發(fā)布時間：2020-06-07 05:28

【摘要】：背景:自噬被認為是一種細胞應激反應,在包括固有免疫等過程中起重要作用。巨噬細胞是主要的先天免疫細胞,且常在DSS誘導的實驗性結(jié)腸炎中被激活。功能失調(diào)的自噬促進巨噬細胞產(chǎn)生促炎細胞因子在IBD的發(fā)病機制中具有重要影響。Kv1.3鉀通道存在于巨噬細胞中,Kv1.3鉀通道可控制巨噬細胞的活化和增殖過程。PAP-1是一種特異性的Kv1.3通道阻滯劑,大量應用于實驗動物研究。PAP-1是否通過調(diào)節(jié)巨噬細胞自噬減輕結(jié)腸炎的相關研究目前國內(nèi)外尚無報道。因此,探討PAP-1對結(jié)腸炎腸道炎癥的影響及其可能機制對于結(jié)腸炎的防治具有重要的理論意義。目的:探討特異性Kv1.3阻滯劑PAP-1抗DSS結(jié)腸炎小鼠的療效及作用機制。方法:將C57BL/6小鼠隨機的分為以下4組:正常對照組、正常對照+PAP-1組、DSS模型組、DSS+PAP-1組。在小鼠飲水中加入終濃度為5%DSS制備實驗性結(jié)腸炎模型,PAP-1(3μg·g-1,每天3次,連續(xù)7天)腹腔注射給藥。正常對照組及模型組予等體積溶劑腹腔注射。實驗中進行結(jié)腸炎小鼠炎癥活動指數(shù)(DAI)評分;實驗結(jié)束后收集小鼠腹腔巨噬細胞、脾臟及結(jié)腸組織,進行結(jié)腸HE染色評分,結(jié)腸組織勻漿檢測MPO活性及IL-1,IL-6,IL-10及TNF-α水平;免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)腸F4/80+巨噬細胞改變;透射電鏡觀察腹腔巨噬細胞及脾巨噬細胞自噬相關結(jié)構(gòu);RT-q PCR、Western Blot檢測小鼠結(jié)腸、腹腔巨噬細胞和脾巨噬細胞i NOS、IL-1β及自噬相關標志物LC3-Ⅱ、p62及Beclin-1的表達。結(jié)果:成功制備小鼠DSS結(jié)腸炎模型,PAP-1減少DSS結(jié)腸炎小鼠體重下降,降低DAI評分及結(jié)腸HI評分(P0.05);同時PAP-1降低結(jié)腸組織中MPO活性(P0.05)及IL-1,IL-6及TNF-α水平(P均0.05),升高IL-10水平(P0.05)。與模型組比較,PAP-1降低結(jié)腸F4/80表達,腹腔巨噬細胞及脾巨噬細胞內(nèi)自噬泡增多;同時PAP-1降低結(jié)腸、腹腔巨噬細胞和脾巨噬細胞i NOS、IL-1β及p62表達,明顯升高LC3-Ⅱ及Beclin1表達(P均0.05)。結(jié)論:PAP-1可能通過減少結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸及巨噬細胞自噬受損,降低巨噬細胞活化及炎癥因子水平,減輕結(jié)腸炎癥損害。
【圖文】：

3.1.2 結(jié)腸組織的病理表現(xiàn)結(jié)腸 HE 染色顯示，DSS 模型組小鼠結(jié)腸黏膜損傷明顯，可見多灶性淺潰瘍。上皮及腺體大部分遭到破壞，炎癥細胞大量浸潤，杯狀細胞丟失和黏膜下層水腫，并可見淋巴細胞聚集或淋巴濾泡形成(圖 3)，正常對照組小鼠結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，腺體整齊排列，未見明顯炎癥細胞浸潤(圖 4)。 DSS 模型組小鼠 HI 評分相比正常對照組 HI 評分明顯增高(P<0.05，圖 5)。圖 1 DSS 結(jié)腸炎小鼠體重變化Fig.1 Body weight changes in DSScolitis mice (n=8).圖 2 DSS 結(jié)腸炎小鼠 DAI 評分Fig.2 DAI scores in DSS-inducedcolitis mice(n=8).

3.1.2 結(jié)腸組織的病理表現(xiàn)結(jié)腸 HE 染色顯示，DSS 模型組小鼠結(jié)腸黏膜損傷明顯，可見多灶性淺潰瘍。上皮及腺體大部分遭到破壞，炎癥細胞大量浸潤，杯狀細胞丟失和黏膜下層水腫，并可見淋巴細胞聚集或淋巴濾泡形成(圖 3)，正常對照組小鼠結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)完整，腺體整齊排列，未見明顯炎癥細胞浸潤(圖 4)。 DSS 模型組小鼠 HI 評分相比正常對照組 HI 評分明顯增高(P<0.05，，圖 5)。圖 1 DSS 結(jié)腸炎小鼠體重變化Fig.1 Body weight changes in DSScolitis mice (n=8).圖 2 DSS 結(jié)腸炎小鼠 DAI 評分Fig.2 DAI scores in DSS-inducedcolitis mice(n=8).
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R574.62

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本文編號：2700915