【摘要】：急性肝損傷是臨床常見(jiàn)的急性肝臟疾病之一,其發(fā)病原因主要包括藥物過(guò)量、毒性物質(zhì)暴露、肝炎病毒感染以及手術(shù)所致的缺血再灌注損傷。嚴(yán)重的急性肝損傷可導(dǎo)致急性肝衰竭危及患者生命。雖然急性肝損傷的發(fā)病機(jī)制尚未闡明,但免疫炎性反應(yīng)的激活在其中發(fā)揮了極其重要的作用。巨噬細(xì)胞作為肝臟內(nèi)數(shù)量最多的先天免疫細(xì)胞是維持肝臟免疫平衡的重要因素。不同類(lèi)型的損傷因素可激活巨噬細(xì)胞啟動(dòng)肝內(nèi)免疫炎性反應(yīng),從而進(jìn)一步加重肝臟損傷。因此如何調(diào)控巨噬細(xì)胞的促炎性反應(yīng)是目前急性肝損傷研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。本課題旨在通過(guò)基因敲除和藥物干擾兩個(gè)手段分析和探究巨噬細(xì)胞功能的調(diào)控在兩種不同類(lèi)型的急性肝損傷中的作用及其機(jī)制。本課題的研究將為調(diào)控巨噬細(xì)胞的免疫炎性反應(yīng)在治療急性肝損傷中的應(yīng)用提供新的思路和理論基礎(chǔ)。課題分為以下兩個(gè)部分:第一部分TGR5/Cat E信號(hào)通路調(diào)控巨噬細(xì)胞的遷移和極化在肝臟缺血再灌注損傷中的作用和機(jī)制研究研究背景:肝內(nèi)的免疫炎性反應(yīng)是肝臟缺血再灌注(ischemia/reperfusion,IR)損傷的主要原因之一,巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的促炎性反應(yīng)是其中重要的因素。許多研究表明G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體(bile acid-responsive G-protein-coupled receptor,TGR5)在先天免疫調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。我們課題組前期研究證實(shí),TGR5能夠抑制IR后的肝內(nèi)炎性反應(yīng)從而保護(hù)肝臟IR損傷,但是其具體的機(jī)制仍不清楚。研究目的:研究TGR5調(diào)控巨噬細(xì)胞的促炎性反應(yīng)在肝臟IR損傷中的作用和機(jī)制。方法:我們采用野生型小鼠(wild type,WT)和TGR5基因敲除(TGR5~(-/-))小鼠構(gòu)建骨髓移植嵌合體如下:WT→WT(髓系細(xì)胞和非髓系細(xì)胞均表達(dá)TGR5)、WT→TGR5~(-/-)(僅在髓系細(xì)胞表達(dá)TGR5)、TGR5~(-/-)→WT(僅在非髓系細(xì)胞表達(dá)TGR5),并建立小鼠肝臟IR損傷模型,研究TGR5在骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞(bone marrow derived macrophages,BMDMs)中的激活對(duì)肝臟IR損傷的作用及其機(jī)制。利用基因芯片技術(shù),分析了脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)激活后TGR5~(-/-)BMDMs和WT BMDMs之間的差異表達(dá)基因譜。將連續(xù)10位準(zhǔn)備進(jìn)行肝部分切除術(shù)需第一肝門(mén)阻斷的患者隨機(jī)分為口服熊去氧膽酸組(5人)和口服安慰劑組(5人),采取患者術(shù)前1h和術(shù)后24h的外周血單核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。結(jié)果:TGR5~(-/-)→WT嵌合體小鼠的肝臟IR損傷以及肝內(nèi)的免疫炎性反應(yīng)與WT→WT、WT→TGR5~(-/-)嵌合體小鼠相比明顯加重。LPS體外活化TGR5~(-/-)BMDMs和WT BMDMs后,TGR5~(-/-)BMDMs遷移能力更強(qiáng),并且更容易向促炎性巨噬細(xì)胞(M1)極化。TGR5激活劑INT-777在體內(nèi)、體外均能明顯增強(qiáng)TGR5的抑炎性效果�；蛐酒瑱z測(cè)LPS活化后的TGR5~(-/-)BMDMs和WT BMDMs的差異表達(dá)基因譜,結(jié)果顯示TGR5~(-/-)BMDMs相比于WT BMDMs分泌細(xì)胞因子的能力和趨化性明顯增強(qiáng)。組織蛋白酶E(cathepsin E,Cat E)是TGR5~(-/-)BMDMs中上調(diào)表達(dá)最明顯的基因。