【摘要】：第一部分：靜脈注射花姜酮治療重癥急性胰腺炎大鼠的量效關(guān)系 目的：探討一種天然植物提取物花姜酮治療重癥急性胰腺炎(SAP)大鼠的量效關(guān)系,為花姜酮干預(yù)重癥急性胰腺炎大鼠肝損傷提供合適的用藥劑量。 方法：48只wistar大鼠,雄性,隨機(jī)分為6組(N=8)。正常對照組(CON組),重癥急性胰腺炎組(SAP組),花姜酮預(yù)處理組5mg/kg (ZER5mg/kg),花姜酮預(yù)處理組10mg/kg (ZER10mg/kg),花姜酮預(yù)處理組20mg/kg (ZER20mg/kg),花姜酮預(yù)處理組40mg/kg (ZER40mg/kg)。采用膽胰管逆行注射5%�；悄懰徕c溶液(0.1ml/100g)制備重癥急性胰腺炎大鼠模型,于模型制備前30min由股靜脈給予不同濃度(5、10、20、40mg/kg)的花姜酮溶液。模型制備后12h處理大鼠,以干棉球吸附大鼠腹水；心臟穿刺取血分離得到血清；取大鼠右肺中葉計算肺濕干比；取大鼠胰腺組織經(jīng)4%多聚甲醛固定。分別測定各組腹水量、血清淀粉酶(AMY)和肝腎功能(ALT、Cr值)、肺濕干比(反應(yīng)肺臟含水量)、HE染色觀察各組胰腺組織病理學(xué)改變并評分。 結(jié)果：重癥急性胰腺炎組(SAP組)腹水量、血清AMY、ALT、Cr值、肺濕干比、胰腺病理評分均較正常對照組(CON組)顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 ZER5mg/kg上述指標(biāo)與SAP組無顯著差別。ZER10mg/kg、ZER20mg/kg、ZER40mg/kg三組上述指標(biāo)中腹水量、血清AMY、肺濕干比、胰腺病理評分均較SAP組顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。但ZER20mg/kg與ZER40mg/kg兩組血清ALT、Cr值較高,與SAP組無統(tǒng)計學(xué)差異,而ZER10mg/kg組血清ALT、Cr值與SAP組相比明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：5mg/kg花姜酮不能有效緩解胰腺炎病情,10、20、40mg/kg花姜酮均能較好的緩解胰腺炎病情,降低腹水量、血清淀粉酶、胰腺病理評分。而20、40mg/k花姜酮雖能緩解胰腺炎病情,但肝腎毒性較大。因此認(rèn)為10mg/kg為治療重癥急性胰腺炎的最佳有效劑量。 第二部分：花姜酮對重癥急性胰腺炎大鼠肝損傷的作用 目的：探討花姜酮對重癥急性胰腺炎大鼠肝損傷的作用,為重癥急性胰腺炎大鼠肝臟保護(hù)提供理論依據(jù)。 方法：70只wistar大鼠,雄性,隨機(jī)分為4組。正常對照組(CON組)(N=10)；重癥急性胰腺炎組(SAP組)(N=40)；花姜酮預(yù)處理組(ZER組)(N=10),花姜酮藥物對照組(Drug-CON組)(N=10)。其中重癥急性胰腺炎組(SAP組)又分四個時間點1h,3h,6h,12h (N=10).重癥急性胰腺炎組及花姜酮預(yù)處理組大鼠采用膽胰管逆行注射5%牛磺膽酸鈉溶液(0.1ml/1OOg)制備重癥急性胰腺炎模型,正常對照組及花姜酮藥物對照組翻動胰腺和十二指腸�；ńA(yù)處理組及花姜酮藥物對照組于模型制備前30分鐘由股靜脈穿刺給予10mg/kg的花姜酮溶液。正常對照組、花姜酮預(yù)處理組、花姜酮藥物對照組于12h處死大鼠,重癥急性胰腺炎組分1h、3h、6h、12h四個時間點處死大鼠。以干棉球吸附各組大鼠腹水。以5m1注射器心臟穿刺抽血,經(jīng)離心機(jī)分離得到血清；取部分大鼠胰腺胰頭組織及大鼠肝臟右葉經(jīng)4%多聚甲醛固定后石蠟包埋。分別測定各組大鼠死亡率、腹水量、血清淀粉酶(AMY)和磷脂酶水平,測定反映肝臟功能的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平(ALT、AST值)、并行胰腺和肝臟光鏡下常規(guī)病理學(xué)HE染色檢查。 結(jié)果：花姜酮藥物對照組大鼠死亡率、腹水量、AMY、磷脂酶水平、ALT、 AST值、以及胰腺和肝臟組織病理學(xué)評分(級)同正常對照組,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。重癥急性胰腺炎組大鼠死亡率、腹水量、AMY、磷脂酶水平、ALT、AST值、以及胰腺和肝臟組織病理學(xué)評分(級)明顯高于正常對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)�；ńA(yù)處理組大鼠上述指標(biāo)與重癥急性胰腺炎組相比明顯降低(P0.05),但均高于正常對照組水平。 