Survivin反義寡核苷酸對大鼠肝星狀細胞HSC-T6凋亡的影響
發(fā)布時間：2020-06-10 03:50
【摘要】： 目的:通過survivin反義寡核苷酸(Antisense Oligodeoxynucleotides,ASODN)轉染HSC-T6細胞株,研究其對HSC-T6細胞株凋亡的影響。 方法:實驗分為空白組、脂質體組、1000nmol/LSODN組、ASODN組(400nmol/ L、800nmol/L、1000nmol/L)。脂質體介導survivin寡核苷酸轉染HSC-T6細胞24小時后,倒置熒光顯微鏡下觀察轉染效率。Survivin寡核苷酸轉染HSC-T6細胞48小時后,通過RT-PCR、western-blotting檢測survivin基因表達的改變,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的改變,PI單染流式細胞儀測定細胞凋亡率。 結果:轉染24小時后,于倒置熒光顯微鏡下觀察發(fā)現:ODN各濃度組細胞內均可見到清晰的綠色熒光,轉染效率均達到80%;轉染作用48小時后,RT-PCR及werstern-blot結果顯示:與空白組、脂質體組、1000nmol/LSODN組比較,ASODN各濃度組survivin mRNA及蛋白表達量均低于各對照組(p0.01);ASODN各濃度組survivin mRNA及蛋白表達量組間比較,均有統(tǒng)計學意義(p0.01),空白組、脂質體組、1000nmol/LSODN組組間比較無統(tǒng)計學差異(p0.05)。在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現ASODN各濃度組細胞出現明顯的凋亡現象;PI單染流式細胞儀檢測顯示:與空白組、脂質體、1000nmol/LSODN組比較,ASODN各濃度組細胞凋亡率明顯提高(p0.05);ASODN各濃度組凋亡率組間比較,均有統(tǒng)計學差異(p0.01)�？瞻捉M、脂質體組、1000nmol/LSODN組組間比較無統(tǒng)計學差異(p0.05)。 結論:1、HSC-T6細胞高表達survivin; 2、Survivin ASODN能抑制survivin基因的表達和誘導HSC-T6細胞的凋亡。
【圖文】：
經1.0%瓊脂糖凝膠與0.5xTBE電泳液中100伏電泳30分鐘，紫外投射儀下可見2條清晰的條帶，由上到下分別為28s、18s,且28s/18s>1.5,提示RNA無明顯降解，見圖3。圖3 總RNA電泳圖注：1：空白組；2：脂質體組；3：1000nmol/LSODN； 4：400nmol/LASODN；5：800nmol/LASODN；6:1000nmol/LASODN；2.2 Survivin ASODN對HSC-T6細胞survivin mRNA表達的影響RT-PCR產物電泳結果顯示：在576 bp處各組均可見到均勻一致的GAPDH基因的條帶；在260bp處各組細胞均出現不同程度的特異性survivin基因條帶。用圖像分析儀對擴增產物進行分析，結果顯示：各ASODN組Survivin mRNA 表達量均弱于各對照組survivin mRNA表達量且差異有顯著性（p<0.01），并且隨著ASODN轉染濃度的增大，survivin mRNA表達量逐漸降低，呈現劑量依賴性�？瞻捉M、脂質體組及SODN組中HSC-T6細胞survivin mRNA表達量差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05），，見圖4、表1。
圖4 ASODN對HSC-T6細胞Survivin mRNA表達的影響注：M:DNAmarker；1：空白組；2：脂質體組；3：1000nmol/LSODN；4：400nmol/LASODN；5：800nmol/LASODN；6:1000nmol/LASODN；表1 各組細胞survivin/GAPDH mRNA表達灰度值比（x ±S）分組 灰度值比空白組 0.947±0.026b空脂質體組 0.907±0.018bSODN 組 (1000nmol/L) 0.903±0.009bASODN 組（400nmol/L） 0.606±0.017acASODN 組（800nmol/L） 0.463±0.020acASODN 組（1000nmol/L） 0.252±0.029ac
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R575.2
本文編號：2705725
【圖文】：
經1.0%瓊脂糖凝膠與0.5xTBE電泳液中100伏電泳30分鐘，紫外投射儀下可見2條清晰的條帶，由上到下分別為28s、18s,且28s/18s>1.5,提示RNA無明顯降解，見圖3。圖3 總RNA電泳圖注：1：空白組；2：脂質體組；3：1000nmol/LSODN； 4：400nmol/LASODN；5：800nmol/LASODN；6:1000nmol/LASODN；2.2 Survivin ASODN對HSC-T6細胞survivin mRNA表達的影響RT-PCR產物電泳結果顯示：在576 bp處各組均可見到均勻一致的GAPDH基因的條帶；在260bp處各組細胞均出現不同程度的特異性survivin基因條帶。用圖像分析儀對擴增產物進行分析，結果顯示：各ASODN組Survivin mRNA 表達量均弱于各對照組survivin mRNA表達量且差異有顯著性（p<0.01），并且隨著ASODN轉染濃度的增大，survivin mRNA表達量逐漸降低，呈現劑量依賴性�？瞻捉M、脂質體組及SODN組中HSC-T6細胞survivin mRNA表達量差異無統(tǒng)計學意義（p>0.05），，見圖4、表1。
圖4 ASODN對HSC-T6細胞Survivin mRNA表達的影響注：M:DNAmarker；1：空白組；2：脂質體組；3：1000nmol/LSODN；4：400nmol/LASODN；5：800nmol/LASODN；6:1000nmol/LASODN；表1 各組細胞survivin/GAPDH mRNA表達灰度值比（x ±S）分組 灰度值比空白組 0.947±0.026b空脂質體組 0.907±0.018bSODN 組 (1000nmol/L) 0.903±0.009bASODN 組（400nmol/L） 0.606±0.017acASODN 組（800nmol/L） 0.463±0.020acASODN 組（1000nmol/L） 0.252±0.029ac
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R575.2
【參考文獻】
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1 陳競;凋亡抑制因子Survivin的研究進展[J];川北醫(yī)學院學報;2004年02期
2 楊華安;茍欣;;Survivin的研究進展[J];實用醫(yī)學雜志;2008年03期
3 劉紅云;王希君;陳舒麗;姚旌旗;;腫瘤基因治療中survivin的研究進展[J];咸寧學院學報(醫(yī)學版);2007年02期
4 ;Selection of optimal antisense accessible sites of survivin and its application in treatment of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2005年05期
本文編號：2705725
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