【摘要】：目的:Ataxin-3(AT3)是一種去泛素化酶,在不同個體間存在明顯的多態(tài)性分布特征,這種多態(tài)性是否影響黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)相關(guān)的肝硬化(liver cirrhosis,LC)發(fā)病并不清楚,本項目目的在于探討AT3基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)在AFB1相關(guān)性LC發(fā)病中的作用及相關(guān)機制。方法:(1)本項目是一項基于醫(yī)院的病例-對照研究,包括384例LC患者(疾病組)和851例沒有任何肝臟疾病的對照(對照組)。為了分析,我們設(shè)計了小樣本篩選(含100對研究對象)和大樣本確認(rèn)(含284例患者和751例對照)兩階段研究模式以評估AT3基因SNPs與AFB1相關(guān)性LC的發(fā)病風(fēng)險;(2)AT3基因SNPs通過SNPs數(shù)據(jù)庫獲得,我們以該基因的SNPs等位基因最小概率在亞洲人群中分布大于或等于0.1作入選標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn),本研究共納入264個SNPs作為第一個階段的篩選對象;(3)以小測序法SNaPshot檢測第一個階段中的264個SNPs的基因型,以TaqMan探針法PCR技術(shù)檢測第二個階段中3個SNPs的基因型;(4)通過血液中AFB1加合物水平來評價研究對象的AFB1暴露水平,采用競爭酶聯(lián)免疫吸附法檢測血液中AFB1加合物的水平;(5)采用免疫組織化學(xué)方法檢測LC組織樣本中AT3蛋白的表達(dá)情況;(6)通過TaqMan-PCR法檢測LC組織樣本中AT3 mRNA的表達(dá)水平;(7)通過采用Logistic regression模型來分析AT3基因SNPs對LC發(fā)病風(fēng)險的影響,使用優(yōu)勢比(odd ratio,OR)和相應(yīng)的95%置信區(qū)間(confidence interval,CI)評價具體的貢獻(xiàn)值;通過方差分析和Spearman’s等級相關(guān)法檢驗AT3基因SNPs對AT3基因表達(dá)及AFB1-DNA加合物的影響。結(jié)果:(1)在疾病組與對照組兩組中,研究對象的年齡、性別、民族、吸煙和酗酒史、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染等臨床學(xué)資料的分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(2)和對照組相比,LC患者具有更高的血清AFB1白蛋白加合物,分別為1.48±0.32 ln fmol/mg和2.40±0.91 ln fmol/mg;(3)和具有低AFB1暴露的個體相比,這些具有AFB1暴露的個體將具有更高的LC發(fā)病風(fēng)險,中高暴露對應(yīng)的風(fēng)險值為3.59(2.65 4.84)和7.74(7.74 10.87):(4)通過第一個階段的篩選分析,我們發(fā)現(xiàn)三個差異性分布的AT3 SNPs,具體為rs8021276、rs7158733和rs10146249;(5)通過第二個階段的確認(rèn)分析,我們發(fā)現(xiàn)只有rs8021276與LC的發(fā)病風(fēng)險有關(guān),兩個階段數(shù)據(jù)的融合分析有相似的發(fā)現(xiàn);以含有rs8021276 A等位基因的純合子(即rs8021276-AA)相比,含有rs8021276 G等位基因的基因型(即雜合子基因型rs8021276-AG和突變型純合子rs8021276-GG)有統(tǒng)計學(xué)意義地增加LC的發(fā)病風(fēng)險,對應(yīng)風(fēng)險值分別為2.48(1.84-3.33)和6.98(4.35-11.22);(6)在AFB1暴露和AT3 rs8021276基因型的聯(lián)合分析中,我們發(fā)現(xiàn)AT3 rs8021276風(fēng)險基因型(OR1)與AFB1不同暴露水平間存在相乘交互作用;(7)在LC組織樣本中,AT3 rs8021276多態(tài)性與更低的AT3 mRNA和蛋白水平相關(guān),相關(guān)性分析顯示為負(fù)相關(guān)(r=-0.25,,P=7.30×10~(-7));(8)AT3 rs8021276多態(tài)性影響LC組織中AFB1-DNA加合物水平,rs8021276-AA、rs8021276-AG和rs8021276-GG三種基因型對應(yīng)的AFB1-DNA加合物濃度分別為1.51±1.23μmol/mol DNA、2.09±1.18μmol/mol DNA和3.92±1.81μmol/mol DNA,P值為5.61×10~(-4)。結(jié)論:當(dāng)前研究結(jié)果表明AT3 rs8021276多態(tài)性增加LC的發(fā)病風(fēng)險,這種增加的風(fēng)險在具有高AFB1暴露的條件下更為明顯,可能機制為AT3 rs8021276多態(tài)性通過影響AT3表達(dá)和功能相關(guān)。這些結(jié)果提示AT3多態(tài)性可用于判斷不同個體在AFB1暴露下的LC發(fā)病風(fēng)險,其中rs8021276是一個潛在的可選標(biāo)志物。
【學(xué)位授予單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R575.2
【圖文】：

35圖 3-1 AT3 rs 8021276 多態(tài)性影響 AT3 蛋白表達(dá)Figure 3-1. The AT3 rs8021276 polymorphism significantly affecting AT3 expression圖 A- C：代表性的免疫組織化學(xué)圖像（標(biāo)度：50 mm）；圖 D ：Spearman 等級相關(guān)分析。

36圖 3-2 AT3 rs 8021276 多態(tài)性影響 AT3 mRNA 表達(dá)Figure 3-2. The AT3 rs8021276 polymorphism significantly affecting AT3 mRNA expres

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本文編號：2725915