【摘要】：第一部分益生菌對(duì)結(jié)腸炎小鼠腸上皮細(xì)胞連接保護(hù)作用的研究目的:探討益生菌(雙歧桿菌、乳桿菌)、益生元(拉克替醇)及合生元(雙歧桿菌+乳桿菌+拉克替醇)對(duì)DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎小鼠腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞連接的影響。方法:雄性C57BL/6J小鼠分為5組,除空白對(duì)照組外,其余均DSS建模,建模對(duì)照組不予灌胃處理,其余3組分別予益生菌(雙歧桿菌、乳桿菌)、益生元(拉克替醇)、合生元(益生菌聯(lián)合拉克替醇)灌胃1周,收集小鼠結(jié)腸標(biāo)本,分別進(jìn)行:病理炎癥評(píng)估;透射電子顯微鏡觀察;Occludin、ZO-1、E-cadherin、β-catenin 4種蛋白的免疫組織化學(xué)染色;Occludin、ZO-1、E-cadherin蛋白的Westen blot分析;Occludin、ZO-1、E-cadherinmRNA 的 qRT-PCR 分析。結(jié)果:1.益生菌、益生元及合生元組小鼠病理炎癥評(píng)分較DSS建模組顯著降低;2.透射電鏡可見益生菌、益生元及合生元組小鼠較DSS建模組黏著連接松解減少、細(xì)胞脫落減少,細(xì)胞脫落過程中緊密連接顯著延長,黏著連接松解減少;3.Westernblot示益生菌、益生元及合生元組小鼠較DSS建模組Occludin、ZO-1及E-cadherin蛋白在組織中的相對(duì)含量提高;4.qRT-PCR示益生菌、益生元及合生元組較DSS建模組,E-cadherin及ZO-1 mRNA的表達(dá)水平顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:益生菌、益生元及合生元可:1.顯著降低急性結(jié)腸炎小鼠的炎癥程度,減少腸上皮結(jié)構(gòu)破壞;2.降低急性結(jié)腸炎小鼠黏著連接超微結(jié)構(gòu)的破壞,促進(jìn)細(xì)胞脫落過程中緊密連接及黏著連接的維持;3.增加急性結(jié)腸炎小鼠Occludin、ZO-1及E-cadherin蛋白在組織中的相對(duì)含量;4.上調(diào)急性結(jié)腸炎小鼠E-cadherin及ZO-1 mRNA的表達(dá)水平。第二部分布拉氏酵母菌與雙歧桿菌對(duì)炎癥因子作用下細(xì)胞連接保護(hù)作用的研究目的:通過共培養(yǎng),探討2種益生菌布拉氏酵母菌及雙歧桿菌對(duì)IL-6作用下Caco-2細(xì)胞連接的影響。方法:單層貼壁的Caco-2細(xì)胞分為8組,分別為與布拉氏酵母菌共培養(yǎng)、與雙歧桿菌共培養(yǎng)、與有害菌大腸桿菌共培養(yǎng)、無共培養(yǎng),以及4種共培養(yǎng)體系中分別加入炎癥因子IL-6刺激。分別使用免疫熒光染色、Western blot、免疫共沉淀、qRT-PCR,研究 Occludin/ZO-1、E-cadherin/β-catenin2 對(duì)蛋白在細(xì)胞中的定位、相對(duì)含量、相對(duì)結(jié)合量及mRNA轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果:1.免疫熒光示與雙歧桿菌共培養(yǎng)的Caco-2細(xì)胞加入IL-6刺激后,較與大腸桿菌共培養(yǎng)的細(xì)胞β-catenin入核減少;可見E-Cadherin/β-catenin在細(xì)胞膜相同定位表達(dá),較少進(jìn)入胞質(zhì);與雙歧桿菌共培養(yǎng)的Caco-2細(xì)胞加入IL-6刺激后,Occludin較少進(jìn)入胞質(zhì);2.Western blot示,無共培養(yǎng)及與有害菌共培養(yǎng)的Caco-2細(xì)胞加入IL-6后E-Cadherin、ZO-1蛋白水平的下降,布拉氏酵母菌及雙歧桿菌共培養(yǎng)的細(xì)胞加入IL-6后相應(yīng)蛋白無下降;3.免疫共沉淀示,與布拉氏酵母菌、雙歧桿菌共培養(yǎng)組,加入IL-6刺激后,與β-catenin共沉淀的E-Cadherin比例無顯著下降;與大腸桿菌共培養(yǎng)組有顯著下降;4.qRT-PCR結(jié)果示,與布拉氏酵母菌、雙歧桿菌共培養(yǎng)細(xì)胞中,IL-6刺激可顯著上調(diào)Occludin、E-Cadherin、ZO-1 mRNA的轉(zhuǎn)錄水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與大腸桿菌共培養(yǎng)組,IL-6刺激顯著下調(diào)上述mRNA轉(zhuǎn)錄水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.雙歧桿菌可減少IL-6刺激下Caco-2細(xì)胞的ββ-catenin入核,維持E-Cadherin/β-catenin在細(xì)胞膜的共定位及Occludin的膜定位;2.布拉氏酵母菌及雙歧桿菌可抑制IL-6刺激下細(xì)胞E-Cadherin、ZO-1蛋白水平的下降;3.布拉氏酵母菌及雙歧桿菌可抑制IL-6刺激下細(xì)胞β-catenin結(jié)合E-Cadherin比例的下降;4.與布拉氏酵母菌、雙歧桿菌共培養(yǎng)細(xì)胞中,IL-6刺激可上調(diào)Occludin、E-Cadherin、ZO-1 mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平。
【圖文】：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果逡逑１．小鼠一般情況逡逑建模對(duì)照組與各個(gè)干預(yù)組小鼠在給予ＤＳＳ飲用水后第３天開始出現(xiàn)大便不成逡逑形、肉眼血便等表現(xiàn)，同時(shí)伴有倦怠少動(dòng)、毛色暗淡、體重進(jìn)行性下降。建模對(duì)照逡逑組第６天換回常規(guī)飲用水后癥狀逐漸減輕；各個(gè)干預(yù)組灌胃第４天體重達(dá)到最低，逡逑此后癥狀逐漸減輕。各組小鼠體重變化如下（ｎ邋＝邋５只）：逡逑

邐表８各組小鼠結(jié)腸炎癥程度病理評(píng)分（ｎ＝５）邐逡逑邐ＭＪ邐病理評(píng)分邐與建模組對(duì)比Ｐ值逡逑正常對(duì)照邐０逡逑ＤＳＳ邋建模邐２０．２邐（±１０．９）逡逑ＤＳＳ＋益生菌邐５．４邐（±２．８）邐０．００９逡逑ＤＳＳ＋益生元邐９．２邐（±５．０）邐０．０３７逡逑ＤＳＳ＋合生元邐１０．２邐（±５．２）邐０．０４９逡逑３０邋邐
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R574.62

【參考文獻(xiàn)】

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1 胡正波;陳路佳;滕飛;劉立立;盧海波;;美常安聯(lián)合常規(guī)治療對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[J];中國藥業(yè);2013年07期

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本文編號(hào)：2698209