【摘要】：背景：腹膜纖維化是導(dǎo)致腹膜超濾衰竭的最主要原因，慢性腹膜纖維化導(dǎo)致的腹膜超濾衰竭是終末期腎�。╡nd stage renal disease，ESRD）患者退出腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）的主要原因。腹膜間皮細(xì)胞（peritoneal mesothelialcells，PMCs）在物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、維持腹膜穩(wěn)態(tài)、局限炎癥、組織損傷修復(fù)等方面都發(fā)揮著重要作用。腹膜在慢性損傷作用下部分PMCs從上皮細(xì)胞表型向間充質(zhì)細(xì)胞表型發(fā)生轉(zhuǎn)分化（epithelial-myofibroblast transdifferentiation，EMT）亦能啟動(dòng)纖維化進(jìn)程，導(dǎo)致腹膜喪失超濾功能。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stemcells，MSCs）可以通過(guò)定植、分化和/或旁分泌生物活性因子抑制炎癥和纖維化。 目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)高糖腹透液誘導(dǎo)的原代大鼠腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的抑制作用。 方法：提取大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞，制作原代腹膜間皮細(xì)胞在高糖腹透液刺激下的EMT模型。光鏡、免疫熒光，western觀察腹膜間皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化及E-Cadherin,α-SMA，Snail1表達(dá)變化。通過(guò)PMCs與MSCs共培養(yǎng)，免疫熒光，western檢測(cè)E-Cadherin,α-SMA,Snail1改善情況。 結(jié)果：在高糖腹透液刺激下，E-Cadherin表達(dá)逐漸下調(diào)，α-SMA，Snail1表達(dá)逐漸上調(diào)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)E-Cadherin下調(diào)和α-SMA，Snail1上調(diào)具有抑制作用。 結(jié)論：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)高糖腹透液誘導(dǎo)的原代大鼠腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化有抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：河南科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R572.2
【圖文】：

圖 4-1.原代 RPMSCs 培養(yǎng)的鑒定（A. 光鏡，×100；B. 免疫熒光，×600；綠色分別為E-Cadherin、Cytokeratin、α-SMA，藍(lán)色為 DAPI）Fig 4.1. Identification of the characteristics of primary RPMCs (A. Light microscopy,×100; B.Immunofluorescence staining, ×600; green represents E-Cadherin, Cytokeratin,α-SMA,respectively; blue represents DAPI)

圖 4-2. RPMSCs 光鏡下形態(tài)學(xué)變化（100 倍）Fig 4.2morphological changes of RPMSCs. (Light microscopy, ×100;)PMCs 形態(tài)學(xué)變化（光鏡 100 倍）含 1.5%PDF 的無(wú)血清培養(yǎng)基刺激大鼠腹膜間皮細(xì)胞，隨刺激時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞逐漸喪失鋪路石樣表型。 大鼠壁層腹膜提取的原代大鼠腹膜間皮細(xì)胞，用含 1.5%葡萄糖腹透液（與無(wú)血清培養(yǎng)基 1:1）的DMEM/F12 培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，間皮細(xì)胞在光鏡下的形態(tài)發(fā)生了明顯變化。從正常情況下典型的鋪路石樣形態(tài)變成鋪路石樣和類似成纖維細(xì)胞樣混合存在。形態(tài)學(xué)變化和細(xì)胞死亡情況和刺激時(shí)間及腹透液葡萄糖濃度密切相關(guān)。細(xì)胞 12h 死亡增加，24h 部分變長(zhǎng)、分叉，48h 形態(tài)變化明顯，72h 后開始明顯死亡，其余細(xì)胞呈樹枝樣。 2.5%和 4.25%葡萄糖腹透液培養(yǎng)細(xì)胞，在短時(shí)間內(nèi)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化并大量死亡（圖片結(jié)果未顯示）。

圖 4-3 原代 RPMSCs 在腹透液刺激下 E-Cadherin 表達(dá)變化（ 免疫熒光×600；綠色分別為 E-Cadherin，藍(lán)色為 DAPI）Fig 4.3 E-Cadherin changes of RPMSCs induced by PDF(Immunofluorescence staining,×600; green represents E-Cadherin, blue represents DAPI)圖 4-4 原代 RPMSCs 在腹透液刺激下 E-Cadherin 表達(dá)變化（western blotting）Fig 4.4 E-Cadherin changes of RPMSCs induced by PDF（western blotting）

【共引文獻(xiàn)】

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