【摘要】： 目的: 胃粘膜腸上皮化生(Intestinal metaplasia, IM)是腸型胃癌發(fā)病機(jī)制Correa's級(jí)聯(lián)反應(yīng)的一個(gè)中間步驟,一般被認(rèn)為是一種癌前病變,盡管這個(gè)問(wèn)題仍然存在爭(zhēng)議。胃粘膜IM發(fā)生的機(jī)制還沒(méi)有被詳細(xì)闡明。如果我們想要預(yù)防腫瘤從這些病變中發(fā)生,就有必要研究控制這個(gè)過(guò)程的因子。研究表明干細(xì)胞及其后代從胃表型轉(zhuǎn)變?yōu)槟c表型的過(guò)程的啟動(dòng)常常是由轉(zhuǎn)錄因子控制的。 已有一些關(guān)于胃粘膜IM中腸轉(zhuǎn)錄因子Cdx1和Cdx2表達(dá)及功能方面的研究,但控制胃表型的因子還知之甚少,一個(gè)候選者就是含有Sry樣HMG盒子的轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一Sox2基因。我們?cè)O(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)來(lái)闡明轉(zhuǎn)錄因子Cdx2和Sox2是否以及如何調(diào)控胃粘膜IM的表型轉(zhuǎn)變。 方法: 1.使用免疫組化方法檢測(cè)80例病理學(xué)診斷為胃炎、輕度IM、中度IM和重度IM的石蠟包埋胃粘膜標(biāo)本中SOX2和CDX2蛋白的表達(dá);使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)40例病理學(xué)診斷為胃炎、輕度IM和中重度IM的胃鏡活檢標(biāo)本中Sox2和Cdx2mRNA表達(dá)。 2.使用甲基化特異性PCR檢測(cè)40例病理學(xué)診斷為胃炎、輕度IM和中重度IM的內(nèi)鏡活檢胃粘膜組織的啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)。 3.將pcDNA3.1 /Cdx2質(zhì)粒和Sox2siRNAs分別及共同轉(zhuǎn)染到人胃上皮細(xì)胞系GES-1中分別使Cdx2上調(diào)和Sox2下調(diào)。RT-PCR檢測(cè)Muc2、Sox2和Cdx2 mRNA的表達(dá)改變。將腸杯狀細(xì)胞標(biāo)志物Muc2 mRNA的出現(xiàn),視為完成腸型轉(zhuǎn)化。 結(jié)果: 1. SOX2和CDX2蛋白分別定位于正常胃和腸上皮細(xì)胞胞核。胃炎、輕度IM組、中度IM組和重度IM組中SOX2和CDX2蛋白陽(yáng)性率分別為94.4 % vs5.6%、75%vs50%、23.5%vs85.7%、9.5%vs90.5%,差異有顯著性(P0.05)。在化生腺體中有SOX2蛋白的減少和CDX2蛋白的異位表達(dá)。 2.胃炎組、輕度IM組、中重度IM組Sox2和Cdx2mRNA水平分別為0.5778±0.0778 vs 0.0517±0.0218、0.1496±0.0384 vs 0.1402±0.0300、0.1131±0.0384vs 0.3453±0.0537,差異有顯著性(P0.05)。隨著IM進(jìn)展,從胃炎、輕度IM到中重度IM中Sox2mRNA逐漸減少,而Cdx2逐漸被上調(diào),二者呈逆相關(guān)(r0)。 3.Sox2和Cdx2的啟動(dòng)子甲基化分別出現(xiàn)在33.3%和83%的胃炎,56.25%和62.5%的輕度IM, 83.33%和25%的中重度IM中,差異有顯著性(P0.05)。Sox2和Cdx2 mRNA表達(dá)與其啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)逆相關(guān)(r0)。 4.人胃上皮細(xì)胞GES-1中,pcDNA3.1 /Cdx2和Sox2siRNAs分別顯著上調(diào)了Cdx2和下調(diào)了Sox2。下調(diào)Sox2可以導(dǎo)致Muc2和Cdx2表達(dá)上調(diào);而上調(diào)Cdx2能夠上調(diào)Muc2并下調(diào)Sox2;下調(diào)Sox2和上調(diào)Cdx2聯(lián)合的作用強(qiáng)于二者各自單獨(dú)的作用。說(shuō)明腸轉(zhuǎn)錄因子Cdx2和胃轉(zhuǎn)錄因子Sox2有相互負(fù)調(diào)控作用,都在胃粘膜IM的形成中起重要作用。 結(jié)論: 1.隨著胃IM的進(jìn)展,有Sox2的表達(dá)下調(diào)和Cdx2的異位表達(dá)。 2.表觀遺傳學(xué)機(jī)制,尤其是DNA甲基化可能在Sox2和Cdx2的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中起重要作用。 3.在胃IM進(jìn)展中,胃轉(zhuǎn)錄因子Sox2和(或)腸轉(zhuǎn)錄因子Cdx2在啟動(dòng)胃表型向腸表型轉(zhuǎn)化中都起了重要作用。 論文二特異性小干擾RNA體外抑制人胃癌細(xì)胞IGF-ⅠR表達(dá)的研究 目的： 胃癌是全世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，雖然我國(guó)近年其發(fā)病率有所下降，但其死亡率仍具各類惡性腫瘤死亡之首。從基因水平上研究胃癌發(fā)展的分子學(xué)機(jī)制可為臨床治療和預(yù)防提供理論指導(dǎo)，因而成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。我們觀察了特異的siRNAs對(duì)人胃癌MGC803細(xì)胞IGF-ⅠR基因表達(dá)的抑制作用，研究干擾下調(diào)IGF-ⅠR對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 方法： 設(shè)計(jì)并體外合成2條靶向IGF-ⅠR的siRNAs，脂質(zhì)體法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的MGC803細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48h后以Western blot法檢測(cè)細(xì)胞IGF-ⅠR蛋白的水平，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，細(xì)胞計(jì)數(shù)并描記生長(zhǎng)曲線，以流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡(Annexin V-FITC/PI法)。 結(jié)果： 轉(zhuǎn)染后48h，Western blot檢測(cè)顯示干擾組(siRNA_2低劑量組、siRNA_2高劑量組、siRNA_1組)MGC803細(xì)胞IGF-ⅠR蛋白抑制率分別為64．41％±4．11％、74．14％±6．15％、89．8％±4．10％)；轉(zhuǎn)染后第2～5天細(xì)胞活力逐漸減少，分別達(dá)對(duì)照組的49．9％±1．2％、45．9％±4．4％、39．1％±5．1％、29％±4．O％，同期生長(zhǎng)曲線顯示細(xì)胞數(shù)分別為對(duì)照組的65．58％±4．89％、55．59％±0．82％、44．18％±3．17％、21．15％±1．1％；但FCM檢測(cè)各組細(xì)胞的早期凋亡百分比均5％，各組之間的凋亡百分比差異未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 特異的siRNAs可顯著抑制MGC803細(xì)胞中的IGF-ⅠR基因的表達(dá)，細(xì)胞的分裂增殖明顯減少，但凋亡沒(méi)有明顯增加。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R573;R735.2
【圖文】：

