【摘要】： 目的 研究慢性HBV感染不同階段細(xì)胞免疫及其與病毒清除的關(guān)系。 方法 用流式細(xì)胞儀檢測50例慢性HBV感染者外周血的T細(xì)胞亞群。選擇其中進(jìn)行肝組織穿刺活檢術(shù)的慢性乙型肝炎住院病例40例,留取活檢肝組織分別進(jìn)行蘇木素伊紅染色和免疫組織化學(xué)CD4、CD8染色,并用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測肝組織內(nèi)的HBV-DNA定量。10例正常對照肝組織選自肝血管瘤手術(shù)患者瘤旁正常肝組織。 結(jié)果 1.慢性HBV感染組與正常對照組T細(xì)胞亞群比較。 T細(xì)胞亞群在慢性HBV感染組與正常對照組間比較,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。然后將慢性HBV感染組根據(jù)HBV-DNA定量分為HBV-DNA陽性組和HBV-DNA陰性組比較發(fā)現(xiàn):HBV-DNA陽性組的CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值較HBV-DNA陰性組及正常對照組明顯降低(P0.05,P0.01, P0.05,P0.05),但是T細(xì)胞亞群在HBV-DNA陰性組與正常對照組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.慢性HBV感染的不同階段外周血T細(xì)胞亞群的變化。 外周血T細(xì)胞亞群在慢性HBV感染免疫耐受期、免疫清除期、低(非)復(fù)制狀態(tài)、再激活期、正常對照組5組間比較CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值差異顯著(P0.05,P0.05),進(jìn)一步進(jìn)行組內(nèi)比較發(fā)現(xiàn):免疫清除期的CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值較低復(fù)制狀態(tài)明顯減低(P0.05,P0.05);免疫清除期及免疫耐受期的CD4+T細(xì)胞百分率、CD4/CD8比值均較正常對照組明顯減低(P0.01,P0.05, P0.05,P0.05);其它組間比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 3.外周血T細(xì)胞亞群與外周血及肝組織中HBV-DNA定量的相關(guān)性分析。 CD4/CD8比值與外周血HBV-DNA定量呈負(fù)相關(guān)(r= -0.308,P0.05)。CD3+T細(xì)胞百分率、CD4+T細(xì)胞百分率、CD8+T細(xì)胞百分率與外周血HBV-DNA定量無相關(guān)性。外周血T細(xì)胞亞群與肝組織中的HBV-DNA定量亦無相關(guān)性。在慢性HBV感染的不同階段,亦未發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞亞群與HBV-DNA定量相關(guān)。 4.肝組織中CD4、CD8陽性細(xì)胞的表達(dá)。 正常肝組織中有少量CD4和CD8陽性細(xì)胞表達(dá),慢性乙型病毒性肝炎患者的肝組織中可見CD4陽性及CD8陽性細(xì)胞表達(dá),CD4陽性細(xì)胞主要集中在匯管區(qū),CD8陽性細(xì)胞主要聚集在匯管區(qū)及炎性肝細(xì)胞的周圍。 5.CD4、CD8陽性細(xì)胞在HBV-DNA不同復(fù)制狀態(tài)肝組織中的表達(dá)。 CD4、CD8陽性細(xì)胞在慢性HBV感染者肝組織中的表達(dá)明顯多于正常肝組織的陽性表達(dá)量(P0.01,P0.01)。CD4、CD8陽性細(xì)胞在HBV-DNA陽性組肝組織中的表達(dá)明顯多于正常對照組(P0.001,P0.001),也多于HBV-DNA陰性組,但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.05);CD8陽性細(xì)胞在HBV-DNA陰性組肝組織中的表達(dá)明顯多于正常對照組(P0.01),但是CD4陽性細(xì)胞的表達(dá)在兩者間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 6.CD4陽性細(xì)胞在慢性HBV感染不同階段肝組織中的表達(dá)。 免疫清除期、低復(fù)制狀態(tài)及再激活期3組CD4陽性細(xì)胞明顯多于正常對照組(P0.001,P0.001,P0.001)。免疫耐受期CD4陽性細(xì)胞明顯低于免疫清除期及再激活期(P0.05,P0.01)。其余組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 7.CD8陽性細(xì)胞在慢性HBV感染不同階段肝組織中的表達(dá)。 慢性HBV感染的4個(gè)不同階段CD8陽性細(xì)胞均多于正常對照組(P0.05, P0.05, P0.01 P0.01)。CD8陽性細(xì)胞在免疫耐受期的表達(dá)明顯低于再激活期(P0.05)。其余組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 8.免疫活動(dòng)期(免疫清除期和再激活期)細(xì)胞免疫狀態(tài)的變化。 肝組織中CD4、CD8陽性細(xì)胞的表達(dá)在此期明顯高于免疫耐受期(P0.01,P0.05),CD4陽性細(xì)胞在此期的表達(dá)明顯多于低復(fù)制狀態(tài)組(P0.05),CD8陽性細(xì)胞在此期的表達(dá)也多于低復(fù)制狀態(tài),但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 外周血CD4+T細(xì)胞的百分率與外周血的HBV-DNA定量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.481,P0.05)。 根據(jù)轉(zhuǎn)氨酶的升高情況分為小于2×ULN(正常值上限)和大于2×ULN兩組,在ALT≥2×ULN組中外周血CD4/CD8比值與肝組織中的HBV-DNA定量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.829,P0.05)。在小于2×ULN組中沒有發(fā)現(xiàn)類似變化。 9.對外周血HBV-DNA定量與肝組織HBV-DNA定量進(jìn)行Spearman相關(guān)分析。 外周血HBV-DNA定量與肝組織HBV-DNA定量顯著正相關(guān)(r=0.779, P0.001)。 10.肝組織及血清HBV-DNA的檢測。 在血清HBV-DNA定量陽性的肝組織中均能檢測到HBV-DNA的復(fù)制,而且在8例低復(fù)制狀態(tài)組血清HBV-DNA陰性的肝組織內(nèi)仍然可以檢測到HBV-DNA的復(fù)制。結(jié)論 1.慢性HBV感染時(shí),機(jī)體及肝臟局部均存在免疫功能異常,HBV-DNA的復(fù)制加重了這種變化。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HBV-DNA陽性組外周血的CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值明顯低于陰性組及正常對照, HBV-DNA陽性組肝組織中浸潤的CD4、CD8陽性細(xì)胞明顯多于正常。 2.慢性HBV感染的不同階段機(jī)體及肝臟局部所處的免疫狀態(tài)不同。免疫清除期外周血CD4+T細(xì)胞百分率及CD4/CD8比值明顯低于低復(fù)制狀態(tài),免疫活動(dòng)期肝內(nèi)浸潤的CD4、CD8陽性細(xì)胞多于免疫耐受期及低復(fù)制狀態(tài)。 3.CD4+T細(xì)胞的減少不利于病毒的清除,而病毒的持續(xù)高復(fù)制狀態(tài)可能影響了CD4+T細(xì)胞的增殖。在免疫活動(dòng)期,外周血CD4+T細(xì)胞的百分率與外周血HBV-DNA定量呈負(fù)相關(guān),而且在ALT≥2×ULN組外周血CD4/CD8比值與肝組織中的HBV-DNA定量呈顯著負(fù)相關(guān)。 4.肝組織中的HBV-DNA定量較血清HBV-DNA定量能更準(zhǔn)確地反映肝細(xì)胞內(nèi)病毒復(fù)制的水平。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R512.62

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