發(fā)布時間：2020-06-29 06:25

【摘要】：目的： 1.探討孕婦HBV感染對胎兒及胎盤生長發(fā)育的影響。 2.利用組織學(xué)實驗方法探討HBV感染對胎盤形態(tài)和功能的影響。 3.利用體外實驗研究HBV在胎盤滋養(yǎng)細胞的感染狀況，初步探討HBV感染胎盤滋養(yǎng)細胞后能否在滋養(yǎng)細胞內(nèi)復(fù)制。 方法： 1.第一部分：回顧性分析194例HBsAg陽性的孕婦及其新生兒的臨床資料，并隨機選取296例HBsAg陰性的孕婦及其新生兒作為對照組，分析這兩組的妊娠并發(fā)癥，圍產(chǎn)兒結(jié)局及胎兒-胎盤發(fā)育指標(biāo)和HBV宮內(nèi)感染的關(guān)系。 2.第二部分：收集血清HBsAg陽性孕婦足月胎盤組織25例作為病例組，血清HBsAg陰性孕婦足月胎盤組織10例作為正常對照組，免疫組化PV-6002二步法檢測病例組胎盤組織HBsAg的表達；熒光定量PCR檢測胎盤組織HBVcccDNA的表達；免疫組化抗CD34標(biāo)記絨毛血管，體視學(xué)方法定量分析絨毛微血管長度密度和體積密度的改變； TUNEL法檢測胎盤細胞的凋亡指數(shù)。 3.第三部分：收集HBV攜帶孕婦足月胎盤12例，采用密度梯度離心法聯(lián)合反復(fù)貼壁法分離、純化滋養(yǎng)細胞，提取滋養(yǎng)細胞進行培養(yǎng)；流式細胞術(shù)檢測滋養(yǎng)細胞CK-7的表達，進行細胞純度鑒定，免疫雙標(biāo)法結(jié)合激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測滋養(yǎng)細胞CK-7及間質(zhì)Vimentin的表達，進行細胞形態(tài)學(xué)鑒定；PCR-熒光探針法檢測體外培養(yǎng)24、48、72h滋養(yǎng)細胞上清HBV DNA的表達；微粒子酶免疫分析技術(shù)檢測體外培養(yǎng)24、48、72h滋養(yǎng)細胞上清HBsAg和HBeAg的表達；流式細胞分選技術(shù)分選出純度98%以上的滋養(yǎng)細胞，熒光定量PCR檢測滋養(yǎng)細胞中HBVcccDNA的表達。 結(jié)果： 1.第一部分： 1)臨床資料分析顯示，HBsAg陽性孕婦孕產(chǎn)次較HBsAg陰性孕婦高(P0.05)；HBsAg陽性孕婦新生兒出生體重和胎盤體積較HBsAg陰性孕婦小(P0.05)；孕婦HBV-DNA陽性組的胎盤體積較HBV-DNA陰性組��； ALT異常組的胎盤體積大于ALT正常組(P0.05)； 2)新生兒HBsAg陽性組的出生體重、身長，胎盤體積均較陰性組低，F(xiàn)GR發(fā)生率較陰性組高(P0.05)；新生兒HBeAg陽性組FGR發(fā)生率較陰性組高，胎盤體積較陰性組小(P0.05)；新生兒HBsAb陽性組胎盤體積較陰性組大(P0.05)； 3)胎盤體積為HBV宮內(nèi)感染的保護因素(OR=0.996，p=0.005)，母血HBV DNA為宮內(nèi)感染的危險因素(OR=1.396，p=0.004)。 2.第二部分： 1)免疫組化結(jié)果顯示，25例HBV感染胎盤中有13例胎盤HBsAg陽性，陽性率為52.0%，陽性信號主要分布于滋養(yǎng)細胞(TC)，絨毛間質(zhì)細胞(VMC)和絨毛毛細血管內(nèi)皮細胞(VCMC)； 2)20例胎盤中，有7例胎盤組織HBV cccDNA陽性，陽性率為35.0%，表達量(copies/ml)分別為：6.04×10~5、3.82×10~3、8.94×10~3、2.91×10~4、7.02×10~3、5.28×10~2、1.12×10~4；胎盤HBV cccDNA (+)組的肝功能異常率高于胎盤HBVcccDNA(-)組，孕次較胎盤HBVcccDNA(-)組多(P0.05)；母血HBV