【摘要】：目的:我國是乙肝大國,每年有許多患者發(fā)展成肝硬化甚至門脈高壓,而門脈高壓導致的各種并發(fā)癥,如肝腎綜合征、肝肺綜合征等,也會顯著增加患者的死亡率。目前對肝硬化門脈高壓及其各種并發(fā)癥的病理生理機制的認識還未完全清楚,治療效果也不滿意。因而探討肝硬化門脈高壓及其各種并發(fā)癥的發(fā)生機理,以尋求干預途徑和方法勢在必行。以往研究發(fā)現(xiàn),一氧化氮(nitric oxide,NO),作為一種血管擴張物質,在肝硬化外周血管擴張和高動力循環(huán)的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用,在肝腎綜合征和肝肺綜合征的發(fā)病中也起著一定的作用。內(nèi)源性一氧化碳(carbon monoxide,CO)是血紅素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的降解產(chǎn)物,作為體內(nèi)一種重要的氣體信使分子,在很多方面和NO相似,參與體內(nèi)的多種病理生理過程。我們以前的實驗發(fā)現(xiàn),HO-CO系統(tǒng)在肝纖維化大鼠模型的肝臟中表達增加,并對肝臟起著保護性作用。目前對于HO-CO系統(tǒng)的研究主要集中在肝細胞的保護和抗炎作用,對其在肝硬化門脈高壓階段所起的作用,是保護肝臟還是加重肝細胞損害,國內(nèi)外報道的文獻很少;在肝外組織器官的研究多集中在單一臟器,缺乏多臟器系統(tǒng)全面的研究,HO-1在肝外器官,如腎臟、肺臟中的表達是否具有組織差異性,以及HO-1在這些臟器中的作用機制如何,目前仍然不清楚;此外,針對肝硬化及并發(fā)癥的相應干預治療的研究較少,而且缺乏在疾病不同階段對該系統(tǒng)變化及作用的認識。本研究的目的就是探討在肝硬化門脈高壓階段,HO-1在肝臟、腎臟、肺臟中的表達與這些臟器結構、功能改變之間的關系,通過給予HO-1的誘導劑和抑制劑來調(diào)控HO-1的活性,揭示其在各臟器中的作用,為尋找治療肝硬化及門脈高壓并發(fā)癥的方法提供理論基礎。 本研究共分三部分。 第一部分HO-1在肝硬化門脈高壓大鼠肝臟中的表達及意義 第二部分HO-1在肝腎綜合征大鼠模型腎臟中的表達及對腎臟病理和腎功能的影響 第三部分HO-1在肝肺綜合征大鼠模型肺臟中的表達及對肺血管和肺功能的影響 方法:取健康雄性SD大鼠44只,隨機分成4組:假手術(SH)組8只、肝硬化門脈高壓(PH)組12只、鋅原卟啉(ZnPP)組12只、鈷原卟啉(CoPP)組12只。PH組應用膽總管結扎的方法制備肝硬化門脈高壓大鼠模型,4周后模型形成取材。ZnPP組和CoPP組制模方法同PH組,取材24小時前分別給予ZnPP或CoPP腹腔注射一次,PH組給予等量的生理鹽水腹腔注射。所有大鼠最后24小時在生物籠中收集尿量,檢測尿肌酐、尿鈉;生物機能實驗儀測定大鼠的門靜脈壓力、平均動脈壓,超聲測量腎動脈血流量,檢測動脈血氣,之后將大鼠處死,采集靜脈血;取肝、腎和肺組織。通過免疫組織化學的方法觀察大鼠肝臟、腎臟和肺臟HO-1蛋白的表達;Western-blot方法測定上述臟器HO-1蛋白的表達;RT-PCR的方法檢測大鼠上述臟器HO-1 mRNA的水平。HE染色觀察肝臟、腎臟、肺臟的結構改變;血氣分析檢測動脈血中碳氧血紅蛋白(carboxyhemoglobin,COHb)的濃度及肺泡-動脈氧分壓差(A-aPO2);采用全自動生化分析儀檢測血清丙氨酸氨基轉移酶(alanine aminotransferase , ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(aspartate aminotransferase,AST)反映肝臟功能;肌酐清除率、血鈉和尿鈉濃度反映腎功能;A-aPO2反映肺功能變化。 結果:1、肝硬化門脈高壓大鼠模型復制成功 (1) PH組大鼠毛色蓬亂而不光滑,精神萎靡,食欲不振,活動減少,尿色黃,便色淺,腹部膨隆;解剖腹腔內(nèi)見大量腹水; (2)血清生化指標AST測定結果顯示:與SH組相比,PH組明顯升高(209.11±45.77 U/L vs 156.8±18.28 IU/L,P㩳0.05); (3)與SH組相比,PH組的門靜脈壓力顯著升高(15.56±2.36 mmHg vs 9.24±0.76 mmHg,P㩳0.01); (4)與SH組相比,PH組的平均動脈壓力顯著降低(59.23±12.19 mmHg vs 118.83±8.09 mmHg,P㩳0.01); (5) HE染色結果顯示PH組大鼠肝臟細胞橋樣壞死,肝細胞結節(jié)樣再生,肝小葉結構紊亂、破壞,匯管區(qū)見大量炎性細胞浸潤,假小葉形成。 