【摘要】：研究背景 肝纖維化（Hepatic Fibrosis，HF）是肝臟對各種原因所致的慢性肝損傷的過度修復(fù)反應(yīng)，是慢性肝病發(fā)展成為肝硬化必經(jīng)的病理過程[1,2]。早期的肝纖維化如給予有效的治療可以發(fā)生逆轉(zhuǎn)，早期診斷和治療可阻止其向肝硬化和肝癌方向的惡性發(fā)展[3,4]。目前，肝纖維化診斷的金標(biāo)準(zhǔn)是肝組織活檢和病理學(xué)檢查[5]，然而肝臟穿刺是一種有創(chuàng)性檢查，具有一定風(fēng)險[6,7]，因此尋找準(zhǔn)確、可靠的無創(chuàng)檢查方法為肝纖維化的病情判斷和療效考核提供依據(jù)非常有必要[8,9]。近年來，隨著超聲診斷技術(shù)的發(fā)展，超聲彈性成像（Ultrasonic Elastography，UE）技術(shù)受到廣泛關(guān)注并迅猛發(fā)展。它能客觀、無創(chuàng)、真實(shí)地還原肝臟受累部位的情況及肝臟形態(tài)特點(diǎn)，有望成為新的診斷肝纖維化及早期肝硬化的無創(chuàng)手段。 研究目的 本研究擬通過大鼠肝纖維化模型，應(yīng)用德國Siemens Acuson S2000型高檔彩色多普勒超聲診斷儀的聲觸診組織量化技術(shù)（Virtual Touch Tissue Quantification，VTQ）診斷大鼠肝纖維化程度，以肝生化指標(biāo)、病理學(xué)診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)，評價VTQ檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性及靈敏性，為VTQ的臨床應(yīng)用提供重要的基礎(chǔ)資料。 材料與方法 1、50只SD大鼠在超聲監(jiān)測下使用4%硫代乙酰胺(TAA)皮下注射法制備大鼠肝纖維化模型（模型組45只，對照5只）。首次注射采取大腿內(nèi)側(cè)腹壁皮下注射4%TAA生理鹽水溶液1ml為初始劑量誘導(dǎo)制模，從第二次用藥開始調(diào)整藥量為200mg/kg。每周稱重并使用超聲診斷儀進(jìn)行VTQ檢查。根據(jù)檢查結(jié)果對用藥次數(shù)進(jìn)行調(diào)整。建模開始后5w、9w在模型組中隨機(jī)抽取15只大鼠，對照組中抽取2只大鼠，經(jīng)超聲檢查采集數(shù)據(jù)后處死并采血進(jìn)行血清學(xué)檢查，肝臟取材作病理分析，其余動物在12w全部以同樣方法處死取材。 2、大鼠麻醉脫毛后經(jīng)皮使用德國Siemens Acuson S2000型高檔彩色多普勒超聲診斷儀的聲觸診組織量化技術(shù)（Virtual Touch Tissue Quantification， VTQ）及彈性硬度半定量分析診斷大鼠肝纖維化程度，收集肝臟纖維化數(shù)據(jù)。檢測部位均為右側(cè)肝葉組織，彈性成像的感興趣區(qū)域均盡量避開肝葉分界處及肝內(nèi)大血管。每只大鼠均選用不同的區(qū)域測量7次。 3、檢測患鼠肝臟生化指標(biāo)（ALT、AST、HA、LN和IV-C等），以組織病理學(xué)結(jié)果及評分作為金標(biāo)準(zhǔn)，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析評價聲觸診組織量化技術(shù)對大鼠肝纖維化模型的病變程度診斷敏感性和特異性，并在此基礎(chǔ)上探討聲觸診組織量化技術(shù)對大鼠肝纖維化模型分級的準(zhǔn)確程度及診斷應(yīng)用價值。 結(jié)果 1、動物模型造模成功：模型組動物共45只，對照組4只。模型組造模期間死亡5例，其中3例（60%）死于5w前，提示誘導(dǎo)失敗，6w－8w未發(fā)生模型動物死亡，9w后因動物肝功能損害明顯出現(xiàn)了正常死亡2例。