結(jié)論：應(yīng)用花姜酮可以降低大鼠死亡率,減輕大鼠腹水量,減輕胰酶及肝臟酶學(xué),減輕胰腺和肝臟的病理學(xué)損傷；對重癥急性胰腺炎大鼠胰外臟器-肝臟的損傷起到了保護(hù)作用。然而花姜酮藥物本身對正常大鼠無明顯副作用。 第三部分：花姜酮對重癥急性胰腺炎大鼠肝損傷保護(hù)作用的機(jī)制探討 目的：本文前兩部分已經(jīng)證實花姜酮對重癥急性胰腺炎大鼠的胰外臟器-肝臟具有保護(hù)作用,本部分進(jìn)一步探討靜脈給藥對大鼠重癥急性胰腺炎肝損傷保護(hù)作用的機(jī)制。 方法：70只wistar大鼠,雄性,隨機(jī)分為4組。正常對照組(CON組)(N=10)；重癥急性胰腺炎組(SAP組)(N=40)；花姜酮預(yù)處理組(ZER組)(N=10),花姜酮藥物對照組(Drug-CON組)(N=10)。其中重癥急性胰腺炎組(SAP組)又分四個時間點1h,3h,6h,12h(N=10)。重癥急性胰腺炎組及花姜酮預(yù)處理組大鼠采用膽胰管逆行注射5%�；悄懰徕c溶液(0.1ml/100g)制備重癥急性胰腺炎模型,正常對照組及花姜酮藥物對照組則向膽胰管注入等量生理鹽水�；ńA(yù)處理組及花姜酮藥物對照組于模型制備前30分鐘由股靜脈穿刺給予10mg/kg的花姜酮溶液。正常對照組、花姜酮預(yù)處理組、花姜酮藥物對照組于12h處死大鼠,重癥急性胰腺炎組分1h,3h,6h,12h四個時間點處死大鼠。取部分大鼠胰腺胰頭組織及大鼠肝臟右葉經(jīng)4%多聚甲醛固定后石蠟包埋。取部分大鼠胰腺胰頭組織及大鼠肝臟右葉至-80°凍存。行免疫組化法檢測各組大鼠胰腺及肝臟核因子-κB (nuclear factor-kappa B, NF-κB) p65的表達(dá)水平,提取各組大鼠核蛋白行Western blot蛋白印跡法測定各組大鼠核因子-κB表達(dá),提取各組大鼠漿蛋白測定及核因子-κB抑制蛋白I-κB (Inhibitor κB, I-κB)水平,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-reverse transcription, RT-PCR)檢測各組大鼠胰腺及肝臟細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule, ICAM-1)及白介素-1(Interleukin, IL-1) mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：隨著時間點的延長,重癥急性胰腺炎組大鼠胰腺組織細(xì)胞核NF-κB蛋白的表達(dá)逐漸增加,6小時達(dá)高峰后表達(dá)下降,但仍高于正常對照組水平。給予花姜酮預(yù)處理后,能夠明顯減少NF-κB蛋白的表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。胞漿內(nèi)I-κB蛋白的表達(dá)變化與NF-κB蛋白相反。免疫組化定位結(jié)果提示重癥急性胰腺炎組大鼠胰腺組織表達(dá)NF-κB主要位于細(xì)胞核內(nèi),而正常對照組大鼠胰腺組織NF-κB表達(dá)主要位于細(xì)胞漿。重癥急性胰腺炎組大鼠肝臟組織細(xì)胞核NF-κB蛋白的表達(dá)逐漸增加,12小時達(dá)高峰。給予花姜酮預(yù)處理后,能夠明顯減少NF-κB蛋白的表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。胞漿內(nèi)I-κB蛋白的表達(dá)變化與NF-κB蛋白相反。免疫組化定位結(jié)果提示重癥急性胰腺炎組大鼠肝臟組織表達(dá)NF-κB主要位于細(xì)胞核內(nèi),而正常對照組大鼠肝臟組織NF-κB表達(dá)主要位于細(xì)胞漿。ICAM-1及IL-1結(jié)果提示應(yīng)用花姜酮后,花姜酮預(yù)處理組大鼠的PCR產(chǎn)物表達(dá)明顯低于重癥急性胰腺炎組大鼠,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：花姜酮可以通過減少重癥急性胰腺炎大鼠胰腺及肝臟組織NF-κB蛋白表達(dá),進(jìn)而抑制炎癥瀑布效應(yīng)分子ICAM-1和IL-1,從而達(dá)到對胰腺炎肝損傷的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R576

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本文編號：2715259