【摘要】：原發(fā)性膽汁性肝硬化是一種由于免疫系統(tǒng)對(duì)自身肝臟進(jìn)行攻擊而引起的慢性膽汁淤積性肝臟自身免疫性疾病,高發(fā)于中年女性。患者發(fā)病后會(huì)導(dǎo)致膽管阻塞和膽汁淤積,造成特異性的膽管上皮細(xì)胞損傷,從而引發(fā)肝臟的纖維化,最后演變?yōu)楦斡不透喂δ芩ソ?嚴(yán)重威脅患者的生命。由于獲取早期發(fā)病的臨床肝臟樣本十分困難,因此對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化發(fā)病機(jī)制的探索及治療靶點(diǎn)的開(kāi)發(fā)均主要以該疾病的動(dòng)物模型-dnTGF-β RⅡ小鼠作為研究工具。該模型很好地模擬了人類(lèi)原發(fā)性膽汁性肝硬化的主要表型特征：自發(fā)產(chǎn)生抗線粒體的自身抗體；血清中炎性細(xì)胞因子水平升高；病理組織學(xué)檢查可發(fā)現(xiàn)伴隨肝內(nèi)膽管的破壞,肝臟匯管區(qū)有大量的CD4T細(xì)胞、CD8T細(xì)胞等淋巴細(xì)胞的浸潤(rùn)；此外dnTGF-β小鼠還有自發(fā)的結(jié)腸炎,也可以作為研究肝臟炎癥和腸道微環(huán)境相互作用的模型。 雖然以往的工作利用dnTGF-β RⅡ小鼠這一疾病模型對(duì)于該自身免疫性肝病發(fā)病早期的一些免疫學(xué)致病機(jī)制進(jìn)行了初步探究,包括CD8T細(xì)胞的致病性,細(xì)胞因子和調(diào)節(jié)性B細(xì)胞對(duì)疾病進(jìn)程的影響等；但是對(duì)該疾病的致病機(jī)制仍未有全面的了解,還有很多未知的領(lǐng)域,包括天然免疫在該疾病中所發(fā)揮的作用以及趨化因子及其配體在介導(dǎo)該疾病炎性浸潤(rùn)中的機(jī)制等均未有明確的報(bào)道。 因此,本研究以dnTGF-β RⅡ小鼠以及Toll樣受體缺失或者趨化因子受體缺失的dnTGF-β RⅡ小鼠為研究原發(fā)性膽汁性肝硬化的動(dòng)物模型,利用細(xì)胞免疫學(xué)、分子生物學(xué)以及醫(yī)學(xué)病理學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法方法對(duì)該疾病致病過(guò)程中天然免疫受體Toll樣受體以及趨化因子受體CXCR3發(fā)揮作用的機(jī)制進(jìn)行深入探討,為闡明原發(fā)性膽汁性肝硬化的致病機(jī)制以及開(kāi)發(fā)該疾病有效的治療靶點(diǎn)提供證據(jù)支持。本研究得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.環(huán)境因素的改變(腸道菌群清除)影響了原發(fā)性膽汁性肝硬化小鼠模型的發(fā)病程度 我們用含有甲硝銼,氨芐青霉素,新霉素以及萬(wàn)古霉素這四種抗生素的水從4周齡起飼養(yǎng)SPF級(jí)的dnTGF-β RⅡ (TG)小鼠以清除腸道中絕大多數(shù)的共生菌。在抗生素喂養(yǎng)12周,即小鼠15周齡時(shí)殺鼠,對(duì)其肝臟的病理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)與非抗生素水喂養(yǎng)的對(duì)照組相比,抗生素喂養(yǎng)加重了TG小鼠的膽管炎,表現(xiàn)為肝臟炎性浸潤(rùn)的增多以及膽管破壞的加重。 2. Toll樣受體2缺失加重了dnTGF-β RⅡ小鼠自發(fā)的膽管炎及結(jié)腸炎 與野生型(WT)小鼠相比,tlr2在dnTGF-β RⅡ (TG)小鼠中有較高的表達(dá),因此我們將TG小鼠與Toll樣受體2(TLR2)敲除小鼠進(jìn)行雜交,得到TLR2-/-dnTGF-β RⅡ (TGT2)小鼠。首先,對(duì)其肝臟的病理學(xué)分析發(fā)現(xiàn),與TG小鼠相比,TGT2小鼠肝臟匯管區(qū)的炎性浸潤(rùn)及肝內(nèi)膽管的破壞有明顯的加重。