【摘要】：目的探討以2-乙酰氨基芴(2-AFF)灌胃與2/3肝切除法聯(lián)合運(yùn)用建立大鼠肝卵圓細(xì)胞增殖模型的適宜劑量,并探討肝卵圓細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)方法。方法將174只Wistar大鼠隨機(jī)分為4個實驗組(各30只)、未處理組(24只)和生理鹽水組(30只)。4個實驗組大鼠分別給予5、10、15及20 mg(/kg d)2-AAF灌胃(分別對應(yīng)第1、2、3及4實驗組),于第5天行2/3肝切除,術(shù)后繼續(xù)灌胃至處死大鼠;生理鹽水組大鼠以生理鹽水灌胃,其余操作同實驗組;未處理組大鼠不做任何處理。6組分別于肝切除術(shù)后第4、8、12及16天各隨機(jī)處死6只大鼠,取肝組織行HE染色和免疫組化染色,觀察肝卵圓細(xì)胞的增殖情況〔第4天時同時檢測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)水平〕;并采用二步膠原酶灌注結(jié)合Percoll密度梯度離心法對大鼠肝卵圓細(xì)胞進(jìn)行分離和培養(yǎng)。結(jié)果肝切除術(shù)后第4天,未處理組、生理鹽水組、第1、2、3及4實驗組大鼠的存活率分別為100%(24/24)、93%(28/30)、93%(28/30)、90%(27/30)、90%(27/30)及80%(24/30)。肝切除后第4天,與未處理組及生理鹽水組比較,第2、3和4實驗組大鼠的血清ALT及AST水平均升高(P0.05)。HE染色結(jié)果顯示,第2、3及4實驗組大鼠的肝組織均出現(xiàn)不同程度的肝損傷,其中第3和第4實驗組均可見明顯的肝卵圓細(xì)胞增殖反應(yīng);免疫組化染色結(jié)果顯示,第2、3及4實驗組卵圓細(xì)胞標(biāo)志6(OV-6)表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)在術(shù)后第4、8、及12天,隨2-AAF劑量的增加逐漸升高,與2-AAF間呈劑量-效應(yīng)關(guān)系(P0.05)。大鼠肝卵圓細(xì)胞進(jìn)行體外分離和培養(yǎng)后,經(jīng)OV-6免疫組化染色鑒定,有80%的細(xì)胞表達(dá)呈陽性。結(jié)論聯(lián)合運(yùn)用15 mg(/kg d)2-AFF灌胃加2/3肝切除,于術(shù)后第12天,有效誘導(dǎo)了肝卵圓細(xì)胞的增殖,且造模大鼠的耐受性較好、死亡率低。采用二步膠原酶灌注結(jié)合Percoll密度梯度離心法較成功地分離出了大鼠肝卵圓細(xì)胞。

【參考文獻(xiàn)】

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6 申z，

本文編號：2688494