【摘要】：目的： 研究蘭索拉唑（lansoprazole，LPZ）在體外對幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染胃上皮細(xì)胞后誘導(dǎo)表達(dá)環(huán)氧化酶2（cyclooxygenase-2，COX-2）及前列腺素E2（prostaglandin，PG）的影響，同時，觀察該效應(yīng)LPZ處理前后是否與核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）和Akt通路的改變有關(guān)，從而了解LPZ潛在的免疫調(diào)控作用及其分子機制。 方法： 采用RPMI-1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)胃上皮細(xì)胞系A(chǔ)GS，并根據(jù)不同的實驗?zāi)康姆譃?組：（1）空白對照組：僅給予0.1%DMSO；（2）Hp感染組：用感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）為100的Hp感染細(xì)胞24h；（3）LPZ干預(yù)組：Hp感染前加入0～100μmol/L LPZ作用3h，100MOI的Hp感染24h。乳酸脫氫酶實驗篩選LPZ的最大作用濃度；（4）NF-κB抑制劑PDTC干預(yù)組：Hp感染前加入PDTC作用30min，100MOI的Hp感染24h；（5）PI3K抑制劑LY294002干預(yù)組：Hp感染前加入LY294002作用30min，100MOI的Hp感染24h。實時定量PCR和Western blot分別檢測處理前后COX-2的mRNA和蛋白的表達(dá)；ELISA檢測PGE2分泌水平。提取細(xì)胞核蛋白與胞漿蛋白，Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)NF-κB和Akt的激活情況。 結(jié)果： （1）與對照組AGS細(xì)胞相比，Hp感染后AGS細(xì)胞COX-2mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著增高；LPZ（100μmol/L）、NF-κB抑制劑PDTC和PI3K抑制劑LY294002預(yù)處理均可明顯降低Hp誘導(dǎo)的COX-2mRNA及蛋白表達(dá)水平。 （2）與對照組AGS細(xì)胞相比，Hp感染后AGS細(xì)胞PGE2含量顯著增高； LPZ（100μmol/L）預(yù)處理可明顯降低Hp誘導(dǎo)的PGE2分泌。同樣，PDTC和LY294002也能抑制Hp誘導(dǎo)的PGE2的產(chǎn)生。 （3）Western blot結(jié)果顯示，Hp感染能誘導(dǎo)AGS細(xì)胞NF-κB p65亞基核轉(zhuǎn)位，而LPZ預(yù)處理后細(xì)胞核內(nèi)p65亞基含量明顯減少。此外，Hp也能誘導(dǎo)AGS細(xì)胞內(nèi)Akt磷酸化，而LPZ也能降低細(xì)胞內(nèi)磷酸化Akt的水平。 結(jié)論： （1） LPZ能抑制Hp感染AGS細(xì)胞所誘導(dǎo)的COX-2和PGE2的產(chǎn)生； （2） LPZ抑制Hp誘導(dǎo)AGS細(xì)胞表達(dá)COX-2和產(chǎn)生PGE2可能與抑制NF-κB和Akt激活有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R573
【圖文】：

圖 1 不同濃度 LPZ 對 AGS 細(xì)胞 LDH 產(chǎn)生的影響唑?qū)?Hp 感染 AGS 細(xì)胞后 COX-2 mRNA 表對照組樣本的 cDNA 進(jìn)行梯度稀釋，稀釋后取 2μL 作模物進(jìn)行擴增，如圖 2 所示，目的基因擴增曲線起峰良好，線斜率為 3.68，線性相關(guān)系數(shù)ｒ＞0.993，且具有較好的量 PCR 結(jié)果顯示，Hp 未感染前 AGS 細(xì)胞 COX-2 表達(dá)A 水平顯著增高。而 AGS 細(xì)胞預(yù)先經(jīng) 100μmol/L LPZ 處有所降低。此外，AGS 細(xì)胞預(yù)先用 PDTC 或 LY29400p感染后所誘導(dǎo)的COX-2 mRNA表達(dá)，這表明COX-2的產(chǎn)活有關(guān)（圖 2C）。

22C 2 LPZ、PDTC 以及 LY294002 對 Hp 誘導(dǎo) AGS 細(xì)胞表達(dá) COX-2 mRNA 的A：COX-2 的熒光擴增曲線；B：標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；C：各組 COX-2 表達(dá)相對含量

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 楊卓;張艷;黎村艷;于文;曹斌;余敏君;;幽門螺桿菌VacA N端片段通過線粒體途徑誘導(dǎo)GES-1細(xì)胞凋亡[J];中國免疫學(xué)雜志;2011年03期

2 唐衛(wèi)軍;;奧美拉唑、蘭索拉唑和泮托拉唑治療胃炎胃潰瘍的療效[J];中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新;2013年10期

本文編號：2729820