2、HO-1在肝硬化門脈高壓大鼠肝臟中的表達及意義 (1)與SH組相比,免疫組織化學方法、Western-blot方法及RT-PCR方法顯示PH組肝臟HO-1表達增加(P㩳0.05); (2)與PH組相比,ZnPP組肝臟HO-1表達減少,動脈血COHb降低(0.23±0.06% vs 0.50±0.20 %,P㩳0.05),血清AST水平下降(176.4±32.15IU/L vs 209.11±45.77 IU/L,P㩳0.05),但仍高于正常組;大鼠肝臟HE染色顯示,ZnPP組匯管區(qū)及中央靜脈周圍炎性細胞浸潤較PH組明顯減少; (3)與PH組相比,CoPP組肝臟HO-1表達進一步增加;動脈血COHb進一步增加(0.83±0.39 % vs 0.50±0.20%,P㩳0.01);血清AST水平進一步升高(311.6±60.65 IU/L vs 209.11±45.77 IU/L,P㩳0.05);大鼠肝臟HE染色顯示,CoPP組匯管區(qū)及中央靜脈周圍炎性細胞浸潤較PH組明顯增加。 3、HO-1在肝硬化門脈高壓大鼠腎臟中的表達及意義 (1)與SH組相比,PH組腎臟HO-1表達減少;24小時總尿量降低(10.93±1.92 ml/24 h vs 15.00±2.23 ml/24 h,P㩳0.05);腎動脈血流量顯著下降(3.58±0.04 ml/min·100g vs 142.86±3.44ml/min·100g,P㩳0.05)、血鈉濃度下降(138.75±0.96 mmol/L vs 142.86±3.44 mmol/L,P㩳0.05);肌酐清除率顯著降低(0.12±0.05 ml/min vs 0.23±0.02 ml/min,P㩳0.05);而腎臟病理顯示除了血管擴張和腎間質充血,未發(fā)現(xiàn)明顯的腎臟病理改變; (2)與PH組相比,ZnPP組腎臟HO-1表達進一步減少;腎動脈血流量進一步降低(3.50±0.08ml/min·100g vs 3.58±0.04 ml/min·100g,P㩳0.05);24小時總尿量進一步降低(8.50±1.10 ml/24 h vs 10.93±1.92 ml/24 h,P㩳0.05);血鈉濃度進一步降低(136.57±1.40 mmol/L vs 138.75±0.96 mmol/L,P㩳0.05);肌酐清除率進一步下降(0.07±0.01 ml/min vs 0.12±0.05 ml/min,P㩳0.05);門靜脈壓力和平均動脈壓力無顯著變化; (3)與PH組相比,CoPP組腎臟HO-1表達顯著增加;腎動脈血流量顯著增加(3.76±0.06 ml/min·100g vs 3.58±0.04 ml/min·100g,P㩳0.05);24小時總尿量顯著升高(13.5±1.10 ml/24 h vs 10.93±1.92 ml/24 h,P㩳0.05);血鈉濃度顯著增加(142.64±5.43 mmol/L vs 138.75±0.96 mmol/L,P㩳0.05);肌酐清除率略增加(0.14±0.04 ml/min vs 0.12±0.05 ml/min,P 0.05);門靜脈壓力和平均動脈壓力無顯著變化。 4、HO-1在肝硬化門脈高壓大鼠肺臟中的表達及意義 (1)與SH組相比,PH組肺臟HO-1表達增加;動脈血COHb增加(0.50±0.20 % vs 0.23±0.05,P㩳0.01);A-aPO_2增加(13.99±2.09 mmHg vs 7.72±3.67 mmHg,P㩳0.05);肺臟病理顯示肺內(nèi)血管擴張; (2)與PH組相比,ZnPP組肺臟HO-1表達減少;動脈血COHb降低(0.23±0.06 % vs 0.50±0.20 %,P㩳0.05);A-aPO_2略降低(11.33±2.44 mmHg vs 13.99±2.09 mmHg,P0.05),但仍高于正常組;肺臟病理顯示肺內(nèi)血管擴張程度減輕;門靜脈壓力和平均動脈壓力無顯著變化; (3)與PH組相比,CoPP組HO-1表達進一步增加;動脈血COHb進一步增加(0.83±0.39 % vs 0.50±0.20%,P㩳0.01);A-aPO_2進一步增加(19.56±7.39 mmHg vs 13.99±2.09 mmHg,P0.05);肺臟病理顯示肺內(nèi)血管擴張更加明顯;門靜脈壓力和平均動脈壓力無顯著變化。 結論: 1、膽管結扎方法可成功制備肝硬化門脈高壓大鼠模型和肝腎綜合征、肝肺綜合征大鼠模型。 2、在肝硬化門脈高壓階段,HO-1在各臟器表達不同,具有組織差異性。HO-1在肝臟、肺臟中表達增加,而在腎臟中表達減少。 3、在肝硬化門脈高壓階段肝臟HO-1過度表達加重肝細胞損傷,促進門脈高壓高血流動力循環(huán)變化,加速肝硬化形成。 4、肝硬化門脈高壓大鼠腎臟HO-1表達減少是實驗性肝腎綜合征發(fā)病的一個重要原因。 5、肝硬化門脈高壓大鼠肺臟HO-1表達增加是實驗性肝肺綜合征發(fā)病的一個重要原因。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R575.2
【圖文】：