利用siRNA干擾技術(shù)敲低TGR5~(-/-)BMDMs中Cat E的表達(dá)能夠明顯抑制TGR5~(-/-)BMDMs的遷移能力和M1極化。并且,體內(nèi)巨噬細(xì)胞靶向性敲低Cat E同樣能夠減輕TGR5~(-/-)→WT嵌合體小鼠的肝臟IR損傷以及肝內(nèi)的免疫炎性反應(yīng)。肝門(mén)阻斷患者PBMCs的流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,肝臟的IR明顯激活了人外周巨噬細(xì)胞的TGR5表達(dá),并且與巨噬細(xì)胞的抑炎性極化(M2)趨勢(shì)相符�？诜苋パ跄懰岽龠M(jìn)了術(shù)前、術(shù)后人外周巨噬細(xì)胞TGR5的激活與M2極化。結(jié)論:TGR5能夠抑制巨噬細(xì)胞的遷移能力和M1極化從而減輕IR后肝內(nèi)的免疫炎性反應(yīng),在肝臟IR損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。TGR5限制巨噬細(xì)胞促炎性反應(yīng)的作用是通過(guò)抑制Cat E實(shí)現(xiàn)的。靶向TGR5/Cat E信號(hào)通路可能為治療肝臟IR損傷提供新的治療思路。第二部分精胺調(diào)控肝臟巨噬細(xì)胞的免疫應(yīng)答在急性肝損傷中的作用及機(jī)制研究研究背景:肝臟內(nèi)巨噬細(xì)胞(Kupffer cells,KCs)在毒性物質(zhì)所致的急性肝損傷中發(fā)揮重要的作用。最新研究發(fā)現(xiàn)自噬在不同炎性環(huán)境下具有調(diào)控巨噬細(xì)胞M1/M2極化的功能。精胺是多胺的一種,具有抗氧化、抗衰老的作用。越來(lái)越多的研究表明精胺能夠促進(jìn)自噬在一些組織和細(xì)胞損傷中起到保護(hù)作用,但是其在急性肝損傷中的作用和機(jī)制尚不清楚。研究目的:探索精胺調(diào)控肝臟巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫炎性反應(yīng)在硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)導(dǎo)致的急性肝損傷中的作用和機(jī)制。方法:采用腹腔注射TAA的方法建立小鼠急性肝損傷的模型。肝組織HE染色和免疫組化分別觀察精胺預(yù)處理對(duì)TAA誘導(dǎo)的急性肝損傷以及對(duì)肝內(nèi)炎性反應(yīng)的影響。分離TAA處理后的肝臟KCs體外培養(yǎng),在體外觀察精胺對(duì)TAA誘導(dǎo)的KCs炎性反應(yīng)的調(diào)控作用及其對(duì)KCs自噬的影響。體內(nèi)、體外利用巨噬細(xì)胞靶向si RNA干擾技術(shù)探索精胺調(diào)控KCs自噬在TAA誘導(dǎo)的急性肝損傷中的作用。結(jié)果:精胺預(yù)處理能明顯減輕TAA誘導(dǎo)的急性肝損傷,并且能明顯抑制肝內(nèi)炎性反應(yīng)。分離TAA處理后小鼠肝臟KCs進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)TAA可誘導(dǎo)KCs向M1型極化,增強(qiáng)KCs的促炎性反應(yīng)。精胺能抑制TAA刺激后的KCs向M1型極化而促進(jìn)其向M2型極化,表現(xiàn)為M1型基因(IL-1β、i NOS)表達(dá)下調(diào)和M2型基因(Arg-1、Mrc-1)表達(dá)上調(diào),以及KCs分泌的促炎性細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6)減少而抑炎性細(xì)胞因子(IL-10)增多。精胺能夠通過(guò)激活A(yù)TG5促進(jìn)TAA刺激后KCs的自噬,表現(xiàn)為L(zhǎng)C3B-II的蛋白水平增高,p62的蛋白水平降低,氯喹(chloroquine,CQ)能夠顯著阻斷精胺誘導(dǎo)的KCs自噬流。體內(nèi)、體外采用ATG5-si RNA干擾ATG5在KCs中的表達(dá)均能明顯抑制精胺的抑炎性效果和對(duì)TAA誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用。結(jié)論:在TAA誘導(dǎo)的急性肝損傷中,精胺可通過(guò)激活A(yù)TG5引發(fā)KCs的自噬從而抑制其向M1型極化而促進(jìn)其向M2型極化,起到抑制肝內(nèi)的炎性反應(yīng)、減輕肝損傷的作用。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R575
【圖文】：