DNA滴度與胎盤HBV cccDNA滴度呈明顯的正相關(guān)(r=0.994，P=0.000)；孕次和胎盤HBsAg陽性是胎盤HBV cccDNA陽性的危險因素，OR值分別為4.85和16.02； 3)胎盤絨毛微血管體視學(xué)結(jié)果顯示，CD34幾乎標(biāo)記所有血管，絨毛血管內(nèi)皮細胞在乙肝胎盤和正常胎盤均為陽性表達；乙肝組的微血管Lv較正常組小，微血管Vv較正常組大，但兩者比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；微血管Vv與胎盤HBV cccDNA滴度呈明顯正相關(guān)(r=0.944，P=0.001)； 4)凋亡結(jié)果顯示，HBV感染胎盤及正常胎盤組織均可檢出凋亡細胞，凋亡細胞在胎盤不同類型的細胞均有表達；HBV感染胎盤滋養(yǎng)細胞和絨毛間質(zhì)細胞的凋亡指數(shù)比正常胎盤的凋亡指數(shù)高，且兩組間的比較具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；母血HBV DNA滴度和AI呈中度正相關(guān)(r=0.422，p=0.045)；微血管Lv與AI呈中度負相關(guān)(r=-0.464，p=0.022)。 3.第三部分： 1)12例HBV攜帶孕婦胎盤滋養(yǎng)細胞體外培養(yǎng)24、48、72h，上清均可檢測到HBV DNA和HBsAg、HBeAg的陽性表達，HBV M滴度在24h表達量最高，隨著時間的推移，HBV DNA滴度逐漸下降，而HBsAg和HBeAg滴度呈先下降后上升的趨勢，但3個時間點均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)；3個時間點上清HBsAg和HBeAg的表達量有良好的相關(guān)性(P0.05)； 2)12例HBV胎盤滋養(yǎng)細胞標(biāo)本，有4例檢測出HBV cccDNA陽性，陽性率33.3%，表達量(copies/ml)分別為：5.67×10~3、2.12×10~4、1.72×10~4、4.90×10~4；母血HBV DNA滴度和滋養(yǎng)細胞HBV cccDNA滴度呈良好的正相關(guān)(r=0.997，p=0.023)。 結(jié)論： 1. HBV感染可影響胎兒-胎盤的生長發(fā)育，導(dǎo)致胎盤體積縮小，出生體重降低。 2.胎盤體積是HBV宮內(nèi)感染的保護因素，新生兒HBsAb陽性者的胎盤體積大于新生兒HBsAb陰性者；母血高病毒載量及轉(zhuǎn)氨酶升高是HBV宮內(nèi)感染的高危因素。 3.孕次和胎盤HBsAg陽性是胎盤HBV cccDNA陽性的危險因素。隨著母血HBV DNA滴度的升高，胎盤HBV cccDNA滴度增加，微血管體積密度增大。 4.胎盤HBV感染者，胎盤滋養(yǎng)細胞和絨毛間質(zhì)細胞的凋亡指數(shù)增高。 5. HBV可以感染胎盤滋養(yǎng)細胞并在滋養(yǎng)細胞內(nèi)繁殖復(fù)制。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R512.62
【圖文】：

.圖 2-1 方網(wǎng)測試系統(tǒng)（測試框）如圖，每小方格邊長為 d，每小方格面積 d2為每一測試點的測面積禁線法則［11］：又稱為無偏計數(shù)法。測試框的右邊和上邊（虛線）稱為計

圖 2-2 點計數(shù)技術(shù)如圖，陰影部分為絨毛微血管，透亮部分為絨毛。圖中，Qx=4，Lv=2M2*Qx/aPc，Vv=100*Px/Pc=17.39%視學(xué)參數(shù)和計算公式：

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本文編號：2733534