PH 組、ZnPP 組和 CoPP 組大鼠毛色蓬亂、稀疏，活動減少，精神萎靡，尿量減少，尿色黃，便色淺，食欲減退，腹部膨�。ㄒ妶D 1）。圖1 肝硬化門脈高壓組大鼠腹部膨隆，提示有大量腹水形成

A B圖2 肝硬化門脈高壓組大鼠剖腹所見A：打開腹腔后可見腹腔內(nèi)存在大量腹水 B：可見結扎的膽管顯著擴張（三）生化指標測定血清AST測定結果顯示：與SH組相比，PH組血清AST明顯升高（209.11±65.77IU/L vs 156.8±18.28 IU/L，P㩳0.05)。（四）血氣分析動脈血 COHb 測定結果顯示：與 SH 組相比， PH 組動脈 COHb 顯著增高（0.42±0.13% vs 0.24±0.05%，P㩳0.05）。（五）門脈壓力及平均動脈壓的測定門靜脈壓力測定結果顯示：與SH組相比，PH組的門靜脈壓力顯著升高(15.56 ±2.36 mmHg vs 9.24 ± 0.76 mmHg，P㩳0.01) （見圖3）。圖3 門靜脈壓力的測定頸動脈壓力測定（見圖4），計算平均動脈壓。公式：平均動脈壓約為舒張壓+1/3脈壓差。結果顯示：與SH組相比

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 林紅英,李冠華,李樹花;肝肺綜合征一例報告[J];天津醫(yī)藥;2003年01期

2 張恩全,丁仕義,蔡萍,黃學全,陳偉,王成波,何強,謝兵,王健;肝肺綜合征肺部血管改變的多層螺旋CT研究[J];第三軍醫(yī)大學學報;2004年21期

3 王麗;肝肺綜合征[J];中國廠礦醫(yī)學;2004年03期

4 盧秉發(fā);肝肺綜合征(10例)的放射學表現(xiàn)[J];國外醫(yī)學.臨床放射學分冊;1997年05期

5 陸憲中,劉金霞,王子驥;肝肺綜合征17例臨床分析[J];中華傳染病雜志;1998年02期

6 何長培,陳穎萍,冉毅敏,黃灃;肝肺綜合征39例臨床研究[J];川北醫(yī)學院學報;1998年04期

7 蔣瑾,付凱,李良平,周瀚;肝硬化伴肝肺綜合征X線表現(xiàn)分析[J];實用放射學雜志;1999年03期

8 崇雨田,肖杰生;肝肺綜合征——感染性疾病(8)[J];新醫(yī)學;1997年04期

9 劉烈;肝肺綜合征1例報告[J];廣東醫(yī)學;1997年10期

10 李軍婷;黃明日;戴林;李煥蓮;;肝肺綜合征24例報告[J];沈陽部隊醫(yī)藥;1998年02期

相關會議論文 前10條

1 張素杰;張振科;;肝肺綜合征[A];中國中西醫(yī)結合學會第十二次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2000年

2 馮沙;周偉;趙茜;;肝硬化門脈高壓性胃病并出血26例分析[A];2003年全國危重病急救醫(yī)學學術會議論文集[C];2003年

3 李寧;郎韌;王小文;陳惠德;賀強;楊翔;陳大志;;肝功能衰竭伴肝肺綜合征肝移植中的肺功能保護[A];第一屆全國人工肝及血液凈化學術年會暨全國人工肝及血液凈化攻關協(xié)作組成立大會論文集[C];2004年

4 倪群;張韶文;虞朝暉;季峰;;82例肝硬化合并肝肺綜合征臨床分析[A];2005年浙江省消化系疾病學術會議論文匯編[C];2005年

5 胡建國;郭新寧;丁歡;;278例肝硬化門脈高壓性胃病臨床探討[A];中國中西醫(yī)結合學會第十二次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2000年