24圖 1.髓系細(xì)胞中 TGR5 的激活保護(hù)肝臟 IR 損傷。各組骨髓嵌合體小鼠建立肝臟IR 模型，于再灌注 6h 后收集血清和肝臟組織。A.血清 ALT 水平；B.血清 AST 水平；C.肝臟組織 HE 染色；D.Suzuki 評(píng)分；E.肝臟組織 TUNEL 染色；F.凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。（*P<0.05）

1 髓系細(xì)胞中 TGR5 的激活減輕了肝臟 IR 后的炎性反應(yīng)。各組骨髓嵌立肝臟 IR 模型，于再灌注 6h 后收集血清。A.PCR 檢測(cè)肝臟組織中炎 TNF-α 、IL-6、CXCL-10、IL-10 基因表達(dá)水平。B.ELISA 檢測(cè)血清 TNF-α 、IL-6、IL-10 的水平；臟損傷時(shí)肝內(nèi)的巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增加，主要原因是髓系單核細(xì)胞中趨化因子的作用下被募集到肝內(nèi)的損傷部位，并且在局部微環(huán)境化而來(lái)。因此，我們利用免疫組化檢測(cè)肝內(nèi)的巨噬細(xì)胞數(shù)量的變化2A、B 所示，在肝臟 IR 后，肝內(nèi)的 CD11b+巨噬細(xì)胞數(shù)量較 Sham 組明在 TGR5-/-→WT 組小鼠肝臟內(nèi) CD11b+巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯多于 WT→WTGR5-/-組。并且 INT-777 能有效地減少肝臟 IR 后 WT→WT 組和 WT→T的 CD11b+巨噬細(xì)胞數(shù)量，而對(duì) TGR5-/-→WT 組無(wú)明顯作用。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 葉俊杰;;千根草水提物對(duì)小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J];家庭醫(yī)藥.就醫(yī)選藥;2017年07期

2 李蘭蘭;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞腹移植治療急性肝損傷大鼠[J];健康之路;2017年10期

3 劉志偉;劉艷芬;黃彩云;韓素桂;張成俠;;肝癌經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞術(shù)后急性肝損傷的分析[J];貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年02期

4 康宏杰;張霞;侯延輝;吳洋;徐力生;孫磊;;秦艽對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J];中藥藥理與臨床;2012年06期

5 馮藝萍;;天然藥物抗急性肝損傷研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2011年21期

6 陳金英;李向陽(yáng);;丹皮總甙防治大鼠急性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2009年03期

7 李正祿;孟璐;張學(xué)武;;黃芩苷對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2009年11期

8 潘興華;龐榮清;陳系古;劉建昆;何占龍;王惠萱;張步振;王鶴樺;楊勇琴;屈璐;;獼猴自體骨髓干細(xì)胞移植治療急性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

9 彭勃,苗明三,王宇亮;雷公藤多甙片致小鼠急性肝損傷的初步探討[J];中國(guó)中藥雜志;2003年11期

10 王玉燕,蘇怡,侯延文,安偉;加藥白酒與普通白酒對(duì)小鼠的急性肝損傷[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2001年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 戎茜;安利國(guó);袁金鐸;邢維賢;;庫(kù)拉索蘆薈多糖對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

2 胡建平;趙詩(shī)云;;肝復(fù)康片對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[A];首屆江西省科協(xié)學(xué)術(shù)年會(huì)江西省中醫(yī)藥學(xué)術(shù)發(fā)展論壇論文集[C];2010年

3 王俊平;楊穎;李紅霞;張瑾;馮秋玲;;急性肝損傷鼠~(13)C-美沙西丁呼氣試驗(yàn)的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)消化病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下冊(cè)）[C];2007年

4 劉雋;黃建釗;范偉;張毅;張瑩;石承先;張德林;馮新富;宋陸軍;秦新裕;;骨髓細(xì)胞移植治療小鼠急性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[A];2007年貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)外科分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