細(xì)胞學(xué)分析的結(jié)果顯示與TG小鼠相比,TGT2小鼠肝臟中T細(xì)胞尤其是CD4T細(xì)胞的浸潤(rùn)增加了,并且這些浸潤(rùn)的CD4T和CD8T中呈現(xiàn)效應(yīng)性記憶性表型(CD44highCD62Llow)的細(xì)胞明顯增多。其次,腸道病理學(xué)的分析發(fā)現(xiàn)TLR2敲除加重了TG小鼠的自發(fā)結(jié)腸炎。與TG小鼠相比TGT2小鼠不僅體重明顯下降,結(jié)腸重量顯著上升,而且結(jié)腸中的炎性浸潤(rùn)已經(jīng)擴(kuò)展到整個(gè)粘膜的厚度,腺體和杯狀細(xì)胞受到嚴(yán)重破壞,并伴隨有隱窩囊腫的存在。再次,對(duì)細(xì)胞因子的檢測(cè)結(jié)果表明,與TG小鼠相比,TGT2小鼠血清中TNF-α和IFN-γ的濃度明顯升高,并且在TGT2小鼠的肝臟中il6的基因表達(dá)顯著增加。對(duì)于肝臟中IL-6相關(guān)的信號(hào)通路的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)與TG小鼠相比,TGT2小鼠肝臟中STAT3磷酸化的水平明顯升高。最后,為了從相反的方向證明TLR2在TG小鼠發(fā)病過(guò)程中的作用,我們計(jì)劃用TLR2的特異性配體Pam3CSK4來(lái)對(duì)TG小鼠進(jìn)行高劑量單次注射和低劑量連續(xù)注射的處理,從而更加全面地闡明TLR2在TG小鼠發(fā)病中的作用機(jī)制。 3. Toll樣受體4缺失有加重dnTGF-β RⅡ小鼠肝臟炎癥及腸道炎癥的趨勢(shì) 與WT小鼠相比,tlr4在TG小鼠中的表達(dá)升高,因此我們對(duì)雜交所得到的TLR4-/-dnTGF-β RⅡ (TGT4)小鼠進(jìn)行了一系列的細(xì)胞免疫學(xué)和醫(yī)學(xué)病理學(xué)的分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與TG小鼠相比TGT4小鼠肝臟中浸潤(rùn)的T淋巴細(xì)胞的比例有所增加；并且CD8T細(xì)胞在總的T細(xì)胞中所占的比例有明顯的上升；其肝臟中浸潤(rùn)的效應(yīng)性記憶CD8T細(xì)胞(CD8Tem)無(wú)論在CD8T細(xì)胞中所占的比例還是其絕對(duì)數(shù)都有明顯的增加。雖然TLR4敲除對(duì)于dnTGF-β RⅡ小鼠結(jié)腸炎癥的影響沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性差異,但是無(wú)論是通過(guò)病理切片的觀察還是統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)的分析,我們都可以發(fā)現(xiàn)TGT4小鼠與TG小鼠相比結(jié)腸炎有加重的趨勢(shì)。 4. CXCR3在dnTGF-β RⅡ小鼠致病過(guò)程中作用的初步探討 首先,我們發(fā)現(xiàn)與WT小鼠相比TG小鼠肝臟中趨化因子CXCL9和CXCL10的濃度有明顯上升。然后,流式分析的結(jié)果顯示在TG小鼠肝臟中表達(dá)這兩種趨化因子的受體CXCR3的T細(xì)胞比WT明顯增多。接下來(lái),來(lái)自TG小鼠或者敲除了CXCR3的TG小鼠中的T細(xì)胞的過(guò)繼轉(zhuǎn)輸實(shí)驗(yàn)將為證明CXCR3介導(dǎo)T細(xì)胞向TG小鼠肝臟遷移提供更加有力的證據(jù)。 綜上所述,本研究證明了TLR2缺失可以加重原發(fā)性膽汁性肝硬化小鼠模型中的膽管炎以及自發(fā)性結(jié)腸炎。并且發(fā)現(xiàn)CXCR3可能介導(dǎo)了該小鼠模型中T細(xì)胞向肝臟炎性部位的遷移。我們的研究首次證明了在該疾病模型中天然免疫受體TLR2的敲除促進(jìn)了肝臟和腸道的炎癥。并且首次在該疾病模型中探討腸道微環(huán)境與肝臟炎癥之間的關(guān)系,這為闡明原發(fā)性膽汁性肝硬化的致病機(jī)制以及尋找該疾病有效的治療靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R575.22

