【摘要】： 目的:本文采用差異熒光雙向凝膠電泳(DIGE)技術(shù)及質(zhì)譜技術(shù)篩選并鑒定乙型肝炎病毒(HBV)相關(guān)肝纖維化組織差異表達(dá)蛋白質(zhì),以期獲得肝纖維化早期診斷的分子標(biāo)志物以及潛在的藥物靶標(biāo),并為肝纖維化的病理發(fā)生機(jī)制研究提供思路。 方法:采用DIGE技術(shù)篩選Cy3、Cy5及Cy2熒光素標(biāo)記的肝纖維化及正常肝組織差異表達(dá)蛋白質(zhì),并用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)或串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行鑒定并分析,對部分有潛在價值的差異表達(dá)蛋白質(zhì)采用免疫組織化學(xué)技術(shù)從蛋白質(zhì)水平進(jìn)行驗證。 結(jié)果:共篩選出26個差異表達(dá)蛋白質(zhì)點,其中在肝纖維化組織中15個蛋白質(zhì)點上調(diào),11個蛋白質(zhì)點下調(diào);上述26個蛋白差異點采用質(zhì)譜技術(shù)成功鑒定出19種蛋白質(zhì)。根據(jù)蛋白質(zhì)功能的不同,這些差異蛋白質(zhì)主要參與氧化應(yīng)激、分子伴侶、細(xì)胞骨架、能量代謝及信號傳導(dǎo)等過程;細(xì)胞角蛋白8、高遷移組蛋白B1、熱休克蛋白70等在HBV相關(guān)肝纖維化組織中高表達(dá);硫氧還蛋白過氧化物酶、三磷酸腺苷合成酶、神經(jīng)多肽h3等在HBV相關(guān)肝纖維化組織中低表達(dá)。免疫組化驗證結(jié)果表明肝纖維化組織熱休克蛋白70、細(xì)胞角蛋白8、高遷移組蛋白B1表達(dá)水平均高于正常肝組織,且表達(dá)水平隨纖維化程度進(jìn)展而上調(diào),與蛋白質(zhì)組分析的結(jié)果一致。 結(jié)論:蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是篩選HBV相關(guān)肝纖維化組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)有效方法。發(fā)現(xiàn)和鑒定出的部分蛋白質(zhì)有望成為早期診斷的分子標(biāo)志物以及潛在藥物靶標(biāo),同時也為HBV相關(guān)肝纖維化的病理機(jī)制研究提供了一個新的研究方法系統(tǒng)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R512.62;R575.2
【圖文】：

0500100015002000TCA-丙酮法 Lysis buffer蛋白點數(shù)▲圖 1.3 兩種提取方法 2-D 圖譜蛋白點數(shù)比較注 ▲與 Lysis buffer 法比較差異顯著，P<0.05

二軍醫(yī)大學(xué)博士論文 第二部分結(jié) 果1 2-D DIGE 掃描結(jié)果正常肝組織及 HBV 相關(guān)肝纖維化組織分別標(biāo)記不同熒光染料后進(jìn)行雙向凝膠泳分離，每塊 SDS-PAGE 膠用 488nm(Cy2)、532nm(Cy3)、633nm(Cy5) 三種不同波長激光進(jìn)行掃描，獲得內(nèi)標(biāo)圖譜、正常肝組織圖譜、HBV 相關(guān)肝纖維化組織圖和視覺合成圖譜（圖 2.1-2.4）。由圖中可見大多數(shù)蛋白質(zhì)集中于中性和堿性區(qū)域,酸性區(qū)域蛋白質(zhì)斑點較少。

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李薇;尋萌;楚雍烈;鄭建武;;人細(xì)胞角蛋白8(CK8)基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年01期

2 尋萌;趙四海;曹春霞;薛欣;邵明明;李薇;徐琨;楚雍烈;;細(xì)胞角蛋白8真核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及生物信息學(xué)分析[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年02期

3 華何與;呂志平;孫學(xué)剛;劉強(qiáng);劉莉;;大黃釳蟲超微粉劑對肝纖維化大鼠肝組織蛋白表達(dá)的影響[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2012年16期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 華何與;大黃嚺蟲超微粉劑干預(yù)大鼠肝、腎纖維化的作用機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

2 羅文英;腸道病毒71型感染人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 路永媚;強(qiáng)的松對土三七致肝小靜脈閉塞病小鼠肝臟IL-6、IL-8、HSP-70表達(dá)的影響[D];中南大學(xué);2011年

本文編號：2717402