【摘要】： 目的制備乙型肝炎病毒(hepatitis B virus ,HBV)c基因和編碼轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(transferrin receptor,TfR)不被裂解的內(nèi)部信號(hào)-錨定序列基因的融合基因,將帶有此融合基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人肝腫瘤細(xì)胞株(Human hepatocellular liver carcinoma cell line, HepG2)細(xì)胞,觀察帶有疏水段的HBcAg在細(xì)胞膜上的表達(dá)情況,探討HBcAg能否通過獲得疏水段實(shí)現(xiàn)膜表達(dá),以及膜表達(dá)的HBcAg是造成慢性乙型肝炎患者肝細(xì)胞損害時(shí)靶抗原的可能性,為研究慢性乙型肝炎的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù),為進(jìn)一步的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞模型。 方法1.擴(kuò)增質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-HBcAg;2.通過重疊序列引物的設(shè)計(jì)與多聚酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)技術(shù)將編碼TfR不被裂解的內(nèi)部信號(hào)-錨定序列的60個(gè)堿基對(duì)(base pair,bp)加到質(zhì)粒pcDNA3.1(-)-HBcAg中C基因區(qū)5’端;3.利用融合基因上、下游的酶切位點(diǎn),將融合基因與PCDB連接,構(gòu)建質(zhì)粒PCDB -Tfr -HBcAg;4.質(zhì)粒PCDB -Tfr -HBcAg轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞;5.間接免疫熒光法,熒光顯微鏡下觀察Tfr HBcAg基因在HepG2細(xì)胞膜上表達(dá)情況。 結(jié)果成功構(gòu)建質(zhì)粒PCDB -Tfr -HBcAg,轉(zhuǎn)染后觀察到HepG2細(xì)胞膜上出現(xiàn)綠色熒光。 結(jié)論證實(shí)獲得疏水段(Tfr)的乙型肝炎核心抗原(Hepatitis B core Antigen,HBcAg)可以實(shí)現(xiàn)膜表達(dá),為探討HBV前C/C基因能否通過變異而實(shí)現(xiàn)膜表達(dá),從而成為慢性乙型肝炎肝細(xì)胞損傷的靶抗原提供有力的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R512.62
【圖文】：

pcDNA3.1（-）-HBcAg經(jīng)KpnI、NheI雙酶切電泳圖

圖 2. pcDNA3.1（-）-HBcAg 測(cè)序部分結(jié)果峰圖Graph 2. Some sequencing results of pcDNA3.1(-)-HBcAg……GCTAGCCATGGACATCGACCCTTATAAAGAATTTGGAGCTTCTGTGGAGTTACTCTCTTTTTTGCCTTCTGACTTTTTTCCTTCTGTTCGAGATCTCCTCGACACCGCCTCTGCTCTGTATCGGGAGGCCTTAGAGTCTCCGGAACATTGTTCACCTCACCATACAGCACTCAGGCAAGCTATTCTATGTTGGGTTGAGTTGATGAATCTGGCCACCTGGGTGGGAAGTAATTTGGAAGACCCAGCATCCAGGGAATTAGTAGTCAGCTATGTCAATGTTAATATGGGCCTAAAAATCAGACAACTACTGTGGTTTCACATTTCCTGTCTTACTTTTGGAAGAGAAACTGTTCTTGAGTATTTGGTGTCTTTTGGAGTGTGGATTCGCACTCCTCCTGCTTACAGACCACAAAATGCCCCTATCTTATCAACACTTCCGGAAACTACTGTTGTTAGACGACGATGCAGGTCCCCTAGAAGAAGAACTCCCTCGCCTCGCAGACGAAGGTCTCAATCGCCGCGTCGCAGAAGATCTCAATCTCGGGAACCTC

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張麗涓;慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制的探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2715958