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 梁梓宇;覃山羽;姜海行;王東旭;蘇思標(biāo);陳傳華;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)肝纖維化大鼠肝星狀細(xì)胞凋亡和Caspase-3表達(dá)[J];重慶醫(yī)學(xué);2010年20期

2 李晶;殷正豐;;活化型肝星狀細(xì)胞清除機(jī)制及其相關(guān)抗肝纖維化策略[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2010年09期

3 李冬;戴立里;余斌斌;姜中華;;丹參素對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年08期

4 何航;徐宏平;華海嬰;;姜黃素對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化大鼠肝組織TGF-β1及Caspase-3表達(dá)的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年02期

5 唐映梅;包維民;尤麗英;江洪娟;楊晉輝;;原發(fā)性膽汁性肝硬化患者血清抗GP210和抗SP100檢測(cè)的臨床意義[J];實(shí)用肝臟病雜志;2011年02期

6 劉霞;魏紅山;林森;;肝纖維化中星狀細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2006年05期

7 宋春艷;陳思文;陳岳祥;;肝損傷修復(fù)過(guò)程中p75神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體的作用[J];國(guó)際消化病雜志;2008年05期

8 陽(yáng)美鳳;彭安邦;;生存素基因與肝纖維化[J];國(guó)際消化病雜志;2011年04期

9 鄧延梅;舒建昌;;與肝星狀細(xì)胞相關(guān)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抗肝纖維化機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)肝臟病雜志(電子版);2011年04期

10 梅毅;張定國(guó);王立生;朱忠生;;攜帶IP-10基因雙歧桿菌載體的構(gòu)建及鑒定[J];廣東醫(yī)學(xué);2013年15期

相關(guān)會(huì)議論文 前4條

1 Wei Long;Jinhang Zan;Zewei Zhou;Xin He;Jin Jin;Saijun Fan;Peixun Liu;;Computational Simulation for Binding Interaction of TLR5 with Flagellin[A];第二屆國(guó)際計(jì)算科學(xué)與工程國(guó)際學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2013年

2 張穎;Yuanyuan Zhang;Yun Xie;Yonggang Gao;Juanjuan Ma;Jie Yuan;Juan Li;Jiangyan Wang;Lei Li;Jianping Zhang;Li Chu;;丹參對(duì)鐵超載肝纖維化的多靶點(diǎn)抑制作用(英文)[A];第十一屆全國(guó)博士生學(xué)術(shù)年會(huì)（生物醫(yī)藥專(zhuān)題）論文集（上冊(cè)，，大會(huì)報(bào)告）[C];2013年

3 Yaogang Zhong;Tianran Ma;Xiuxuan Sun;Wentian Chen;Yuan Hu;Yannan Qin;Peixin Zhang;Haoxiang Wu;Jihong Cui;Huijie Bian;Zheng Li;;Alteration and location of GalNAc-binding proteins in activated human hepatic stellate cells[A];第十一屆全國(guó)博士生學(xué)術(shù)年會(huì)（生物醫(yī)藥專(zhuān)題）論文集（中冊(cè)，墻報(bào)P1-P24）[C];2013年

4 宋景春;Dunzhong Hu;Chao He;Tao Wang;Xuefeng Liu;Linhao Ma;Zhaofen Lin;Zili Chen;;Novel Biomarkers for Early Prediction of Sepsis-Induced Disseminated Intravascular Coagulation in a Mouse Cecal Ligation and Puncture Model[A];江西省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)重癥醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)暨第一屆長(zhǎng)城危重病論壇論文匯編[C];2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 張迪;肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

2 黃成;c-FLIP_L在肝纖維化形成與逆轉(zhuǎn)過(guò)程中的表達(dá)及對(duì)TRAIL誘導(dǎo)HSC凋亡的調(diào)控作用研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

3 何飛;Notch信號(hào)對(duì)小鼠肝纖維化作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

4 段小群;玉郎傘多糖（YLS）抗肝纖維化作用及機(jī)制的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2006年

5 陳新;NGF對(duì)肝纖維化大鼠HSCs的促凋亡作用及p75受體的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

6 呂濤;“益肝康”單味藥對(duì)肝星狀細(xì)胞活化TGF-β1信號(hào)通路的影響及其有效成分分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年

7 王要軍;調(diào)控細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶-1對(duì)肝星狀細(xì)胞功能的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

8 常實(shí);同種異體肝細(xì)胞移植對(duì)大鼠肝臟纖維化的影響[D];中南大學(xué);2007年

9 袁麗萍;鬼針草總黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化的治療作用及機(jī)制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

10 顧小紅;PARs對(duì)大鼠HSC活化、增殖和功能的調(diào)控機(jī)制及其在肝纖維化中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張巍峰;羥基喜樹(shù)堿誘導(dǎo)口腔鱗癌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)性凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2007年

2 徐靜;Wistar大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定[D];吉林大學(xué);2011年

3 陳蓮香;神經(jīng)生長(zhǎng)因子及其受體p75NTR對(duì)肝星狀細(xì)胞作用的初步研究[D];暨南大學(xué);2011年

4 鄭力搏;PTEN在CCl_4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化和自發(fā)逆轉(zhuǎn)肝組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及其與在體肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

5 郭劍;腺病毒介導(dǎo)的shRNA阻斷PTEN表達(dá)對(duì)體外活化肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

6 鄭艷麗;IGF-1在大鼠肝纖維化過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化及扶正化瘀方對(duì)肝纖維化的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

7 桑賢良;扶正化瘀方抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

8 劉建熙;雄黃對(duì)Bcl-2和Bax在原代培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中表達(dá)的影響[D];鄭州大學(xué);2011年

9 陳燕;外源性Smad-7聯(lián)合TIMP-lsiRNA對(duì)大鼠肝纖維化干預(yù)治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];石河子大學(xué);2011年

10 石玉香;癌性微環(huán)境下NGF對(duì)HSC p75NTR表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響[D];華中科技大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2711150