發(fā)布時(shí)間：2020-06-15 12:30

【摘要】：目的：采用高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠建立NAFLD模型，觀察PPAR-α激動(dòng)劑（非諾貝特）對NAFLD大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響。 方法：將66只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為3組：對照組（C組，n=18），模型組（M組，n=24）和非諾貝特組（F組，n=24）。C組予普通飼料喂養(yǎng)，M組和F組予高脂飼料喂養(yǎng)。同時(shí)，F(xiàn)組予非諾貝特（10mg/kg/d），按1ml助溶劑溶解2mg非諾貝特的比例進(jìn)行腹腔內(nèi)注射給藥，每日一次。C組和M組給予助溶劑（5ml/kg/d）腹腔內(nèi)注射。在實(shí)驗(yàn)后第4、6、8周時(shí)，分別處死對照組大鼠6只、模型組大鼠8只、非諾貝特組大鼠8只，迅速完整游離出肝臟，取肝左葉同一部位約1cm×1cm×1cm組織，置于10%甲醛溶液固定待病理切片。石蠟包埋處理后，一部分常規(guī)切片后HE染色，觀察肝臟脂肪變性及炎癥程度；另一部分行TUNEL染色，觀察肝細(xì)胞凋亡程度；以及行免疫組織化學(xué)法，檢測肝組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)情況。另取肝組織100mg左右放入EP管內(nèi)，立即投入液氮中，后保存于-80℃冰箱內(nèi)，用于檢測肝組織中PPAR-α、Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果：4周末，與C組大鼠相比：M組大鼠肝細(xì)胞呈輕度脂肪變及氣球樣變，以小泡性脂肪變?yōu)橹�；炎癥活動(dòng)度計(jì)分顯著升高（1.62±0.92vs0.00±0.00，P＜0.01）；肝細(xì)胞凋亡指數(shù)升高（58.86±13.59vs39.55±3.99，P＜0.05）；肝組織PPAR-αmRNA和Bcl-2mRNA的表達(dá)量均顯著降低（0.366±0.068vs0.570±0.061和0.234±0.099vs0.437±0.053，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3mRNA的表達(dá)量均顯著升高（0.368±0.064vs0.230±0.052和0.363±0.058vs0.218±0.031；均P＜0.01）；肝組織中Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下降（0.0098±0.0002vs0.0155±0.0004，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著升高（0.1311±0.0050vs0.0947±0.0139和0.1297±0.0065vs0.0794±0.0038；均P＜0.01）。與M組大鼠比較，F(xiàn)組大鼠肝細(xì)胞凋亡指數(shù)降低（43.92±3.50vs58.86±13.59，P＜0.05）；肝組織PPAR-αmRNA和Bcl-2mRNA的表達(dá)量均顯著升高（0.510±0.109vs0.366±0.068和0.425±0.042vs0.234±0.099，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3mRNA的表達(dá)量均顯著下降（0.249±0.034vs0.368±0.064和0.226±0.055vs0.363±0.058，均P＜0.01）；肝組織中Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高（0.0148±0.0004vs0.0098±0.0002，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著下降（0.0966±0.0069vs0.1311±0.0050和0.0911±0.0136vs0.1297±0.0065； P均＜0.01）。 6周末，與C組大鼠相比：M組大鼠肝細(xì)胞呈輕至重度脂肪變，胞漿中出現(xiàn)大小不等的脂滴空泡，將細(xì)胞核擠向一側(cè)，細(xì)胞核分布不均勻；肝組織炎癥活動(dòng)度計(jì)分顯著升高（3.62±1.31vs0.00±0.00，P＜0.01）；肝細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高（74.07±3.88vs51.27±11.38，P＜0.01）；肝組織PPAR-α mRNA和Bcl-2mRNA的表達(dá)量均顯著降低（0.256±0.078vs0.497±0.098和0.249±0.036vs0.452±0.065，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3mRNA的表達(dá)量均顯著升高（0.449±0.097vs0.245±0.054和0.446±0.043vs0.245±0.054，均P＜0.01）。肝組織中Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下降（0.0084±0.0011vs0.0176±0.0005，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著升高（0.2331±0.0230vs0.0974±0.0056和0.1680±0.0081vs0.0915±0.0063；均P＜0.01）。