【摘要】：目的：潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis, UC)是炎癥性腸病(Inflammatory BowelDisease, IBD)的一種，該疾病主要侵及黏膜層和黏膜下層，其病因尚不十分清楚。近年來,腸黏膜中的樹突狀細(xì)胞（dendritic cell，DC）和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory Tcell, T reg）的作用是學(xué)者們研究的熱點(diǎn)�，F(xiàn)有的觀點(diǎn)認(rèn)為DC和T reg之間的免疫調(diào)節(jié)在潰瘍性結(jié)腸炎的炎癥反應(yīng)過程中起重要作用，并認(rèn)為Fms樣絡(luò)氨酸激酶3（Fms-like tyrosine kinase3，F(xiàn)lt3）及其配體（Flt3ligand，F(xiàn)lt3L）參與了UC炎癥反應(yīng)過程中DC和T reg之間的調(diào)節(jié)。因此本研究采用小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型，觀察小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型組與正常組小鼠的一般狀態(tài)、疾病活動(dòng)指數(shù)、光鏡下觀察HE染色病理變化和結(jié)腸黏膜損傷情況，并從細(xì)胞水平檢測小鼠結(jié)腸黏膜DC和T reg的表達(dá)，從基因水平和蛋白水平檢測Flt3和Flt3L的表達(dá)，探討DC和T reg及相關(guān)因子Flt3和Flt3L在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生、發(fā)展中所起的作用，為臨床UC的治療打下理論基礎(chǔ)。 方法：采用葡聚糖硫酸鈉（DSS）自飲法建立動(dòng)物模型，BALB/c雄性小鼠20只，體重約25g，隨機(jī)分為2組，每組10只。正常組：予飲用蒸餾水；模型組：予自飲50g/L DSS溶液7天，觀察小鼠的一般狀態(tài)、記錄疾病活動(dòng)指數(shù)(diseaseactivity index，DAI)，并于造模后第7天處死小鼠，記錄結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)(colonicmucosa damage index, CDMI)，光鏡下觀察HE染色小鼠結(jié)腸黏膜病理學(xué)改變，流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)檢測小鼠結(jié)腸黏膜DC、T reg在細(xì)胞水平的表達(dá)變化，免疫組織化學(xué)染色方法檢測小鼠結(jié)腸黏膜Flt3在蛋白水平的表達(dá)變化，ELISA方法檢測小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表達(dá)變化，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-Time PCR）方法檢測小鼠結(jié)腸黏膜Flt3/Flt3L在基因水平的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1．模型組小鼠DAI評分3.15±0.28、CMDI評分2.44±0.24與正常組DAI評分0.00±0.00、CMDI評分0.00±0.00比較均明顯升高，差異性顯著(P0.05)，提示小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型成功。 2．模型組小鼠結(jié)腸黏膜中DC占細(xì)胞百分率0.19±0.18%、 T reg占CD4+T的百分率4.11±2.14%與正常組小鼠結(jié)腸黏膜中DC占細(xì)胞百分率2.83±1.52%、 Treg占CD4+T的百分率14.02±1.73%比較均明顯降低，有顯著性差異(P0.05)。 3．模型組小鼠結(jié)腸黏膜中Flt3在蛋白水平上的表達(dá)量82.19±5.34較正常組Flt3的表達(dá)量31.66±2.31明顯降低，有顯著性差異(P0.05)。 4．模型組小鼠血液中Flt3L在蛋白水平的表達(dá)量為36.25±6.34pg/ml較正常組Flt3L表達(dá)量57.24±5.97pg/ml明顯降低，有顯著性差異(P0.05)。 5．模型組小鼠結(jié)腸黏膜中Flt3mRNA的表達(dá)量0.53±0.06、Flt3LmRNA的表達(dá)量0.10±0.18較正常組Flt3mRNA的表達(dá)量1.01±0.13、Flt3LmRNA的表達(dá)量1.01±0.25比較均明顯降低，有顯著性差異(P0.05)。 結(jié)論： 在DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型中DC和T reg之間存在免疫調(diào)節(jié)失衡，而導(dǎo)致該失衡的原因是Flt3和Flt3L在DC和T reg之間所發(fā)揮的橋梁作用受損，最終導(dǎo)致潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R574.62
【圖文】：

3.流式細(xì)胞學(xué)檢測結(jié)果3.1 小鼠結(jié)腸黏膜組織中 DC 占黏膜細(xì)胞百分率的情況（見表 6、圖 3）模型組 DC 占黏膜細(xì)胞百分率明顯低于正常組，差異性顯著( P<0.05)。表 6：兩組小鼠結(jié)腸黏膜中 DC 占黏膜細(xì)胞的百分率情況(x±s) %注：模型組與正常組比較 P<0.05組別 N DC (x±s) %正常組 9 2.83±1.52模型組 9 0.19±0.185圖 1 結(jié)腸模型組結(jié)腸較正常組縮短，扭曲變形，結(jié)腸表面粗糙，可見細(xì)顆粒狀，直腸粘膜充血。圖 2 結(jié)腸正常組結(jié)腸粘膜光滑，無充血水腫，模型組可見血管紋理增粗，充血糜爛，潰瘍灶。

圖 4：小鼠結(jié)腸黏膜中 T reg 占 CD4+T 的百分率況(x±s) %4. 光鏡下 HE 染色病理形態(tài)觀察結(jié)果：正常組：小鼠結(jié)腸黏膜完整，層次分明，腺體完整，排列整齊，無炎性細(xì)胞和充血水腫等。模型組：小鼠結(jié)腸黏膜不完整各層組織結(jié)構(gòu)消失，可見典型潰瘍灶，大者浸度可達(dá)固有層，伴有明顯的充血、水腫、糜爛等，有大量炎性細(xì)胞浸潤，杯胞減少，甚至丟失。（見圖 5、圖 6、圖 7、圖 8）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 林靜;孫凌云;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2010年04期

本文編號(hào)：2720778