【摘要】：目的脂聯(lián)素基因(Apm-1)多態(tài)性是近年研究多囊卵巢綜合征(PCOS)及非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)遺傳易感性風(fēng)險(xiǎn)的熱點(diǎn)之一。本研究主要通過(guò)檢測(cè)脂聯(lián)素基因第二外顯子第45位及第二內(nèi)含子第276位點(diǎn)多態(tài)性的分布,分析脂聯(lián)素基因多態(tài)性及臨床影響因素與PCOS并發(fā)NAFLD的相關(guān)性,分析脂聯(lián)素基因多態(tài)性頻率分布和血清脂聯(lián)素水平的關(guān)系,探討脂聯(lián)素基因第二外顯子第45位及第二內(nèi)含子第276位點(diǎn)多態(tài)性與PCOS并發(fā)NAFLD遺傳易感性的關(guān)系,為防治PCOS并發(fā)NAFLD的發(fā)生提供理論依據(jù)。 方法采用病例對(duì)照研究,選取2008年3月至2009年9月期間在唐山市婦幼保健院生殖中心不孕門(mén)診收治的單純PCOS患者100例作為對(duì)照組、PCOS并發(fā)NAFLD患者100例作為病例組。采用面對(duì)面的方式填寫(xiě)調(diào)查表,收集調(diào)查對(duì)象的一般情況包括年齡、腰圍、臀圍、身高、體重、飲酒等資料;采用全自動(dòng)生化儀測(cè)定各種規(guī)定的生化指標(biāo);采用放射免疫法檢測(cè)血清胰島素;采用免疫化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)生殖激素;應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定血清脂聯(lián)素水平;應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)法(PCR RFLP即polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism)檢測(cè)其Apm-1 45TG、276GT基因多態(tài)性。采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料兩組間比較用t檢驗(yàn),兩組以上比較用方差分析,計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)并用多因素非條件Logistic回歸分析來(lái)控制其他混淆變量。 結(jié)果在研究人群中經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析得出如下結(jié)果: (1)兩組研究對(duì)象基因型分布符合Hardy-weinberg平衡,研究對(duì)象年齡與BMI構(gòu)成無(wú)差異。 (2)腰圍、腰臀比、CHOL、TG、LDL、IR指數(shù)在病例組中明顯高于對(duì)照組,是PCOS并發(fā)為NAFLD的危險(xiǎn)因素,而血清脂聯(lián)素水平和HDL在病例組中明顯低于對(duì)照組,是PCOS并發(fā)為NAFLD的保護(hù)因素。 (3) Apm-1 45TG多態(tài)性位點(diǎn)三種基因型在病例組/對(duì)照組中的分布為:T/T型71%/72%,G/T型25%/20%,G/G型4%/8%;兩種等位基因頻率在病例組/對(duì)照組中的分布為:T 84%/82%,G 16%/18%。45TG多態(tài)性位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率在兩組中的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Apm-1276GT多態(tài)性位點(diǎn)三種基因型在病例組/對(duì)照組中的分布為:T/T型8%/16%,G/T型36%/51%,G/G型56%/33%;兩種等位基因頻率在病例組/對(duì)照組中的分布為:T 26%/42%,G 74%/58%。276GT多態(tài)性位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率在兩組中的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (4) Apm-1 276GT基因型頻率的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)分析,基因型T/T和G/T攜帶者患PCOS并發(fā)NAFLD的風(fēng)險(xiǎn)是基因型G/G攜帶者的0.387倍(95%CI: 0.218-0.687, P0.05)。 (5) Apm-145TG三種基因型之間的血清脂聯(lián)素水平?jīng)]有差別(p0.05);Apm-1 276GT多態(tài)性位點(diǎn),突變等位基因276T(T/T、G/T基因型)攜帶者的血清脂聯(lián)素水平均高于非276T攜帶者(G/G型)的血清脂聯(lián)素水平,尤其是突變純合子TT型血清脂聯(lián)素水平增高最顯著。 (6)多因素Logistic回歸分析篩選顯示:Apm-1 276T等位基因、血清脂聯(lián)素水平和HDL是PCOS并發(fā)NAFLD發(fā)病的獨(dú)立保護(hù)因素;IR指數(shù)、TG、LDL、腰臀比、腰圍是PCOS并發(fā)NAFLD發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素;而未發(fā)現(xiàn)Apm-1 45TG基因多態(tài)性與多囊卵巢綜合征并發(fā)非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病有關(guān)(P0.05)。 結(jié)論本研究表明漢族人群中(1) Apm-1 276GT多態(tài)性與PCOS并發(fā)NAFLD的發(fā)生有關(guān),攜帶突變的276T等位基因是發(fā)生PCOS并發(fā)NAFLD的獨(dú)立保護(hù)因素;未發(fā)現(xiàn)Apm-1 45TG多態(tài)性與PCOS并發(fā)NAFLD的發(fā)病有關(guān)。(2) Apm-1 276GT多態(tài)性影響血清脂聯(lián)素的表達(dá),攜帶突變的276T等位基因的個(gè)體血清脂聯(lián)素水平高;未發(fā)現(xiàn)Apm-145TG多態(tài)性影響血清脂聯(lián)素的表達(dá)。
【圖文】：

素基因 276G>T 位點(diǎn) PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠 (2%)電泳圖2.2 Apm-1SNP45T>G、276G>T 基因 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的 RFLP 判定Apm-1SNP45T>G 位點(diǎn)的擴(kuò)增片段為 372bp，野生型(TT 基因型) 因無(wú) SmaⅠ酶切位點(diǎn)（CGG），酶切后只有與 PCR 產(chǎn)物一樣的 372bp 一個(gè)片段,突變雜合子(GT 基因型)有一個(gè)酶切位點(diǎn)缺失，酶切后可見(jiàn)372bp、296bp 和 76bp 三個(gè)片段，突變純合子(GG 基因型)酶切后可見(jiàn)296bp 和 76bp 兩個(gè)片段，其結(jié)果見(jiàn)圖 4。196bp—372bp

脂聯(lián)素基因276G>T位點(diǎn)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊
【學(xué)位授予單位】：華北煤炭醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R711.75;R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2709819