F組大鼠肝組織炎癥活動(dòng)度計(jì)分顯著升高（3.12±2.90vs0.00±0.00，P＜0.01）。與M組大鼠比較，F(xiàn)組大鼠肝細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著降低（51.38±10.54vs74.07±3.88，P＜0.01）；肝組織PPAR-α mRNA和Bcl-2mRNA的表達(dá)量均顯著升高（0.426±0.052vs0.256±0.078和0.376±0.078vs0.249±0.036，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3mRNA的表達(dá)量均顯著下降0.290±0.083vs0.449±0.097和0.291±0.077vs0.446±0.043，均P＜0.01）；肝組織中Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高（0.0162±0.0010vs0.0084±0.0011，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著下降（0.1081±0.0106vs0.2331±0.0230和0.1037±0.0272vs0.1680±0.0081； P均＜0.01）。 8周末，與C組大鼠相比：M組大鼠肝細(xì)胞廣泛腫脹，呈氣球樣變，可見中至重度脂肪變，以大泡性脂肪變性為主的混合性脂肪變性；肝組織炎癥活動(dòng)度計(jì)分顯著升高（5.12±1.64vs0.00±0.00，P＜0.01）；肝細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著升高（85.10±3.54vs53.31±4.45， P＜0.01）；肝組織PPAR-α mRNA和Bcl-2mRNA的表達(dá)量均顯著降低（0.201±0.035vs0.537±0.06和0.209±0.080vs0.490±0.084，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3mRNA的表達(dá)量均顯著升高（0.486±0.061vs0.260±0.039和0.521±0.080vs0.297±0.053，均P＜0.01）；肝組織中Bcl-2蛋白表達(dá)顯著下降（0.0053±0.0002vs0.0198±0.0012，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著升高（0.2817±0.0180vs0.1106±0.0114和0.2288±0.0355vs0.1564±0.0027；均P＜0.01）。F組大鼠肝組織炎癥活動(dòng)度計(jì)分顯著升高（3.25±1.70vs0.00±0.00，P＜0.01）；肝細(xì)胞凋亡指數(shù)升高（62.14±8.77vs53.31±4.45， P＜0.05）；PPAR-α mRNA的表達(dá)量顯著降低（0.381±0.097vs0.537±0.065，P＜0.01）；Bcl-2mRNA表達(dá)量顯著下降（0.359±0.078vs0.490±0.084， P＜0.01）；Bax和Caspase-3mRNA的表達(dá)量均顯著升高（0.354±0.051vs0.260±0.039和0.395±0.086vs0.297±0.053，均P＜0.01）；與M組大鼠比較，F(xiàn)組大鼠肝組織炎癥活動(dòng)度計(jì)分降低（3.25±1.70vs5.12±1.64，P＜0.05）；肝細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著降低（62.14±8.77vs85.10±3.54，P＜0.01）；肝組織PPAR-α mRNA和Bcl-2mRNA的表達(dá)量均顯著升高（0.381±0.097vs0.201±0.035和0.359±0.078vs0.209±0.080，均P＜0.01）；Bax和Caspase-3mRNA的表達(dá)量均顯著下降（0.354±0.051vs0.486±0.061和0.395±0.086vs0.521±0.080，均P＜0.01）；肝組織中Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高（0.0173±0.0020vs0.0053±0.0002，P＜0.01）；Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著下降（0.1147±0.0114vs0.2817±0.0180和0.1465±0.0070vs0.2288±0.0355； P均＜0.01）。 結(jié)論：（1）高脂飼料喂養(yǎng)SD大鼠可以成功復(fù)制NAFLD模型。 （2）PPAR-α激動(dòng)劑（非諾貝特）對不同時(shí)間點(diǎn)的NAFLD大鼠肝組織脂肪變性和炎癥反應(yīng)均有不同程度的改善，可不同程度抑制NAFLD大鼠肝細(xì)胞凋亡。 （3）激活PPAR-α可能具有抗凋亡的作用，這或許可以為NAFLD治療提供新的思路。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R575.5
【圖文】：

各期肝臟大體標(biāo)本

各組大鼠體質(zhì)量比較

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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3 敬曉琴;袁U

本文編號：2714414