當(dāng)前位置：主頁(yè) > 醫(yī)學(xué)論文 > 消化疾病論文 >

實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔體表循經(jīng)高溫現(xiàn)象與脂肪組織UCPmRNA表達(dá)的相關(guān)性研究

發(fā)布時(shí)間：2020-06-07 03:42

【摘要】： 目的：建立實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔模型,以誘發(fā)循經(jīng)高溫反應(yīng)現(xiàn)象,通過(guò)紅外熱像儀觀察循經(jīng)高溫反應(yīng)現(xiàn)象的分布特點(diǎn)、檢測(cè)溫度值變化；采用分子生物學(xué)方法研究循經(jīng)脂肪組織中UCP1mRNA表達(dá)增強(qiáng)產(chǎn)熱與產(chǎn)生循經(jīng)高溫反應(yīng)現(xiàn)象的相關(guān)性,為揭示循經(jīng)高溫反應(yīng)的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：本研究共分為兩部分。第一部分,將家兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔模型組和空白對(duì)照組；采用膽總管縮窄結(jié)扎并于膽囊內(nèi)注射大腸桿菌液的造模方法,建立實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔模型。分別采用紅外熱像儀與紅外溫度計(jì)于術(shù)前及術(shù)后第14天在模型兩側(cè)腹部循膽經(jīng)部位,進(jìn)行測(cè)溫、采集圖像和溫度數(shù)據(jù)。分析實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔造模術(shù)誘導(dǎo)循經(jīng)高溫現(xiàn)象產(chǎn)生的成功率；觀察家兔體表產(chǎn)生的循經(jīng)高溫現(xiàn)象的分布特點(diǎn)及檢測(cè)指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化,對(duì)兩種檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行比較；對(duì)家兔術(shù)后第14天與術(shù)前溫度變化進(jìn)行比較。第二部分,采用成功誘導(dǎo)產(chǎn)生循經(jīng)高溫現(xiàn)象的實(shí)驗(yàn)家兔模型組及與其相對(duì)應(yīng)的空白對(duì)照組家兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,于術(shù)后第14天取材。分別用UNIQ-10離心柱法和Trizol法提取實(shí)驗(yàn)家兔兩側(cè)腹部循膽經(jīng)出現(xiàn)循經(jīng)高溫線的部位的脂肪組織總RNA,并對(duì)兩種方法提取的總RNA進(jìn)行比較,選擇其中之一作為最為適宜的提取方法。提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄后,利用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)循經(jīng)高溫現(xiàn)象產(chǎn)生部位脂肪組織中UCP1mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè),以觀察實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔模型誘導(dǎo)的循經(jīng)高溫現(xiàn)象的產(chǎn)生對(duì)脂肪組織中UCP1基因表達(dá)水平的影響。結(jié)果：第一部分 1.紅外熱像儀采集圖像與紅外溫度計(jì)測(cè)溫測(cè)定實(shí)驗(yàn)家兔兩側(cè)腹部循膽經(jīng)部位溫度數(shù)據(jù)相比較,發(fā)現(xiàn)這兩種方法所檢測(cè)出的溫度值變化的趨勢(shì)基本一致,即兔術(shù)后第14天被測(cè)部位溫度較術(shù)前升高；并且頭側(cè)溫度高于尾側(cè)溫度。這一觀察結(jié)果表明,雖紅外溫度計(jì)與紅外熱像掃描儀所得出的結(jié)果在精度上會(huì)有差別(1℃左右),但這兩種方法在客觀地反映循經(jīng)溫度變化的趨勢(shì)上是基本一致的。故此本實(shí)驗(yàn)建立的紅外溫度計(jì)檢測(cè)循經(jīng)高溫反應(yīng)的方法具有可行性,作為本實(shí)驗(yàn)的手段之一,保障了相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采集和順利進(jìn)行。 2.對(duì)成功誘導(dǎo)產(chǎn)生的循經(jīng)高溫現(xiàn)象的模型進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)：家兔軀干雙側(cè)面可出現(xiàn)縱向高溫線,其走行與足少陽(yáng)膽經(jīng)走行一致,有些較寬,偶有覆蓋其它經(jīng)和串經(jīng)現(xiàn)象。平均長(zhǎng)度為5-9 cm,最長(zhǎng)可達(dá)軀干全長(zhǎng)。其溫度變化趨勢(shì)的特點(diǎn)是：頭側(cè)溫度高于尾側(cè),并且右側(cè)出現(xiàn)的高溫線溫度值較左側(cè)溫度值高。 3.在實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔造模術(shù)誘導(dǎo)循經(jīng)高溫現(xiàn)象產(chǎn)生的成功率分析中,通過(guò)對(duì)檢測(cè)指標(biāo)及圖表進(jìn)行分析得出,實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统霈F(xiàn)循經(jīng)高溫反應(yīng)現(xiàn)象的成功率約為60%。 