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文而SOXZ蛋白定位于正常胃粘膜上皮胞核，近核周的胞漿區(qū)也有少量棕黃色著色(圖1一 3AB)，表達(dá)陽(yáng)性率為94.4%。部分切片背景輕度著色，考慮為所使用的SoxZ一抗為多克隆抗體導(dǎo)致的非特異性著色。輕、中、重度IM中SoxZ表達(dá)陽(yáng)性率分別為75%、 23.5%和9.5%，表達(dá)逐漸減弱(圖1一 3CD)各組之間表達(dá)有顯著性差異(才科0.934，尸<0.001)(表l一)。表1一1各組CDXZ蛋白的表達(dá)情況分組合計(jì)陽(yáng)性率才(%)P值陰性陽(yáng)性胃炎 181715.6%輕度 IM20101050.0%36.978(0

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文圖1一CDXZ免疫組化染色A、B腸化生胞核染成棕黃色:C、D正常胃上皮細(xì)胞無(wú)著色圖1一 3SOXZ免疫組化染色A、B正常胃粘膜胞核及核周胞漿染成棕黃色，顯著高于背景著色;C、D腸化生細(xì)胞無(wú)著色

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文圖1一CDXZ免疫組化染色A、B腸化生胞核染成棕黃色:C、D正常胃上皮細(xì)胞無(wú)著色圖1一 3SOXZ免疫組化染色A、B正常胃粘膜胞核及核周胞漿染成棕黃色，顯著高于背景著色;C、D腸化生細(xì)胞無(wú)著色

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2747309