【摘要】：背景:自噬被認(rèn)為是一種細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng),在包括固有免疫等過(guò)程中起重要作用。巨噬細(xì)胞是主要的先天免疫細(xì)胞,且常在DSS誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎中被激活。功能失調(diào)的自噬促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子在IBD的發(fā)病機(jī)制中具有重要影響。Kv1.3鉀通道存在于巨噬細(xì)胞中,Kv1.3鉀通道可控制巨噬細(xì)胞的活化和增殖過(guò)程。PAP-1是一種特異性的Kv1.3通道阻滯劑,大量應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究。PAP-1是否通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞自噬減輕結(jié)腸炎的相關(guān)研究目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)報(bào)道。因此,探討PAP-1對(duì)結(jié)腸炎腸道炎癥的影響及其可能機(jī)制對(duì)于結(jié)腸炎的防治具有重要的理論意義。目的:探討特異性Kv1.3阻滯劑PAP-1抗DSS結(jié)腸炎小鼠的療效及作用機(jī)制。方法:將C57BL/6小鼠隨機(jī)的分為以下4組:正常對(duì)照組、正常對(duì)照+PAP-1組、DSS模型組、DSS+PAP-1組。在小鼠飲水中加入終濃度為5%DSS制備實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎模型,PAP-1(3μg·g-1,每天3次,連續(xù)7天)腹腔注射給藥。正常對(duì)照組及模型組予等體積溶劑腹腔注射。實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行結(jié)腸炎小鼠炎癥活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分;實(shí)驗(yàn)結(jié)束后收集小鼠腹腔巨噬細(xì)胞、脾臟及結(jié)腸組織,進(jìn)行結(jié)腸HE染色評(píng)分,結(jié)腸組織勻漿檢測(cè)MPO活性及IL-1,IL-6,IL-10及TNF-α水平;免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)腸F4/80+巨噬細(xì)胞改變;透射電鏡觀察腹腔巨噬細(xì)胞及脾巨噬細(xì)胞自噬相關(guān)結(jié)構(gòu);RT-q PCR、Western Blot檢測(cè)小鼠結(jié)腸、腹腔巨噬細(xì)胞和脾巨噬細(xì)胞i NOS、IL-1β及自噬相關(guān)標(biāo)志物L(fēng)C3-Ⅱ、p62及Beclin-1的表達(dá)。結(jié)果:成功制備小鼠DSS結(jié)腸炎模型,PAP-1減少DSS結(jié)腸炎小鼠體重下降,降低DAI評(píng)分及結(jié)腸HI評(píng)分(P0.05);同時(shí)PAP-1降低結(jié)腸組織中MPO活性(P0.05)及IL-1,IL-6及TNF-α水平(P均0.05),升高IL-10水平(P0.05)。與模型組比較,PAP-1降低結(jié)腸F4/80表達(dá),腹腔巨噬細(xì)胞及脾巨噬細(xì)胞內(nèi)自噬泡增多;同時(shí)PAP-1降低結(jié)腸、腹腔巨噬細(xì)胞和脾巨噬細(xì)胞i NOS、IL-1β及p62表達(dá),明顯升高LC3-Ⅱ及Beclin1表達(dá)(P均0.05)。結(jié)論:PAP-1可能通過(guò)減少結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸及巨噬細(xì)胞自噬受損,降低巨噬細(xì)胞活化及炎癥因子水平,減輕結(jié)腸炎癥損害。
【圖文】：

3.1.2 結(jié)腸組織的病理表現(xiàn)結(jié)腸 HE 染色顯示，DSS 模型組小鼠結(jié)腸黏膜損傷明顯，可見(jiàn)多灶性淺潰瘍。上皮及腺體大部分遭到破壞，炎癥細(xì)胞大量浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞丟失和黏膜下層水腫，并可見(jiàn)淋巴細(xì)胞聚集或淋巴濾泡形成(圖 3)，正常對(duì)照組小鼠結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，腺體整齊排列，未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(圖 4)。 DSS 模型組小鼠 HI 評(píng)分相比正常對(duì)照組 HI 評(píng)分明顯增高(P<0.05，圖 5)。圖 1 DSS 結(jié)腸炎小鼠體重變化Fig.1 Body weight changes in DSScolitis mice (n=8).圖 2 DSS 結(jié)腸炎小鼠 DAI 評(píng)分Fig.2 DAI scores in DSS-inducedcolitis mice(n=8).

3.1.2 結(jié)腸組織的病理表現(xiàn)結(jié)腸 HE 染色顯示，DSS 模型組小鼠結(jié)腸黏膜損傷明顯，可見(jiàn)多灶性淺潰瘍。上皮及腺體大部分遭到破壞，炎癥細(xì)胞大量浸潤(rùn)，杯狀細(xì)胞丟失和黏膜下層水腫，并可見(jiàn)淋巴細(xì)胞聚集或淋巴濾泡形成(圖 3)，正常對(duì)照組小鼠結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，腺體整齊排列，未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(圖 4)。 DSS 模型組小鼠 HI 評(píng)分相比正常對(duì)照組 HI 評(píng)分明顯增高(P<0.05，，圖 5)。圖 1 DSS 結(jié)腸炎小鼠體重變化Fig.1 Body weight changes in DSScolitis mice (n=8).圖 2 DSS 結(jié)腸炎小鼠 DAI 評(píng)分Fig.2 DAI scores in DSS-inducedcolitis mice(n=8).
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R574.62

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本文編號(hào)：2700915