，Ito細(xì)胞，是膠原纖維的主要分泌細(xì)胞[20]。肝臟由許多特化的細(xì)胞組成，它們行使各種不同的功能[21]。其中HSCs位于竇血管內(nèi)皮與肝細(xì)胞板之間的間隙，占正常肝臟的 15%，是ECM的主要來(lái)源細(xì)胞HSCs處于靜息狀態(tài)時(shí)，壽命長(zhǎng)，核周有大量脂滴，其中富含維生素A。當(dāng)肝組織受到慢性損傷時(shí)，HSCs發(fā)生轉(zhuǎn)分化，分化為肌成纖維樣細(xì)胞。此時(shí)富含維生素A的脂滴丟失，出現(xiàn)大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合物[22-24]。不同于一般的成纖維細(xì)胞，肌成纖維樣細(xì)胞表達(dá)骨架蛋白αSMA和GFAP[25, 26]。肝星型細(xì)胞 HSCs 的活化

圖 2 正常肝臟組織結(jié)構(gòu)和肝臟損傷后肝臟各種細(xì)胞的改變圖片來(lái)源于文獻(xiàn)[24]啟動(dòng)階段HSCs最早期的改變因素是臨近細(xì)胞的旁分泌刺激物，包括Kupffer細(xì)胞，肝細(xì)胞，淋巴細(xì)胞，白細(xì)胞和血竇內(nèi)皮細(xì)胞[3, 27]。Kuffer細(xì)胞的浸潤(rùn)和活化在HSCs細(xì)胞的活化過(guò)程中發(fā)揮著十分重要的作用。Kuffer細(xì)胞能夠通過(guò)活性氧物質(zhì)ROS，細(xì)胞因子TGF-β，TNFα，MMP9等刺激HSCs細(xì)胞增殖，基質(zhì)的合成和類視黃醇的丟失[28]。Nieto等的研究表明損傷的肝細(xì)胞能釋放ROS，而ROS能促進(jìn)HSCs分泌膠原。在體外培養(yǎng)模型中，加入抗氧化劑CYP2E1 抑制劑和過(guò)氧化氫酶，能降低HSCs的活化[29, 30]。此外凋亡的肝細(xì)胞也可能是一種促纖維化的刺激物，Canbay等證明凋亡小體能促進(jìn)HSCs分泌膠原[31-34]。淋巴細(xì)胞，特別是CD4+的輔助性T細(xì)胞（Th）在肝纖維化過(guò)程中發(fā)揮重

第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文HSCs，促進(jìn)膠原表達(dá)和細(xì)胞增殖[37]。在肝損傷時(shí)募集到肝臟的中性粒細(xì)胞也能調(diào)節(jié)HSCs的行為。中性粒是ROS的重要來(lái)源，它們通過(guò)超氧化物直接刺激HSCs的膠原合成[38]。除中性粒細(xì)胞后并不影響肝纖維化的發(fā)展[39]，這提示中性粒細(xì)胞在肝損早期發(fā)揮作用，且并非必不可少。內(nèi)皮細(xì)胞也參與 HSCs 的活化，它們能分泌纖維粘連蛋白，使 TG活，從而發(fā)揮促肝纖維化的角色。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 賈繼東,莊輝;中國(guó)慢性乙型肝炎治療進(jìn)展研討會(huì)會(huì)議紀(jì)要[J];中華肝臟病雜志;2004年11期

2 ;Inhibition on the production of collagen type Ⅰ, Ⅲ of activated hepatic stellate cells by antisense TIMP-1 recombinant plasmid[J];World Journal of Gastroenterology;2003年02期

本文編號(hào)：2751684