發(fā)布時(shí)間：2020-07-04 07:39

【摘要】： 第一部分：潰瘍性結(jié)腸炎患者腸粘膜和外周血中Th細(xì)胞表型的改變 目的：探討Th細(xì)胞各亞群比例在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中的變化及意義。 方法：按照2007年濟(jì)南標(biāo)準(zhǔn)收集UC患者20例，對(duì)照組16例。利用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色和四色熒光抗體流式細(xì)胞術(shù)對(duì)UC組患者及對(duì)照組中腸粘膜和外周血淋巴細(xì)胞作表型分析，比較各組腸粘膜和外周血中Th1、Th2、Th17比例改變，Western blot檢測(cè)各組腸粘膜IL-4、IL-12、IL-17表達(dá)，ELISA檢測(cè)各組外周血IL-4、IL-12、IL-17水平。 結(jié)果：(1)UC組患者腸粘膜中Th17比例和IL-17表達(dá)較對(duì)照組明顯增加：Th17比例在UC組和對(duì)照組分別為3．75(6．93)vs．1．25(3．70)，P＜0．05；IL-17表達(dá)在UC組和對(duì)照組分別為0．20(0．15)vs．0．10(0．03)，P＜0．05。UC組患者腸粘膜中IL-17表達(dá)與疾病評(píng)分呈正相關(guān)(r=0．503，P=0．024)。UC中、重度患者外周血中Th17比例和IL-17表達(dá)增加：外周血中Th17比例在UC中、重度患者和對(duì)照組中分別為1．40(2．15)vs．0．70(0．33)，P＜0．05；外周血中IL-17含量在UC中、重度患者和對(duì)照組中分別為1．58(3．37)pg·ml~(-1)vs．0．19(0．64)pg·ml~(-1)，P＜0．05。(2)腸粘膜中Th1的比例在UC和對(duì)照組中分別為13．6(16．88)vs．9．10(17．53)；外周血中Th1的比例在UC和對(duì)照組中分別為12．85(9．28)vs．10．15(7．48)，UC組與對(duì)照組相比腸粘膜和外周血中Th1比例差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且不同活動(dòng)度患者間無明顯差異。腸粘膜中IL-12的表達(dá)在UC組和對(duì)照組中分別是0．22(0．16)vs．0．16(0．13)，表達(dá)無明顯改變。外周血中IL-12水平在UC組與對(duì)照組中分別是1．59(2．26)pg·ml~(-1)vs．1．66(5．79)pg·ml~(-1)，兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)腸粘膜中Th2的比例在UC和對(duì)照組中分別為1．10(1．53)vs．1．15(1．50)；外周血中Th2的比例在UC和對(duì)照組中分別為1．20(0．55)vs．1．10(0．45)，腸粘膜和外周血中差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不同活動(dòng)度患者間差異無顯著性。腸粘膜IL-4在UC組和對(duì)照組中分別是0．29(0．14)vs．0．23(0．11)，表達(dá)無明顯改變。外周血IL-4水平在UC組與對(duì)照組分別是1．27(2．48)pg·ml~(-1)vs．0(2．5)pg·ml~(-1)，兩組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：在Th細(xì)胞各亞群中Th17細(xì)胞是介導(dǎo)UC腸道局部和外周免疫應(yīng)答的優(yōu)勢(shì)細(xì)胞，它可能成為UC治療的有效靶點(diǎn)。 第二部分：腹瀉型IBS患者腸粘膜和外周血中Th細(xì)胞表型的改變 目的：探討Th細(xì)胞各亞群在腹瀉型IBS患者中的變化，揭示IBS粘膜免疫激活具體免疫學(xué)機(jī)制。 方法：按照羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)收集腹瀉型IBS患者27例，另設(shè)對(duì)照組16例。采用細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色和四色熒光抗體流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組腸粘膜和外周血中Th1／Th2／Th17比例，Western blot檢測(cè)腸粘膜IL-4、IL-12、IL-17表達(dá)，ELISA檢測(cè)外周血IL-4、IL-12、IL-17水平。 結(jié)果：(1)腹瀉型IBS患者部分腸粘膜病理學(xué)表現(xiàn)為非特異性炎癥，歸為IBS-A組，腸粘膜無非特異性炎癥者歸為IBS組。(2)IBS-A組患者腸粘膜Th17比例較對(duì)照組明顯增加，為3．60(4．05)vs．1．25(3．