【摘要】：炎癥性腸病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)和克羅恩病(Crohn's Disease,CD),是一種以腸道慢性非特異性炎癥為特征的自身免疫性疾病,對患者生活質(zhì)量具有嚴重影響,并且對醫(yī)療保健系統(tǒng)造成巨大經(jīng)濟負擔。IBD的發(fā)病機制尚未完全明確,目前認為與遺傳、環(huán)境、免疫因素相關,其中T細胞的異�；罨凸δ芪蓙y在IBD的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。我們從公共數(shù)據(jù)庫調(diào)取數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn),從不同的自身免疫性疾病患者體內(nèi)分離的外周CD4+T細胞均可檢測到Usp16表達量升高,然而導致Usp16升高的可能原因未予以闡明。且目前尚無研究探究USP16介導T細胞過度活化的可能機制,因而我們希望闡釋USP16在調(diào)控T細胞功能中的作用,以及參與IBD發(fā)病過程的分子機制。為探究這一問題,我們收集了IBD患者的外周血單核細胞和CD4+T細胞,檢測其中Usp16的表達量。較健康對照,UC和CD患者外周血單核細胞及CD4+T細胞中Usp16的表達顯著上升�；颊吣c道組織標本也觀察到USP16與CD4明顯的共定位。為進一步確認USP16是否通過調(diào)控T細胞功能參與IBD的發(fā)生發(fā)展,我們構(gòu)建了 T細胞條件性Usp16敲除小鼠(Usp16TKO)。用該敲除小鼠及同窩WT小鼠建立T細胞過繼轉(zhuǎn)移腸炎模型發(fā)現(xiàn),接受Usp16TKO T細胞的受體小鼠腸道炎癥癥狀較輕微,腸道組織結(jié)構(gòu)相對較完整。對Usp16TKO小鼠T細胞功能的研究結(jié)果顯示,USP16在T細胞的活化、增殖和分化中發(fā)揮著至關重要的作用。之后我們對T細胞信號通路(TCR)蛋白進行篩查,發(fā)現(xiàn)USP16影響NFAT核轉(zhuǎn)位且能夠與其上游由Ppp3cb和Ppp3cc編碼的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CNA)特異性結(jié)合,擦除其多聚泛素鏈,并且我們發(fā)現(xiàn)CNA的K29位泛素化修飾抑制NFAT募集及其靶向基因的轉(zhuǎn)錄。我們的工作闡明了去泛素化酶USP16通過影響鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶對底物的招募,來調(diào)控外周T細胞存活與活化。我們也揭示了 USP16調(diào)節(jié)鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶泛素化水平及活性的關鍵分子機制,為炎癥性腸病的治療提供了新型免疫抑制藥物靶點。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R574
【圖文】：

Ｔ細胞受體（ＴＣＲ）介導的Ｔ細胞活化在Ｔ細胞發(fā)育、增殖及分化等過程中逡逑扮演至關重要的角色，Ｔ細胞信號通路如附圖１所示。ＴＣＲ激活可促進許多信號逡逑傳導級聯(lián)反應，ＴＣＲ信號激活始于免疫受體酪氨酸依賴性活化基序（ＩＴＡＭｓ）的逡逑磷酸化，而后其招募Ｚｅｔａ鏈相關蛋白激酶（Ｚａｐ－７０）。Ｚａｐ－７０能磷酸化接頭蛋白逡逑ＬＡＴ，ＬＡＴ相關效應分子的．活化導致信號通過三種主要信號通路進行傳導：鈣調(diào)逡逑蛋白、ＭＡＰＫ和ＮＦ－ｋＢ信號通路，其中鈣離子結(jié)合的鈣調(diào)蛋白（Ｃａ２＋／ＣａＭ）激活逡逑鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶，后者通過轉(zhuǎn)錄因子ＮＦＡＴ促進ＩＬ－２等細胞因子的基因轉(zhuǎn)錄。逡逑

附圖２邋ＴＣＲ信號通路［６］逡逑泛素羧基末端水解酶１６邋（ＵＳＰ１６）是一種去泛素化酶（ＤＵＢ），可促進Ｐｏｌｏ逡逑樣激酶〗（ＰＬＫ－１）在動粒上的定位和維持，以保證染色體排列的正確性，故而為逡逑有絲分裂過程中染色體分離所必需ｍ。當與胞質(zhì)分裂蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)劑１邋（ＰＲＣ１）偶逡逑聯(lián)時，ＵＳＰ１６還可以使組蛋白Ｈ２Ａ去泛素化并調(diào)節(jié)基因表達［８］。ＵＳＰ１６的異常表逡逑達與唐氏綜合征（２１三體綜合征）有關［９］，然而尚無相關研究探討為何唐氏綜合逡逑征患兒發(fā)生急性淋巴細胞白血�。ǎ粒蹋蹋┑娘L險增加［１（）］。我們分析公共數(shù)據(jù)庫數(shù)逡逑據(jù)發(fā)現(xiàn)，從患有不同自身免疫性疾病的患者體內(nèi)分離的外周ＣＤ４＋Ｔ細胞均表現(xiàn)出逡逑ｔ／ｓｐＭ升高。因此，我們推測ＵＳＰ１６的異常表達參與Ｔ細胞的過度活化，但其具逡逑體機制仍不明了。逡逑泛素化作為一種蛋白質(zhì)修飾方式，在各種生理過程中發(fā)揮重要功能。通過對逡逑蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、定位、活性以及相互作用進行調(diào)控，泛素化廣泛參與諸如轉(zhuǎn)錄調(diào)逡逑

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本文編號：2724771