【摘要】：肝纖維化是多種慢性肝病共有的病理改變。近年來(lái)關(guān)于肝纖維化發(fā)生、發(fā) 展的機(jī)制及其治療己從整體、細(xì)胞和分子水平進(jìn)行了大量的研究，資料表明肝 細(xì)胞和肝星形細(xì)胞（hepatic stellate cell,HSC）是肝纖維化發(fā)生、發(fā)展中最重要 的細(xì)胞，肝細(xì)胞損傷是肝纖維化的重要啟動(dòng)因素，肝星形細(xì)胞激活是肝纖維化 發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。肝纖維化是肝臟以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)合成和降解失衡的 結(jié)果。許多病因可以造成肝損傷，我國(guó)以病毒性肝炎為主要原因，當(dāng)前對(duì)原發(fā) 病變?nèi)詿o(wú)有效根治的措施，因此減輕和阻止纖維化反應(yīng)是十分重要的治療目 標(biāo)。 Decorin主要由成纖維細(xì)胞合成，屬于分泌型、小分子、富含亮氨酸蛋白 多糖（small，leucine－rich proteoglycans，SLRPs）基因擴(kuò)展家族成員之一，在調(diào) 節(jié)細(xì)胞粘附、遷徙、增殖及膠原纖維形成中起重要作用。研究表明decorin在 防止腎小球、肺等組織纖維化中起作用，decorin cDNA最近被用作一種新的基 因治療工具來(lái)治療由TGF β增高引起的纖維性疾病。Decorin能夠使Bleomycin 誘發(fā)倉(cāng)鼠肺纖維化的各項(xiàng)病理指標(biāo)顯著降低，提示decorin在抗肺纖維化中的藥 理作用。Decorin與肝纖維化的關(guān)系，國(guó)外學(xué)者通過(guò)免疫組化和原位雜交等技 術(shù)僅作了不同生理病理狀態(tài)下decorin在肝臟各種細(xì)胞的定性定位研究。國(guó)內(nèi) 關(guān)于decorin的研究很少，有關(guān)decorin與肝纖維化的研究尚屬空白。我們進(jìn)行 decorin對(duì)肝細(xì)胞和肝星形細(xì)胞影響以及細(xì)胞因子對(duì)decorin表達(dá)影響的體外研 究，以大鼠肝星形細(xì)胞株（HSC-T6）細(xì)胞和正常人肝細(xì)胞株（L-02）細(xì)胞為研 究靶細(xì)胞，從細(xì)胞和基因水平了解decorin在體外對(duì)肝臟細(xì)胞的調(diào)控作用，同時(shí) 選擇 IFNγ、PDGF等細(xì)胞因子與 HSC-T6細(xì)胞作用，觀察細(xì)胞因子對(duì) decorin 表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。旨在為探討decorin在肝纖維化形成機(jī)制中的作用提供理論 依據(jù)，為肝纖維化治療提供新思路。 一．Decorin對(duì)L-02和HSC-T6體外增殖的影響 互 中文紛召 Decorin是一種與生長(zhǎng)抑制活性密切相關(guān)的蛋白多糖分子，能夠控制多種 來(lái)源的細(xì)胞增殖。對(duì)肝臟組織細(xì)胞的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。我們通過(guò)decorin與正 常人肝細(xì)胞株（L心2）及大鼠肝星形細(xì)胞株（HSC＊6）體外共孵育，進(jìn)行細(xì) 胞計(jì)數(shù)和心摻入量測(cè)定，觀察decorin對(duì)這些細(xì)胞分裂增殖的影響，通過(guò)流式 細(xì)胞儀分析 DNA含量觀察其對(duì)細(xì)胞周期的影響。結(jié)果表明 5葉 卜g／ml decorin 作用4—6天后，與對(duì)照組相比在相同培養(yǎng)條件下細(xì)胞增殖數(shù)量及速度降低，以 10 pg／ffil作用更強(qiáng)，并且隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而明顯（P＜0刀1人作用48小時(shí)可使 細(xì)胞’＊－＊dR摻入量比對(duì)照組減少18．29％（P＜O．05），’＊－Leu摻入量無(wú)明顯改 變，提示對(duì)細(xì)胞DNA合成有影響。Decorin作用后，G／G；期細(xì)胞百分率比對(duì) 照增加19石3％和29．08％（P＜0刀1）石期細(xì)胞百分率比對(duì)照降低18．45％和Zo．98 ％（P＜0刀1X G。／M期細(xì)胞減少甚至消失。細(xì)胞經(jīng)20ug／ml decorin作用 6天， 臺(tái)盼藍(lán)染料排斥實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞活力在 90％以上，說(shuō)明 decorin在測(cè)試條件下對(duì) 所用細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性作用，其細(xì)胞數(shù)量低于對(duì)照是由于細(xì)胞受decorin作用所 致。結(jié)果表明decorin能夠抑制肝細(xì)胞和肝星形細(xì)胞的體外增殖，可能與細(xì)胞 G；期阻滯以及抑制細(xì)胞DNA合成有關(guān)。Decorin對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有負(fù)反饋調(diào)節(jié)作 用。 二．Decorin誘導(dǎo)L心2細(xì)胞和HSC16細(xì)胞詞亡的研究 肝組織損傷啟動(dòng)HSC 由一種靜止的富含維生素A的表型轉(zhuǎn)化為活化的 肌纖維母細(xì)胞樣（MFBLC），與靜止?fàn)顟B(tài)細(xì)胞相比，后者具有更高的增殖活力 并能大量合成細(xì)胞外基質(zhì)。逆轉(zhuǎn)HSC的活化表型或減少HSC的數(shù)量可以減少 ECM成分的過(guò)度沉積。我們以decorin為誘導(dǎo)劑，觀察decorin在體外對(duì)L．02 細(xì)胞和HSC16細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。 我們的實(shí)驗(yàn)從多方面表明 decorin在 20－40卜g／ml濃度作用后可使 HSC16 和L－02細(xì)胞發(fā)生凋亡。Decorin與L－02和HSC16細(xì)胞體外共同孵育后，細(xì) 胞出現(xiàn)了凋亡特征性改變，貼壁細(xì)胞變圓、縮小、脫落，臺(tái)盼藍(lán)染料排斥試驗(yàn) 表明這些細(xì)胞是活細(xì)胞；染色質(zhì)濃縮，聚集呈新月形或馬蹄形，形成凋亡小體；
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2000
【分類號(hào)】：R575.202

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 孔憲濤，高鋒;肝纖維化的實(shí)驗(yàn)與臨床研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1996年01期

2 沈禮勇;血小板衍生生長(zhǎng)因子在肝纖維化中的作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊(cè));1997年02期

3 胡中波;Fas在人體的表達(dá)及其意義[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));2000年01期

4 劉乃明;肝細(xì)胞的膠原合成[J];中華肝臟病雜志;1996年03期

5 高春芳，孔憲濤，范列英;TNFα對(duì)NIH／3T3細(xì)胞、肝貯脂細(xì)胞增殖及前膠原表達(dá)的影響[J];中華消化雜志;1994年01期

6 高春芳，孔憲濤，范列英;細(xì)胞因子對(duì)3T3細(xì)胞、肝細(xì)胞及貯脂細(xì)胞增殖的影響[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;1994年02期

本文編號(hào)：2721685