70)，P=0．045，而Th1、Th2比例無明顯改變；腸粘膜中相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-12、IL-17表達(dá)與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IBS-A組外周血中Th1、Th2、Th17比例和對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。外周血中相關(guān)細(xì)胞因子IL-4、IL-12、IL-17水平與對(duì)照組比較也無明顯改變。(3)IBS組患者腸粘膜及外周血Th細(xì)胞比例和相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)均無明顯改變。 結(jié)論：腹瀉型IBS患者部分存在腸粘膜非特性炎癥，提示腸粘膜存在免疫激活，該免疫狀態(tài)表現(xiàn)為Th細(xì)胞向Th17偏移。 第三部分：Th17細(xì)胞在旋毛蟲感染小鼠內(nèi)臟高敏感性中的作用 目的：研究發(fā)現(xiàn)旋毛蟲感染小鼠在急性感染期會(huì)出現(xiàn)腸道功能紊亂，在腸道炎癥消退后腸道功能紊亂癥狀仍可持續(xù)存在。本實(shí)驗(yàn)旨在闡明Th17細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子在旋毛蟲感染小鼠急性和慢性感染期期出現(xiàn)的內(nèi)臟高敏感性中的作用。 方法：實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、感染后2周組、8周組和12周組。用含有旋毛蟲的混懸液灌胃方法感染NIH小鼠，劑量為300條／只；結(jié)直腸擴(kuò)張誘導(dǎo)的腹部回撤反射(AWR)評(píng)估內(nèi)臟敏感性；HE染色觀察空腸和結(jié)腸粘膜炎癥狀態(tài)；細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色檢測(cè)空腸和結(jié)腸粘膜固有層Th17細(xì)胞比例；Wentern blot檢測(cè)空腸和結(jié)腸粘膜IL-17、IL-23和TGF-β1蛋白表達(dá)。 結(jié)果：旋毛蟲感染造成的空腸和結(jié)腸一過性炎癥在感染后2周時(shí)最明顯，感染后8周時(shí)腸粘膜破壞和炎癥反應(yīng)基本消失，感染后12w時(shí)空腸和結(jié)腸粘膜無明顯炎癥改變。AWR評(píng)分在感染后2周時(shí)最高，感染后8周和12周時(shí)仍高于對(duì)照組水平(P＜0．05)�？漳c和結(jié)腸粘膜固有層Th17細(xì)胞比例和IL-17表達(dá)在感染后2周時(shí)增高(P＜0．05)，感染后8周和12周降至正常水平。感染后2周，感染組和對(duì)照組小鼠空腸粘膜Th17細(xì)胞比例分別是9．13±2．73 vs．3．78±1．97，P＜0．01；結(jié)腸粘膜中Th17細(xì)胞比例分別是8．00±2．43 vs．3．6±1．80，P＜0．01。感染后2周，感染組和對(duì)照組空腸中IL-17含量分別是1．70±0．47和0．68±0．26，P＜0．01；結(jié)腸中IL-17含量分別是0．59±0．12和0．44±0．09，P=0．041。2周時(shí)空腸和結(jié)腸粘膜IL-17表達(dá)與AWR評(píng)分呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是r=0．658，P=0．032和r=0．532，P=0．04。空腸和結(jié)腸粘膜TGF-β1表達(dá)在感染后2周時(shí)增加，8周和12周降至正常水平。感染后2周，空腸中TGF-β1含量在感染組和對(duì)照組分別是0．31±0．03和0．17±0．05，P＜0．01；結(jié)腸中TGF-β1含量在感染組和對(duì)照組分別是0．11±0．03和0．08±0．02，P=0．035。急、慢性感染期間空腸和結(jié)腸粘膜IL-23表達(dá)無明顯改變。 結(jié)論：旋毛蟲感染NIH小鼠造成腸道一過性炎癥，炎癥急性期和慢性期小鼠內(nèi)臟敏感性增加。Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子IL-17可能影響了急性期感染期小鼠內(nèi)臟敏感性，TGF-β1可能誘導(dǎo)了Th17細(xì)胞的改變。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R574.62
【圖文】：

圖1aTh17細(xì)胞在UC患者腸粘膜和外周血中比例的箱圖;b代表性的流式結(jié)果圖0O00口U.L-17AC廿nCQntrolUC.卜12入Ctin日日于習(xí)之卜‘，..山‘’‘l召....y.州OIL礴/O0.00Ctin丈淵弊{…粼娜攀...口卜川..

!!.|占曰目曰丫

本文編號(hào)：2740842