發(fā)布時間：2020-07-08 19:05

【摘要】：背景：腹膜纖維化是導致腹膜超濾衰竭的最主要原因，慢性腹膜纖維化導致的腹膜超濾衰竭是終末期腎�。╡nd stage renal disease，ESRD）患者退出腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）的主要原因。腹膜間皮細胞（peritoneal mesothelialcells，PMCs）在物質轉運、維持腹膜穩(wěn)態(tài)、局限炎癥、組織損傷修復等方面都發(fā)揮著重要作用。腹膜在慢性損傷作用下部分PMCs從上皮細胞表型向間充質細胞表型發(fā)生轉分化（epithelial-myofibroblast transdifferentiation，EMT）亦能啟動纖維化進程，導致腹膜喪失超濾功能。骨髓間充質干細胞（mesenchymal stemcells，MSCs）可以通過定植、分化和/或旁分泌生物活性因子抑制炎癥和纖維化。 目的：探討骨髓間充質干細胞對高糖腹透液誘導的原代大鼠腹膜間皮細胞轉分化的抑制作用。 方法：提取大鼠原代腹膜間皮細胞，制作原代腹膜間皮細胞在高糖腹透液刺激下的EMT模型。光鏡、免疫熒光，western觀察腹膜間皮細胞形態(tài)學變化及E-Cadherin,α-SMA，Snail1表達變化。通過PMCs與MSCs共培養(yǎng)，免疫熒光，western檢測E-Cadherin,α-SMA,Snail1改善情況。 結果：在高糖腹透液刺激下，E-Cadherin表達逐漸下調，α-SMA，Snail1表達逐漸上調。骨髓間充質干細胞對E-Cadherin下調和α-SMA，Snail1上調具有抑制作用。 結論：骨髓間充質干細胞對高糖腹透液誘導的原代大鼠腹膜間皮細胞轉分化有抑制作用。
【學位授予單位】：河南科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R572.2
【圖文】：

圖 4-1.原代 RPMSCs 培養(yǎng)的鑒定（A. 光鏡，×100；B. 免疫熒光，×600；綠色分別為E-Cadherin、Cytokeratin、α-SMA，藍色為 DAPI）Fig 4.1. Identification of the characteristics of primary RPMCs (A. Light microscopy,×100; B.Immunofluorescence staining, ×600; green represents E-Cadherin, Cytokeratin,α-SMA,respectively; blue represents DAPI)

圖 4-2. RPMSCs 光鏡下形態(tài)學變化（100 倍）Fig 4.2morphological changes of RPMSCs. (Light microscopy, ×100;)PMCs 形態(tài)學變化（光鏡 100 倍）含 1.5%PDF 的無血清培養(yǎng)基刺激大鼠腹膜間皮細胞，隨刺激時間延長，細胞逐漸喪失鋪路石樣表型。 大鼠壁層腹膜提取的原代大鼠腹膜間皮細胞，用含 1.5%葡萄糖腹透液（與無血清培養(yǎng)基 1:1）的DMEM/F12 培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著培養(yǎng)時間的延長，間皮細胞在光鏡下的形態(tài)發(fā)生了明顯變化。從正常情況下典型的鋪路石樣形態(tài)變成鋪路石樣和類似成纖維細胞樣混合存在。形態(tài)學變化和細胞死亡情況和刺激時間及腹透液葡萄糖濃度密切相關。細胞 12h 死亡增加，24h 部分變長、分叉，48h 形態(tài)變化明顯，72h 后開始明顯死亡，其余細胞呈樹枝樣。 2.5%和 4.25%葡萄糖腹透液培養(yǎng)細胞，在短時間內細胞形態(tài)發(fā)生明顯變化并大量死亡（圖片結果未顯示）。

圖 4-3 原代 RPMSCs 在腹透液刺激下 E-Cadherin 表達變化（ 免疫熒光×600；綠色分別為 E-Cadherin，藍色為 DAPI）Fig 4.3 E-Cadherin changes of RPMSCs induced by PDF(Immunofluorescence staining,×600; green represents E-Cadherin, blue represents DAPI)圖 4-4 原代 RPMSCs 在腹透液刺激下 E-Cadherin 表達變化（western blotting）Fig 4.4 E-Cadherin changes of RPMSCs induced by PDF（western blotting）

【共引文獻】

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本文編號：2746924