4.在利用實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔造模術(shù)誘導(dǎo)循經(jīng)高溫現(xiàn)象產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)中,對(duì)紅外溫度計(jì)測(cè)溫法測(cè)得的溫度數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,得出：模型組家兔被測(cè)部位溫度同體比較術(shù)后第14天較術(shù)前有顯著性增高(P0.01)；空白對(duì)照組家兔同體比較前后測(cè)溫差異無(wú)顯著性(P0.01)；模型組與對(duì)照組家兔被測(cè)部位術(shù)后第14天與術(shù)前溫度差值的組間比較,模型組較空白對(duì)照組均有非常顯著性(P0.01)。第二部分 1.脂肪組織總RNA的提取方法是分析UCP1mRNA的關(guān)鍵技術(shù),而根據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)需要摸索出適合本實(shí)驗(yàn)要求的提取方法。通過(guò)反復(fù)摸索,發(fā)現(xiàn)Trizol法更適合作為本實(shí)驗(yàn)脂肪組織總RNA的提取方法。在UNIQ-10離心柱法和Trizol法提取的脂肪組織總RNA的比較結(jié)果中,純度比較結(jié)果是：Trizol法、UNIQ-10離心柱法提取的總RNA分別取3個(gè)樣品進(jìn)行測(cè)定,經(jīng)測(cè)定其OD值(A260／A280)的平均值分別為1.598、1.562,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示Trizol法提取的總RNA純度較高,而UNIQ-10離心柱提取的總RNA純度相對(duì)較低,離心柱試劑盒抽提的純度稍次于傳統(tǒng)的經(jīng)典方法,但其比值均已超過(guò)質(zhì)控要求；完整性比較結(jié)果是：由電泳圖明顯可見(jiàn)Trizol法、UNIQ-10離心柱法提取的家兔脂肪組織的總RNA的條帶均清晰且有一定的亮度,這表明兩種方法提取的總RNA都比較完整,但Trizol法提取的總RNA的條帶清晰度及亮度均高于UNIQ-10離心柱法提取的總RNA的條帶,表明其完整性更好。根據(jù)以上分析,本實(shí)驗(yàn)最終采用了Trizol法提取總RNA。電泳結(jié)果表明所提取的總RNA符合RT及Real Time PCR的質(zhì)控要求；通過(guò)將UNIQ-10離心柱法與Trizol法進(jìn)行比較,結(jié)果顯示Trizol法更適合作為本實(shí)驗(yàn)脂肪組織總RNA的提取方法。 2.在分析循經(jīng)高溫現(xiàn)象的產(chǎn)生對(duì)脂肪組織中UCP1mRNA表達(dá)的影響的實(shí)驗(yàn)中,模型組和空白對(duì)照組家兔被測(cè)部位Real-Time PCR測(cè)定的脂肪組織UCP1基因表達(dá)水平測(cè)定結(jié)果：模型組Ct值較空白對(duì)照組明顯降低,表明模型組被測(cè)部位脂肪組織中UCP1mRNA基因表達(dá)水平明顯升高(P0.01)。結(jié)論： 1.利用實(shí)驗(yàn)性膽囊炎家兔造模術(shù)可以誘導(dǎo)模型腹部沿膽經(jīng)出現(xiàn)循經(jīng)高溫反應(yīng)現(xiàn)象,并有一定分布特征,其溫度變化趨勢(shì)的特點(diǎn)是：頭側(cè)溫度高于尾側(cè),并且右側(cè)出現(xiàn)的高溫線溫度值較左側(cè)溫度值高。 2.本實(shí)驗(yàn)建立的紅外溫度計(jì)簡(jiǎn)易測(cè)溫方法可以客觀地反映循經(jīng)高溫反應(yīng)的溫度變化,具有實(shí)用、簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì)性與普及價(jià)值。 3.實(shí)驗(yàn)性膽囊炎模型家兔出現(xiàn)循經(jīng)高溫反應(yīng)時(shí),循經(jīng)脂肪組織中UCP1的基因表達(dá)水平升高,表明脂肪組織產(chǎn)熱增加。因此,結(jié)果提示UCP1與循經(jīng)高溫反應(yīng)現(xiàn)象具有密切相關(guān)性。
【圖文】：

質(zhì)子通道,細(xì)胞的,細(xì)胞氧化,質(zhì)子梯度

圖IB聲r(shí)r細(xì)胞的產(chǎn)熱作用:當(dāng)受冷或食物的刺激時(shí)，，UCPs可作為質(zhì)子通道驅(qū)散氧化呼吸時(shí)形成的質(zhì)子梯度(H令)，從而刺激呼吸活動(dòng)，阻止Al，P崔紛成，促進(jìn)能且以熱能的形式發(fā)散，降低細(xì)胞氧化底物產(chǎn)生盧以，P的效率(摘自Nedergaard&Cax”注on，1992，I)011的，1999)Fig.1Sehematie由ag了aro111哪仃藝tinghowbro、，TladiPosetissuegenoratesheat.V獷henactivatedbyeoldordie仁山euneouPlingProtein認(rèn)b拍，vn幾tcellsProtons(H十)topass吐甘ough小eirinermitochondrialmembr叨es，心匕erebyabolish誼9theprotongradient訛ededtod士iveATPsynthesis，F(xiàn)FA，斤eefa創(chuàng)匕產(chǎn)acid.Ad班PtedfromNederaa了d&Carulon.小結(jié)

紅外熱像儀,圖像,家兔,圖像采集