6 童玉云;王家平;李迎春;閻東;袁曙光;楊有;;TIPS+PTVE聯(lián)合治療肝硬化門脈高壓的臨床應用[A];第六屆西部介入放射學術會議寧夏醫(yī)學會放射學分會第四屆年會介入放射學新技術繼續(xù)教育學習班論文匯編[C];2009年

7 莊茂源;楊桂蓮;劉迎恩;劉加池;楊明俊;李蘭明;楊玉梅;;高壓氧治療肝硬化合并肝肺綜合征患者對血氧、血漿內(nèi)毒素和一氧化氮的影響[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

8 魏孔朋;;26例肝硬化門脈高壓繼發(fā)脾功能亢進的介入療效分析[A];第六屆西部介入放射學術會議寧夏醫(yī)學會放射學分會第四屆年會介入放射學新技術繼續(xù)教育學習班論文匯編[C];2009年

9 倪群;張韶文;虞朝暉;季峰;;82例肝硬化合并肝肺綜合征臨床分析[A];2005年浙江省內(nèi)科學學術年會論文匯編[C];2005年

10 王海燕;王惠吉;李春林;賈繼東;;肝硬化低氧血癥與肝肺綜合征[A];中華醫(yī)學會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學術會議論文匯編[C];2005年

相關重要報紙文章 前10條

1 劉興武 任曲;介入分流肝硬化門脈高壓[N];健康報;2002年

2 本報記者 王雪敏;及早診治肝肺綜合征[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

3 記者 衣曉峰　通訊員 董宇翔;多基因影響肝肺綜合征發(fā)病[N];健康報;2011年

4 許錦東;肝硬化門脈高壓的藥物治療[N];中國醫(yī)藥報;2004年

5 許錦東;肝硬化門脈高壓的藥物治療[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

6 山西省汾陽醫(yī)院傳染病區(qū)副主任 張耀武;如何處理肝硬化門脈高壓出血[N];健康報;2009年

7 特約記者 段文利;門脈高壓異位出血救治病例登上《柳葉刀》[N];健康報;2010年

8 馬紅;北京完成腎移植后再次肝移植[N];中國醫(yī)藥報;2004年

9 范曉莉;門脈高壓可致結腸粘膜結構改變[N];中國醫(yī)藥報;2003年

10 汪敏;門靜脈高壓癥診治要個性化[N];健康報;2006年

相關博士學位論文 前6條

1 郭世斌;血紅素氧合酶-1在肝硬化門脈高壓大鼠多臟器的表達及意義[D];大連醫(yī)科大學;2011年

2 張慧英;腸源性內(nèi)毒素血癥在肝肺綜合征發(fā)病中作用的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學;2005年

3 姚冬梅;ET—1對肝硬化門脈高壓的作用及CNP、丹參對ET—1介導肝星狀細胞收縮的調(diào)控機制[D];河北醫(yī)科大學;2003年

4 楊川杰;ET-1、NO、PGL_2、C型利鈉肽對肝硬化門脈高壓高動力循環(huán)調(diào)控機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2002年

5 鐘小生;吳茱萸熱熨改善門奇斷流術后胃腸動力、腸粘膜屏障的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2011年

6 于淼;經(jīng)自發(fā)性脾-腎或胃-腎分流道胃底靜脈曲張栓塞術臨床研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2002年

相關碩士學位論文 前10條

1 張禮;肝肺綜合征[D];浙江大學;2002年

2 譚璐東;大鼠膽總管結扎致肝硬化及肝肺綜合征模型的建立[D];吉林大學;2011年

3 李青;奧曲肽對肝硬化門脈高壓大鼠肝臟血紅素氧合酶-1表達的影響[D];大連醫(yī)科大學;2010年

4 王葉蒙;大鼠肝移植治療肝肺綜合征的初步研究[D];浙江大學;2011年

5 李白羽;肝硬化門脈高壓犬模型的舌下絡脈特征及其與VEGF表達的關系研究[D];第二軍醫(yī)大學;2010年

6 黃學;TNF-α單克隆抗體治療大鼠肝肺綜合征的分子機制[D];河北醫(yī)科大學;2011年

7 劉楠;TNF-α單克隆抗體治療大鼠肝肺綜合征作用機制的研究[D];河北醫(yī)科大學;2010年

8 張黎童;內(nèi)源性HO/CO系統(tǒng)和NOS/NO系統(tǒng)在肝肺綜合征發(fā)病中作用的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學;2007年

9 國斌;Akt家族在肝肺綜合征大鼠血清誘導PMVECs增殖中的表達研究[D];第三軍醫(yī)大學;2010年

10 王新國;肝肺綜合征發(fā)病機制的有關研究[D];山西醫(yī)科大學;2005年

本文編號：2715823