【摘要】： 目的：研究經(jīng)尾靜脈,門靜脈,肝臟局部和脾臟局部四種移植途徑移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后,CCl4所致的肝纖維化的大鼠肝功能變化及肝臟組織變化,探索其治療作用及其可能機(jī)制,尋找最侍移植途徑。 方法：一.以密度梯度離心和貼壁法相結(jié)合的方法,分離SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)至第三代,觀察其形態(tài)變化及生長曲線。 二.250-300克健康雌性SD大鼠60只,以四氯化碳和酒精聯(lián)合的綜合方法誘導(dǎo)肝硬化模型,10周后隨機(jī)宰殺三只大鼠,觀察其肝臟大體形態(tài)及組織切片,驗(yàn)證造模成功后,取其中的50只將其隨機(jī)分為對照組,尾靜脈移植組,門靜脈移植組,肝臟局部移植組和脾臟局部移植組。 三.DAPI標(biāo)記對數(shù)生長期的BMSCs,孵育過夜后,在熒光顯微鏡下420nm波長觀察其形態(tài)和標(biāo)記率,調(diào)整細(xì)胞密度為106／ml后備用。 四.嚴(yán)格無菌和良好麻醉?xiàng)l件下,將DAPI標(biāo)記的BMSCs以106／只的劑量經(jīng)不同和途徑移植給不同的實(shí)驗(yàn)組,對照組僅做開腹術(shù)。 五.將移植BMSCs后的大鼠繼續(xù)培養(yǎng),各組大鼠仍然以0.3ml/100g的維持劑量皮下注射40%CCl4植物油溶液,予正常飲食喂養(yǎng),以避免肝功能自發(fā)性恢復(fù)所產(chǎn)生的偏倚。 六.三周后,處死所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,取其靜脈血檢測ALT, TBIL,ALB,取肝臟做冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察移植率。 結(jié)果：一.BMSCs的分離培養(yǎng)和標(biāo)記。通過密度梯度離心和貼壁法相結(jié)合的方法分離得到的BMSCs形態(tài)呈棱形,呈纖維細(xì)胞樣,生長旺盛,原代培養(yǎng)需10天左右,經(jīng)傳代和多次換液后,逐漸去除懸浮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,形態(tài)較均一,傳代培養(yǎng)約需3-4天。經(jīng)DAPI標(biāo)記的BMSCs在熒光顯微鏡下呈藍(lán)色,標(biāo)記率為97%。 二.肝硬化大鼠模型的制做。造模期間大鼠活動(dòng)減少,精神萎靡,進(jìn)食減少,但大鼠整體耐受狀態(tài)良好。造模結(jié)束時(shí),大鼠死亡5只,死亡者均為體重較大個(gè)體,原因可能是CCl4注射過量。隨機(jī)處死5只大鼠,顯示腹水形成,肝臟表面粗糙。病理切片顯示肝內(nèi)假小葉廣泛形成,假葉內(nèi)可見纖維再分隔現(xiàn)象,同時(shí)伴有明顯的肝細(xì)再生結(jié)節(jié)。 三.BMSCs移植后效果觀察。各實(shí)驗(yàn)組肝功能均較對照組有明顯改善(P0.05)；肝臟局部移植組較其它實(shí)驗(yàn)組肝功能的改善更為明顯(P0.05)；門靜脈移植組,脾臟注射移植組,尾靜脈注射移植各組間肝功能改善無顯著差異(P0.05)。 結(jié)論：通過密度梯度離心和貼壁培養(yǎng)相結(jié)合的方法可獲得較高純度的BMSCs;DAPI是BMSCs一種良好的示蹤劑；四氯化碳聯(lián)合酒精可縮短肝硬化模型的制做時(shí)間,提高造模成功率；BMSCs移植后,肝硬化大鼠的肝功能明顯改善,且通過肝臟注射途徑移植BMSCs治療肝硬化比經(jīng)外周靜脈,門靜脈,脾臟注射更有優(yōu)勢。
【圖文】：

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本文編號(hào)：2701673