【摘要】： 目的:探討在油酸誘導(dǎo)的脂肪變性肝細(xì)胞模型中AQP9(Aquaproin-9)的表達(dá)和意義以及p38 MAPK(p38 mitogen-activted protein kinase)信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)AQP9表達(dá)的調(diào)節(jié)作用及意義,進(jìn)一步探討AQP9在非酒精性脂肪肝中的作用及可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法:正常成人L-02肝細(xì)胞株,用含10%小牛血清的1640培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)。采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法觀察正常肝細(xì)胞株L-02中AQP9的表達(dá)部位。采用MTT法摸索建立模型所需的最適宜的油酸濃度,并用該濃度的油酸誘導(dǎo)正常肝細(xì)胞株L-02建立肝細(xì)胞脂肪變模型。另外在模型組中加入p38 MAPK的阻斷劑SB203580。分為正常對(duì)照組(C組),模型組(M組),和阻斷劑組(B組)。當(dāng)油酸作用肝細(xì)胞24h、48h、72h后采用油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)的脂滴的積聚情況。并檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)TG、FFA、甘油含量。RT-PCR法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)AQP9 mRNA的表達(dá)變化。Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)AQP9,總p38 MAPK,磷酸化p38 MAPK蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果:成功建立了油酸誘導(dǎo)的L-02肝細(xì)胞株脂肪變性的模型。油紅O染色光學(xué)顯微鏡觀察對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)未見肝細(xì)胞脂肪變,細(xì)胞排列緊密,邊緣清晰,細(xì)胞核清晰可見。模型組在培養(yǎng)24h后可見少量脂肪變細(xì)胞, 72h細(xì)胞內(nèi)聚集的脂滴數(shù)量最多,部分融合成較大的脂滴,脂肪變性程度最重。免疫細(xì)胞化學(xué)的結(jié)果顯示AQP9的陽性產(chǎn)物在正常肝細(xì)胞株L-02中表達(dá)比較豐富,主要位于肝細(xì)胞的細(xì)胞膜上,而細(xì)胞漿和細(xì)胞核中無表達(dá)。M組和B組TG、FFA、甘油含量在各時(shí)相點(diǎn)較C組明顯增高(p0.01)。其中M組增高最為顯著,與B組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。M組AQP9 mRNA和蛋白的表達(dá)均一致上調(diào),與C組相比有顯著差異(p0.01),B組AQP9 mRNA和蛋白較C組表達(dá)上調(diào),但上調(diào)幅度低于M組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。M組和B組p38 MAPK總蛋白較C組,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),M組磷酸化p38 MAPK蛋白較C組表達(dá)上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),B組中磷酸化P38 MAPK蛋白較C組無明顯變化(p0.05),但表達(dá)顯著低于M組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。 結(jié)論:采用油酸誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞株能夠成功制作培養(yǎng)的肝細(xì)胞脂肪變模型。在肝細(xì)胞脂肪變模型中AQP9隨肝細(xì)胞脂肪變性程度加重表達(dá)逐漸增加,阻斷p38 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路后,AQP9的表達(dá)較模型組降低,肝脂肪變性程度降低,由此可見AQP9可能參與了肝細(xì)胞的脂代謝及脂肪變性的形成,且p38 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑對(duì)在肝細(xì)胞脂肪變性模型中AQP9的表達(dá)有調(diào)節(jié)作用。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R575.5
【圖文】：

圖 1. 各組肝細(xì)胞中 AQP9 mRNA 的表達(dá)2. M 組：24h 3. M 組：48h 4. M 組：72h 5. B 組：24h 6. B 組：48h 7. B 組表 8 AQP9 mRNA 在培養(yǎng)肝細(xì)胞中的表達(dá)（積分吸光度 A）0h 24h 48h 72h.12±0.02 —— —— ———— 0.29±0.03* 0.56±0.05* 0.79±0.08*—— 0.20±0.02#0.39±0.05** 0.59±0.06***p、**p<0.01，#p<0.05；與 M 組比較，**p<0.050.81M組 B組

圖 2. 各組肝細(xì)胞中 AQP9 蛋白的表達(dá). M 組：24h 3. M 組：48h 4. M 組：72h 5. B 組：24h 6. B 組： 可見 M 組 p38 MAPK 總蛋白的表達(dá)較 C 組沒有明顯有明顯變化，各時(shí)相點(diǎn)于 C 組比較沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意各時(shí)相點(diǎn) p38 MAPK 總蛋白較 C 組和 M 組均無明顯0.05）(見表 9)。圖 3.各組肝細(xì)胞 t-p38 MAPK 蛋白的表達(dá)

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本文編號(hào)：2727260