5 李燕君;尚芳紅;王森弘;李莉;徐曉玉;;銀天顆粒對(duì)小鼠急性肝損傷保護(hù)作用研究[A];化學(xué)與創(chuàng)新藥物——2013年中國(guó)化學(xué)會(huì)產(chǎn)學(xué)研合作研討會(huì)會(huì)議論文集[C];2013年

6 呂正兵;李謙;葉波平;邊杉;王穎;阮期平;吳梧桐;;鯊肝活性肽對(duì)對(duì)乙酰氨基酚致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2003年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要集[C];2003年

7 衛(wèi)立辛;;腫瘤壞死因子α在急性肝損傷中的雙重作用及機(jī)制研究[A];第十五屆全國(guó)肝癌學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2015年

8 韓向北;郭亞雄;李德龍;徐多;趙麗娟;;郁金對(duì)小鼠急性肝損傷免疫調(diào)節(jié)作用[A];吉林省第六屆生命科學(xué)大型學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)論文集[C];2008年

9 鄭振;陳松;馬曉春;;多發(fā)創(chuàng)傷繼發(fā)嚴(yán)重軟組織感染并急性肝損傷一例分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)重癥醫(yī)學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

10 楊艷;吳芹;龔其海;徐世兵;石京山;;黔產(chǎn)毛劅提取物對(duì)急性肝損傷小鼠的保護(hù)作用[A];中國(guó)中藥雜志2015/專(zhuān)集：基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)從業(yè)人員科技論文寫(xiě)作培訓(xùn)會(huì)議論文集[C];2016年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 彭勃；苗明三；王宇亮;雷公藤多甙片致急性肝損傷機(jī)理[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 周順;巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答調(diào)控在急性肝損傷中的作用及機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

2 吳建波;CHI3L1調(diào)控Th1細(xì)胞分化保護(hù)急性肝損傷的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

3 趙恒利;轉(zhuǎn)錄抑制因子HMBOX1對(duì)LPS/D-GalN誘導(dǎo)急性肝損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2018年

4 趙正保;抗腸源性?xún)?nèi)毒素藥物《雙利肝》的藥學(xué)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2005年

5 王春妍;急性肝損傷腸源性?xún)?nèi)毒素血癥的基礎(chǔ)研究及藥物干預(yù)[D];吉林大學(xué);2007年

6 劉雋;骨髓細(xì)胞移植治療小鼠急性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

7 劉文軍;嚴(yán)重創(chuàng)傷后腎缺血再灌注與急性肝損傷的保護(hù)性研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2008年

8 路燕;不同年齡和性別影響對(duì)乙酰氨基酚急性肝損傷敏感性差異的機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

9 常文舉;小鼠肝星狀細(xì)胞旁分泌機(jī)制在急性肝損傷再生修復(fù)中的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

10 何勇;肝臟線粒體DNA-TLR9-microRNA223環(huán)路負(fù)反饋調(diào)節(jié)對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)的急性肝損傷和炎癥的機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 段朝藜;IL-6在脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的急性肝損傷中的作用及機(jī)制研究[D];廈門(mén)大學(xué);2017年

2 賈亞楠;桑枝中主要二苯乙烯類(lèi)化合物保護(hù)LPS/D-GalN誘導(dǎo)的急性肝損傷[D];西南大學(xué);2018年

3 向紅梅;8-辛基小檗堿對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];西南大學(xué);2018年

4 郭心怡;芍藥苷減輕四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷與慢性肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

5 邰思佳;AWRK6對(duì)內(nèi)毒素誘發(fā)的小鼠急性肝損傷的修復(fù)作用與機(jī)制研究[D];遼寧大學(xué);2018年

6 吳媛媛;保肝藥物A對(duì)CCl_4致犬急性肝損傷保護(hù)作用的初步研究[D];吉林大學(xué);2018年

7 藺良才;蓑衣蓮?fù)蛩狨?duì)對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用研究[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2018年

8 劉晨;鳥(niǎo)苷酸發(fā)酵工藝優(yōu)化及肝保護(hù)功效研究[D];河南工業(yè)大學(xué);2018年

9 黃慧敏;HMGA2高甲基化在CCl_4誘導(dǎo)的急性肝損傷中的功能及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

10 蔣師放;NAMPT在對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)的急性肝損傷中作用的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2722561