【摘要】：研究背景 慢性胰腺炎(Chronic pancreatitis, CP)是公認(rèn)的臨床難治性疾病,胰腺實(shí)質(zhì)發(fā)生慢性持續(xù)性炎性損害和纖維化是其主要病理特征,其確切的發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明。目前CP的臨床治療手段效果均不夠理想,即使去除致病因素后胰腺組織纖維化進(jìn)程仍然呈不可逆性地發(fā)展,而持續(xù)存在的纖維化病變是潛在的致癌因素。因此,尋求安全、有效的治療方法減輕或逆轉(zhuǎn)慢性胰腺炎中胰腺實(shí)質(zhì)的漸進(jìn)性纖維化,并改善胰腺功能對提高慢性胰腺炎患者生存期和生活質(zhì)量具有重要意義。 以干細(xì)胞移植為代表的現(xiàn)代組織工程學(xué)和以轉(zhuǎn)基因?yàn)榇淼默F(xiàn)代基因工程技術(shù)為多種疑難疾病的治療提供了一個(gè)全新的探索領(lǐng)域。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一類具有多向分化潛能和高度自我更新能力的成體干細(xì)胞,具有來源豐富、易于分離培養(yǎng)和擴(kuò)增、可長期存活、基因轉(zhuǎn)染效率高、轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定表達(dá)、低免疫原性等其它干細(xì)胞不可比擬的優(yōu)點(diǎn)。 MSCs移植治療疾病已成為研究的熱點(diǎn)。研究表明MSCs對心、肝、肺、腎、神經(jīng)系統(tǒng)等多種器官的病理損傷有保護(hù)和修復(fù)作用。但目前有關(guān)MSCs在胰腺疾病方面的研究較少,國內(nèi)李兆申教授研究表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可能參與急性胰腺炎組織損傷和修復(fù),崔慧斐等通過移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞或注射粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)的方法治療L-精氨酸誘導(dǎo)的重癥急性胰腺炎(SAP),提示骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有助于減輕SAP的病情。 目的 探討MSCs在慢性胰腺炎治療中的作用機(jī)制以及對于慢性胰腺炎治療的價(jià)值。 對象與方法 1.對象是購自鄭州大學(xué)動(dòng)物中心的SD大鼠,其中80只隨機(jī)分為對照組20只,模型組20只,假治療組20只,治療組20只。 2. BMSCs分離、培養(yǎng)、鑒定參考有關(guān)文獻(xiàn),采用改良的貼壁篩選法,至80%-90%細(xì)胞融合鋪滿單層培養(yǎng)瓶底時(shí)用0.25%胰酶消化傳代培養(yǎng)。傳至第5代時(shí)用0.25%胰酶消化,用PBS制成濃度為2×109/L的懸液,將細(xì)胞懸液分裝至2只5ml試管中,分別加入小鼠抗大鼠CD29, CD44, CD45單克隆抗體及其同型對照做流式細(xì)胞術(shù)檢測鑒定, rAAV2-EGFP介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染第四代BMSCs90%鋪滿瓶底后,0.25%胰酶消化,調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5×104/L,接種于6孔板中,置于5%C02,37℃培養(yǎng)箱中。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到90%融合時(shí)按1：2傳代培養(yǎng)。 3.取250g健康雄性SD大鼠80只,隨機(jī)分為空白組,模型組,假治療組和治療組,在慢性胰腺炎模型復(fù)制8周時(shí),向治療組大鼠分別在20d,40d,60d各注射數(shù)量級為3×106/L,帶有綠色熒光蛋白標(biāo)記的BMSCs (GFP-BMSCs) 1 ml,空白組和假治療組大鼠各注射等量無菌蒸餾水,模型組不予處理,在80d后取大鼠胰腺,部分制作切片,MASSON染色及免疫組化染色以檢測PSC活化,增殖及分化情況,部分檢測大鼠胰腺組織中I、III型膠原含量,IL-1,IL-6, IL-8, IL-10,TNF-α, TGF-β表達(dá)水平。 4.檢測指標(biāo)評價(jià)胰腺病變程度：①炎性細(xì)胞浸潤程度②壞死程度：③結(jié)構(gòu)破壞④有無黏液水腫⑤有無萎縮評價(jià)纖維化程度；檢測胰腺組織中炎性因子的表達(dá)水平。 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法均數(shù)之間的差異應(yīng)用單向方差分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(χ±s)表示,采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析,P0.05為差異的顯著性意義。 結(jié)果 1.模型組1d后胰腺組織出現(xiàn)水腫,中性粒細(xì)胞浸潤；7d后炎癥逐漸加重,胰腺組織可見炎性細(xì)胞廣泛浸潤；14d后胰腺組織出現(xiàn)廣泛的炎癥細(xì)胞浸潤以及輕度纖維化；28d時(shí)胰腺組織纖維化進(jìn)展性加重,可見大量膠原沉積；60d后病理顯示胰腺小葉結(jié)構(gòu)破壞,廣泛的炎性細(xì)胞浸潤,間質(zhì)纖維化比較嚴(yán)重。 假治療組和模型組病理表現(xiàn)大致相同。 治療組炎癥細(xì)胞浸潤狀況減輕,膠原沉積面積減小,間質(zhì)纖維化狀況有所改蓋 空白組期間未見明顯變化。 2.治療組中desmin、GFAP、α-SMA表達(dá),組織中Ⅰ、Ⅲ膠原含量, IL-1,IL-6, IL-8, TGF-β均低于假治療組與模型組(P0.05),IL-10,TNF-α則高于假治療組和模型組(P0.05)。模型組和假治療組之間desmin、GFAP、α-SMA水平,組織中Ⅰ、Ⅲ膠原含量,IL-1,IL-6, IL-8, IL-10,TNF-α, TGF-β的表達(dá)水平無明顯差異性(P0.05) 3.定植在胰腺內(nèi)的MSCs周圍可見凋亡的胰腺細(xì)胞。 結(jié)論 1.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠減輕胰腺炎炎癥反應(yīng),降低胰腺星狀細(xì)胞的活化、增殖、分化,減少膠原纖維的沉積,減輕甚至逆轉(zhuǎn)胰腺纖維化。 2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輸入慢性胰腺炎大鼠模型個(gè)體體內(nèi),能夠定植在損傷的胰腺中,修復(fù)受損的胰腺組織,能夠?yàn)榕R床研究提供一定的依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R576

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

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本文編號：2728307