發(fā)布時(shí)間：2020-06-10 01:01

【摘要】：目的:研究荔枝核總黃酮(TFL)對肝纖維化(HF)病理過程中轉(zhuǎn)化生長因子-β_1(TGF-β_1)誘導(dǎo)的人肝星狀細(xì)胞(HSC-LX2)凋亡作用及TLR4、NF-κB、IL-1RⅠ表達(dá)的影響。方法:將培養(yǎng)好的HSC-LX2隨機(jī)分為正常組、TGF-β_1組及TFL組(150、300、600mg/L)。TGF-β_1組及TFL組細(xì)胞接種于含10%FBS的DMEM+5μg/L TGF-β_1、10cm培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)24h后,TFL組分別加入150、300、600mg/L TFL,培養(yǎng)48小時(shí)后測定。采用Hoechst33258染色法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期;采用FITC Annexin V/PI雙染色法檢測細(xì)胞凋亡;采用Western blot法檢測細(xì)胞中Toll樣受體4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、白細(xì)胞介素1受體Ⅰ(IL-1RⅠ)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:(1)Hoechst33258染色法觀察各組:正常組、TGF-β_1組細(xì)胞核形態(tài)完整,TFL組可見細(xì)胞核固縮、裂解、凋亡小體形成等細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化。(2)流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,TGF-β_1組中G_0/G_1期細(xì)胞百分比(45.56±0.72)、S期細(xì)胞百分比(45.21±0.18)與正常組中G_0/G_1期細(xì)胞百分比(53.74±0.96)、S期細(xì)胞百分比(34.93±1.89)比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);150mg/L TFL組中G_0/G_1期細(xì)胞百分比(58.05±5.17)、S期細(xì)胞百分比(33.47±4.67),300mg/L TFL組中G_0/G_1期細(xì)胞百分比(73.23±4.08)、S期細(xì)胞百分比(19.97±3.88)及600mg/L TFL組中G_0/G_1期細(xì)胞百分比(86.91±2.15)、S期細(xì)胞百分比(7.01±1.54)均分別與TGF-β_1組中G_0/G_1期細(xì)胞百分比、S期細(xì)胞百分比比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);隨著TFL濃度增高,G_0/G_1期細(xì)胞增加(P0.05),S期細(xì)胞減少(P0.05),TFL阻滯細(xì)胞于G_0/G_1期。TGF-β_1組中細(xì)胞早期凋亡率(1.16±0.60)、晚期凋亡率(5.53±2.41)、總凋亡率(6.70±3.01)與正常組中細(xì)胞早期凋亡率(1.03±0.75)、晚期凋亡率(6.80±3.34)、總凋亡率(7.83±3.26)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);150mg/L TFL組中細(xì)胞早期凋亡率(18.16±6.73)、晚期凋亡率(14.93±0.80)、總凋亡率(33.10±6.75),300mg/L TFL組中細(xì)胞早期凋亡率(25.30±1.57)、晚期凋亡率(15.80±0.43)、總凋亡率(41.13±1.15)及600mg/L TFL組中細(xì)胞早期凋亡率(18.96±1.36)、晚期凋亡率(29.53±1.16)、總凋亡率(48.50±1.13)均分別與TGF-β_1組中細(xì)胞早期凋亡率、晚期凋亡率、總凋亡率比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);隨著TFL濃度增高,TFL對HSC-LX2凋亡具有促進(jìn)作用,更傾向于促進(jìn)細(xì)胞晚期凋亡。(3)Western blot法結(jié)果顯示,TGF-β_1組HSC-LX2中TLR4蛋白(1.05±0.11)、NF-κB蛋白(1.19±0.10)、IL-1RⅠ蛋白(1.17±0.12)表達(dá)量與正常組HSC-LX2中TLR4蛋白(0.86±0.74)、NF-κB蛋白(0.88±0.13)、IL-1RⅠ蛋白(0.90±0.12)表達(dá)量比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);150mg/L TFL組HSC-LX2中TLR4蛋白(0.87±0.05)、NF-κB蛋白(0.77±0.05)、IL-1RⅠ蛋白(0.78±0.02)表達(dá)量,300mg/L TFL組HSC-LX2中TLR4蛋白(0.61±0.05)、NF-κB蛋白(0.56±0.07)、IL-1RⅠ蛋白(0.53±0.08)表達(dá)量及600mg/L TFL組HSC-LX2中TLR4蛋白(0.40±0.07)、NF-κB蛋白(0.36±0.06)、IL-1RⅠ蛋白(0.35±0.05)表達(dá)量均分別與TGF-β_1組HSC-LX2中TLR4蛋白、NF-κB蛋白、IL-1RⅠ蛋白表達(dá)量比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);TFL組TLR4蛋白、NF-κB蛋白、IL-1RⅠ蛋白表達(dá)量均低于TGF-β_1組;且隨著TFL濃度升高,HSC-LX2內(nèi)TLR4蛋白、NF-κB蛋白、IL-1RⅠ蛋白表達(dá)量逐漸降低。結(jié)論:(1)TFL抗肝纖維化的機(jī)制可能與TFL促進(jìn)TGF-β_1誘導(dǎo)的HSC-LX2凋亡相關(guān);(2)TFL促進(jìn)TGF-β_1誘導(dǎo)的HSC-LX2凋亡的分子機(jī)制可能與降低TLR4、NF-κB在HSC-LX2內(nèi)的表達(dá)相關(guān);(3)TLR-IL-1R炎癥通路可能參與了肝纖維化的過程,通過抑制TLR-IL-1R炎癥通路,可望成為抗肝纖維化的一條新途徑。
【圖文】：

22圖 1 造模結(jié)果Fig.1 Modeling results2.2 TFL 對 HSC-LX2 形態(tài)學(xué)變化比較Hoechst33258 染色法結(jié)果顯示，，正常組、TGF-β1組細(xì)胞核形態(tài)完整；TFL 組可見細(xì)胞核固縮、裂解、凋亡小體形成等細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化，并隨著 TFL 濃度的增大，細(xì)胞數(shù)量減少，凋亡細(xì)胞比例增大。如圖 2

23注：1：正常組；2：TGF-β1組；3：150mg/L TFL 組；4：300mg/L TFL 組；5：600mg/L TFL 組。圖 2 各組細(xì)胞凋亡形態(tài)（400×）Fig.2 Apoptotic morphology of cells in different groups (400×).3 TFL 對 HSC-LX2 細(xì)胞周期的影響流 式 細(xì) 胞 儀 檢測 結(jié) 果 顯 示 ， TGF-β1組 中 G0/G1期 細(xì) 胞 百 分 比45.56±0.72）、S 期細(xì)胞百分比（45.21±0.18）與正常組中 G0/G1期細(xì)胞分比（53.74±0.96）、S 期細(xì)胞百分比（34.93±1.89）比較，差異具有
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2705538