【摘要】：第一章 Galectin-3在誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞分化中的作用目的通過單獨應(yīng)用Galectin-3、肝細(xì)胞生長因子(HGF)以及聯(lián)合Galectin-3、HGF對BMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),以研究Galectin-3對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)向肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的作用。方法對大鼠股骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行提取,分離,傳代培養(yǎng)及鑒定。取第4代細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng),分組:A組:SD大鼠BMSCs;B組:SD大鼠BMSCs+0.5μg/ml Gal-3;CC組:SD大鼠BMSCs+20ng/mlHGF;D組:SD大鼠BMSCs+0.5μg/ml Gal-3+20ng/ml HGF;E組:大鼠肝細(xì)胞。分別在誘導(dǎo)后7、14、21、28d進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、糖原染色觀察,并行實時定量PCR以及Western blot檢測,鑒定其分化情況。結(jié)果大鼠股骨骨髓分離出的細(xì)胞符合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞特性。誘導(dǎo)后,B、C、D組BMSCs形態(tài)逐漸向肝樣細(xì)胞轉(zhuǎn)化,D組28d時細(xì)胞形態(tài)與肝細(xì)胞相對比相似度最高。糖原染色28d時A組無染色,B、C、D組染色較前增多,D組染色率最高(P0.05)。Q-PCR檢測AFP、ALB、CK-18表達(dá)逐漸升高,28d時B組與C組各指標(biāo)較接近(P0.05)。Gal-3與HGF對AFP、ALB的mRNA表達(dá)不存在交互效應(yīng)(AFP:F=0.236,P=0.640;ALB:F=50.639,P=0.000),對CK-18的mRNA表達(dá)有協(xié)同效應(yīng)(F=50.639,P=0.000)。Western blot檢測A組幾乎不表達(dá)AFP、ALB及CK18,B、C、D組AFP、ALB及CK18蛋白表達(dá)隨時間延長,逐漸增加。結(jié)論Galectin-3能夠單獨誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞分化,而且聯(lián)合HGF誘導(dǎo)BMSCs分化的效率更高。第二章 Galectin-3誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞分化的機(jī)制研究目的探討Galectin-3聯(lián)合BMSCs對治療大鼠急性肝衰竭的效果,并研究Galectin-3誘導(dǎo)BMSCs為肝樣細(xì)胞的分子機(jī)制。方法首先構(gòu)建大鼠急性肝衰竭模型,并比較不同處理組大鼠的肝功能恢復(fù)情況以及觀察肝細(xì)胞的特性。然后通過基因芯片篩選出Galectin-3誘導(dǎo)BMSCs分化為肝樣細(xì)胞過程中差異性表達(dá)基因,從而找出所涉及的相關(guān)通路。最后通過細(xì)胞免疫組織化學(xué)法和Western Blot檢測YAP、P-YAP及肝細(xì)胞特異蛋白ALB、AFP、CK18的表達(dá)。結(jié)果Galectin-3聯(lián)合BMSCs能有效改善肝衰竭大鼠的肝功能。基因芯片發(fā)現(xiàn)了 Galectin-3誘導(dǎo)BMSCs分化為肝樣細(xì)胞過程中上調(diào)基因為27個,下調(diào)基因為 62 個。涉及 TGF-β、PI3K-Akt及 Hippo 等信號通路。Gal-3 及 Gal-3+XMU-MP-1誘導(dǎo)組的YAP表達(dá)較空白對照組增加,Gal-3+XMU-MP-1較單獨應(yīng)用Gal-3誘導(dǎo)BMSCs分化的效率高。結(jié)論Galectin-3聯(lián)合BMSCs能有效治療大鼠急性肝衰竭,誘導(dǎo)過程與TGF-β、PI3K-Akt及Hippo等信號通路相關(guān)。抑制Hippo信號通路可提高誘導(dǎo)效率。本項目從細(xì)胞-動物兩個層次,揭示了 Galectin-3誘導(dǎo)BMSCs為肝樣細(xì)胞的分子機(jī)制,為臨床上應(yīng)用Galectin-3聯(lián)合BMSCs治療肝衰竭提供科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R575
【圖文】：

出現(xiàn)聚集生長；培養(yǎng)至２８ｄ時，各組細(xì)胞數(shù)量繼續(xù)增加，形態(tài)與肝細(xì)胞相逡逑似，呈鋪路石樣改變，形成島狀連接成片。其中以Ｄ組２８ｄ時細(xì)胞形態(tài)與肝細(xì)逡逑胞相對比相似度最高（圖１．２Ａ）。取各組各時間點細(xì)胞進(jìn)行糖原染色鑒定，結(jié)果逡逑可見肝細(xì)胞明顯染色，Ｂ、Ｃ、Ｄ組隨時間推移染色率（ＩＯＤ／Ａｒｅａ）逐漸增多。逡逑２８ｄ時Ａ組無明顯染色，Ｄ組染色率最高，且與Ｂ、Ｃ組有明顯差異逡逑（Ｐ＜０．０５），Ｂ、Ｃ邋組間無明顯差異（Ｐ＞０．０５）（圖邋１．２Ｂ、Ｃ）。逡逑１９逡逑

取各組大鼠的外周血，各組大鼠在注射入試劑前各項肝功能指標(biāo)無明顯差逡逑異。在注射入試劑之后，各組肝功指標(biāo)均逐漸好轉(zhuǎn)。Ｂ－Ｆ組與Ａ對比，第２天逡逑開始ＡＬＴ、ＴＢＩＬ及ＡＬＢ均有好轉(zhuǎn)（圖２．２Ａ）。另外，Ｃ、Ｄ組相對比發(fā)現(xiàn)，逡逑注射試劑后第２天Ｄ組ＡＬＴ水平顯著低于Ｃ組，且Ｄ組第３天的ＡＬＢ水平顯逡逑著高于Ｃ組（Ｐ＜０．０５）（圖２．２Ｂ）。Ｅ組與Ｆ組對比發(fā)現(xiàn)，注射試劑后第３天時逡逑Ｆ組ＡＬＴ及ＴＢｉｌ水平顯著低于Ｅ組，且Ｆ組第５天的ＡＬＢ水平顯著高于Ｅ組逡逑（Ｐ＜０．０５）（圖邋２．２Ｃ）。逡逑３６逡逑

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本文編號：2724823