【摘要】：潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis, UC)是一種自身免疫性疾病,病情常反復發(fā)作,傳統(tǒng)的治療手段只對輕中型患者有效,對部分嚴重患者,治療方案的選擇有限。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)在體內(nèi)能夠分化為多種中胚層組織細胞,并且可以向損傷、炎癥或腫瘤部位遷移。在體外很容易分離和擴增,一定條件下可以分化為成骨細胞、成脂肪細胞和軟骨細胞等多種細胞。其強大的可塑性及其在治療方面的應用潛力是目前研究的熱點。目前,骨髓間充質(zhì)干細胞靜脈移植后體內(nèi)分布情況及其聯(lián)合地塞米松治療潰瘍性結(jié)腸炎的療效,國內(nèi)外少有報道。本課題包括骨髓間充質(zhì)干細胞的體外實驗和體內(nèi)實驗兩個部分,重點進行了骨髓間充質(zhì)干細胞的體內(nèi)示蹤、地塞米松和骨髓間充質(zhì)于細胞聯(lián)用及其療效評價的實驗研究。 研究目的 1、進行小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的提取、培養(yǎng)、鑒定、染色及潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型的制備。 2、觀察回輸?shù)男∈蠊撬栝g充質(zhì)干細胞在潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠體內(nèi)的分布。 3、評價地塞米松和骨髓間充質(zhì)干細胞聯(lián)用對潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠的治療效果。 研究方法 1、小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的提取、培養(yǎng)、鑒定、染色。 2、制備潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型,進行DAI評分并進行HE染色病理觀察。 3、將DiR染色的小鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞通過鼠尾靜脈輸入模型組小鼠體內(nèi)。進行活體熒光成像并制備冰凍切片觀察骨髓間充質(zhì)干細胞在體內(nèi)的分布。 4、將實驗小鼠隨機分為5組進行骨髓間充質(zhì)干細胞及地塞米松治療,治療結(jié)束后分別于1天、3天、5天3個時間點取血清,于第4天取空腸組織,分別測定不同時間點血清中的D-乳酸(D(-)-lactic acid,D-LAC)、二胺氧化酶(diamine oxidase, DAO)含量以及結(jié)腸組織中的谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性。 結(jié)果 1、活體熒光成像及離體冰凍切片觀察均發(fā)現(xiàn)結(jié)腸組織有熒光顯像,但活體熒光成像發(fā)現(xiàn)熒光顯像主要集中于肺和肝中。 2、潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠各時間點血清D-LAC、DAO含量高于正常對照組,第4天結(jié)腸組織GSH-PX、SOD活性低于止常對照組。 3、除第5天地塞米松治療組血清D-LAC與空白對照組比較無統(tǒng)計學意義外,地塞米松聯(lián)合BMSCs治療組、地塞米松治療組、BMSCs治療組各時間點血清D-LAC、 DAO含量均低于空白對照組且隨時間逐漸下降。各治療組第4天結(jié)腸組織GSH-PX、 SOD活性高于空白對照組。 4、地塞米松聯(lián)合BMSCs治療組各時間點血清D-LAC、DAO含量均低于地塞米松治療組及BMSCs治療組。地塞米松聯(lián)合BMSCs治療組第4天結(jié)腸組織GSH-PX、SOD活性高于地塞米松治療組及BMSCs治療組。 結(jié)論 1、體內(nèi)注射的骨髓間充質(zhì)干細胞可定植于潰瘍性結(jié)腸炎模型小鼠腸道組織,但定植于腸道的細胞數(shù)量仍然非常有限,大部分停留于肺組織和肝組織中。其可能機制是小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞平均直徑較大,多數(shù)細胞滯留于肺的微血管處死亡并在肝臟代謝。 2、潰瘍性結(jié)腸炎小鼠較正常對照小鼠,腸道屏障功能和抗膜脂質(zhì)氧化的能力下降。 3、地塞米松聯(lián)合BMSCs、單用地塞米松、單用BMSCs均對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠有較好的治療效果。地塞米松聯(lián)合BMSCs較單用地塞米松、單用BMSCs腸道屏障功能恢復加快、抗膜脂質(zhì)氧化作用增強,地塞米松聯(lián)合BMSCs治療模型小鼠潰瘍性結(jié)腸炎療效優(yōu)于單純BMSCs及單純地塞米松治療。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R574.62

【參考文獻】

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1 余勤;連俊蘭;王艷;郭瑩;萬海同;;大鼠骨髓間質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)擴增及生物學特性研究[J];浙江中醫(yī)藥大學學報;2006年02期

2 王偉,張志堅,林建華3,吳秀麗,余良宏,康德智;大鼠骨髓間質(zhì)干細胞培養(yǎng)擴增及表面標志[J];福建醫(yī)科大學學報;2005年01期

3 丁偉群,林庚金,徐三榮,錢立平;潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病中白介素水平的變化[J];復旦學報(醫(yī)學科學版);2001年04期

4 連建學;劉潔;李洛平;劉衛(wèi)華;;結(jié)腸安膠囊對實驗性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠IL-6、SOD及MDA表達的影響[J];陜西中醫(yī);2006年02期

5 袁耀宗;湯玉茗;;重視腸屏障功能的研究[J];中華消化雜志;2006年09期

6 段征;徐艷華;陳小云;汪維偉;;間充質(zhì)干細胞移植后在潰瘍性結(jié)腸炎大鼠體內(nèi)的遷移[J];重慶醫(yī)科大學學報;2010年08期

7 黎君友,呂藝,付小兵,晉樺,胡森,孫曉慶,盛志勇;二胺氧化酶在創(chuàng)傷后腸道損傷中變化及意義[J];中國危重病急救醫(yī)學;2000年08期

本文編號：2737603