經(jīng)過12w的造模，，成功建模： S1-S2期12只，S3-S4期11只，肝硬化期14只。各期肝纖維化及肝硬化總造模成功36例，成功率為90%，全部納入實(shí)驗(yàn)研究。 2、病理診斷結(jié)果：S1－S4模型組動物肝臟腫脹，顏色暗紅，較正常變淺，符合肝纖維化表現(xiàn)。肝硬化模型組動物肝臟失去光澤，質(zhì)地變硬，體積萎縮，表面凹凸不平，呈小顆粒狀改變，符合肝硬化表現(xiàn)。HE染色及Masson三色染色均提示動物模型造模成功并符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組要求。 3、肝纖維化不同分期血清學(xué)纖維化指標(biāo)變化：各血清學(xué)纖維化指標(biāo)隨纖維化分期進(jìn)展依次升高，在肝硬化期達(dá)到高峰。血清學(xué)正態(tài)性檢驗(yàn)顯示AST、ALT、IV-C、HA的分布不符合正態(tài)分布，而LN符合正態(tài)分布。 4、影像學(xué)VTQ數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表明：建模成功的36例肝纖維化/肝硬化動物及5例對照測得：VTQ值測得最低0.79，最高3.56。對照組1.25±0.20，A組1.52±0.22，B組1.89±0.18，C組2.45±0.34。組組間兩兩相比統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性意義（p=0.000）。Control，Group A，Group B，Group C分布區(qū)間有明顯聚集，區(qū)分良好。 5、VTQ結(jié)果分析顯示ALT、IV-C與VTQ各項(xiàng)指標(biāo)間均存在正相關(guān)關(guān)系，但相關(guān)程度不強(qiáng)，相關(guān)系數(shù)均在0.3-0.4。AST、HA與VTQ各項(xiàng)指標(biāo)間不存在相關(guān)關(guān)系，P值均大于0.05。 6、VTQ與病理金標(biāo)準(zhǔn)對比，可以構(gòu)建出判別方程為Y=3.519*VTQ03+3.302*VTQ07-12.813。采用回代驗(yàn)證和交互驗(yàn)證的方法驗(yàn)證該判別方程，結(jié)果顯示回代驗(yàn)證和交互驗(yàn)證的判別準(zhǔn)確率均為92.3%。 結(jié)論 1、通過超聲監(jiān)測下皮下注射TAA法建立SD大鼠梯度肝臟纖維化模型效果良好，超聲監(jiān)測造模組動物死亡率為10%，肝纖維化形成率為90%，效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法組。根據(jù)超聲彈性成像結(jié)果調(diào)整TAA的誘導(dǎo)劑量，可成功誘導(dǎo)大鼠肝纖維化，降低大鼠死亡率，并顯著提高肝纖維化形成率和質(zhì)量。 2、通過大鼠肝纖維化模型進(jìn)行的動物實(shí)驗(yàn)顯示：以超聲彈性成像技術(shù)，運(yùn)用VTQ診斷大鼠肝纖維化程度是可行的。VTQ數(shù)值與肝生化指標(biāo)關(guān)系不密切。以病理學(xué)診斷作為標(biāo)準(zhǔn)的對比研究表明，VTQ與病理金標(biāo)準(zhǔn)的對比，可以構(gòu)建出判別方程為Y=3.519*VTQ03+3.302*VTQ07-12.813。采用回代驗(yàn)證和交互驗(yàn)證的方法驗(yàn)證該判別方程，結(jié)果顯示回代驗(yàn)證和交互驗(yàn)證的判別準(zhǔn)確率均為92.3%，具有較高的準(zhǔn)確性。
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2689636