【摘要】：[目的]氧化還原反應廣泛存在于人體的生理活動中,其平衡的紊亂會介導許多胃部疾病的發(fā)生和發(fā)展。本研究旨在通過利用熒光探針檢測生物體內的一種重要的還原物質(多硫化氫)在不同胃粘膜疾病狀態(tài)下的表達,并以此探索多硫化氫在胃的炎癥、腸上皮化生和惡性腫瘤中的變化特點,并討論其作為一種生物標記物的可能性。[方法]利用檢測多硫化氫的“關-開”型近紅外熒光探針BD-ss,分別在細胞、動物和內鏡活檢組織中作用后,結合相關病理特點,利用激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀和小動物成像系統(tǒng),檢測并分析其熒光變化。[結果]經BD-ss作用后,相比較于未處理組,表皮生長因子和炎性因子作用下的HGC-27細胞中細胞中熒光強度增強(P0.001),奧沙利鉑可以降低惡性增殖狀態(tài)下細胞熒光強度的增強;根據小動物成像系統(tǒng)的結果顯示,慢性炎癥組中的胃熒光強度增高(P0.05),胃癌組中的胃熒光強度明顯增高(P0.01),并且胃癌組的熒光保留時間長于胃炎組;相比較于正常黏膜,內鏡下所取的慢性胃炎(P0.01)、腸上皮化生(P0.05)和惡性腫瘤(P0.001)組織消化后的細胞熒光強度均增高,其中惡性腫瘤組的細胞熒光強度明顯高于慢性胃炎和腸上皮化生組(P0.01)。[結論]在胃的炎癥和增生狀態(tài)下,多硫化氫的表達均會升高,在惡性增殖狀態(tài)下升高更為明顯,其變化可以反映疾病狀態(tài),可以為疾病的診斷提供定量數據和擬診結果。
【圖文】：

邐濱州醫(yī)學院碩士學位論文邐逡逑因此，考慮到多硫化氫在機體信號分子傳遞中的作用，及其在胃部疾病診斷逡逑中的空白，我們借助一種近紅外熒光探針ＢＤ－ｓｓ檢測多硫化氫。多硫化氫含取代逡逑反應。因此，Ｙｕ等設計了一種含有兩個親電基團的探針，能夠有效捕捉多硫化氫。逡逑ａｚｏ－ＢＯＤＩＰＹ作為近紅外熒光團示蹤，由于吸電子基團能猝滅熒光團的熒光，逡逑ａｚｏ－ＢＯＤＩＰＹ的熒光特性可以通過從激發(fā)的熒光團到強吸電子基團之間的光誘導逡逑電子轉移過程來操作（ｄｏｎｏｒ－ｅｘｃｉｔｅｄ邋ＰＥＴ；邋ｄ－ＰＥＴ）。２－氟－５－硝基苯甲酸作為光誘導逡逑電子轉移過程的調制基團，因其含有雙親電位點，因此能夠高選擇性和高靈敏性逡逑的響應多硫化氫。在探針的合成步驟中，在ａｚｏ－ＢＯＤＩＰＹ上修飾２－氟－５－硝基苯甲逡逑酸基團后，由于在熒光團和熒光調制器之間的光誘導電子轉移過程，熒光團的熒逡逑光猝滅。多硫化氫通過親核取代氟原子形成含有裸露巰基的中間體。隨后，巰基逡逑和酯鍵自發(fā)發(fā)生環(huán)化反應釋放ａｚｏ－ＢＯＤＩＰＹ熒光團。這個串聯反應能夠阻止光誘逡逑導電子轉移過程，，因此熒光強度迅速增加。逡逑

圖１（ａ）邋ＨＧＣ－２７細胞在不同的處理下多硫化氫熒光成像和細胞凋亡過程。將細胞用１Ｌ－Ｉｐ，逡逑ＩＦＮ－７，邋ＥＧＦ，邋ＥＧＦ和奧沙利鈿處理２４小時。然后在培養(yǎng)基中加入�。停拢模螅蠓跤玻胺昼�。逡逑使用共聚焦激光掃描顯微鏡的通道分別如下，紅色通道：Ｘｅｘ／ｅｍ＝邋６３５／６７０－７７０邋ｎｍ；藍色通道：逡逑、Ｘ／ｅｍ邋＝邋４０５／４１０－４９０邋ｎｍ；綠色通道：４８８／５００－５７０邋ｎｍ。疊加圖像是紅色，藍色和綠色逡逑通道的組合。標尺：２０邋ｐｍ。收集的流式細胞的通道是ＡＰＣ。（ｂ）（ａ）中熒光圖像數據的統(tǒng)計分逡逑析（ｎ邋＝邋７）。（ｃ）對（ａ）中來自流式細胞術的數據的統(tǒng)計分析（ＩＩ邋＝邋７）。圖中顯示的誤差線表示平均值逡逑±ｓ．ｄ。差異通過單因素方差分析判斷其差異顯著性。＊＊Ｖ＜０．００１ｖ．ｓ．對照組。逡逑Ｆｉｇ．邋１邋（ａ）邋Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ邋ｉｍａｇｅｓ邋ａｎｄ邋ｆｌｏｗ邋ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ邋ｏｆ邋ｈｙｄｒｏｇｅｎ邋ｐｏｌｙｓｕｌｆｉｄｅ邋ａｎｄ邋ａｐｏｐｔｏｓｉｓ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ逡逑ＨＧＣ－２７邋ｃｅｌｌｓ邋ｕｎｄｅｒ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．邋Ｔｈｅ邋ｃｅｌｌｓ邋ｗｅｒｅ邋ｔｒｅａｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋１Ｌ－１（３，邋ＩＦＮ－ｙ，ＥＧＦ邋ａｎｄ邋ＥＧＦ逡逑ｗｉｔｈ邋Ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ邋ｆｏｒ邋２４邋ｈ．邋Ｔｈｅｎ邋ｔｈｅ邋ｍｅｄｉｕｍ邋ｗａｓ邋ａｄｄｅｄ邋ｗｉｔｈ邋Ｃａｓｐａｓｅ－３／７邋Ｇｒｅｅｎ邋Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ邋Ｒｅａｇｅｎｔ逡逑（Ｇｒｅｅｎ邋ｃｈａｎｎｅｌ）邋ｆｏｒ邋１邋ｈ邋ａｎｄ邋ｌｊｉＭ邋ＢＤ－ｓｓ邋（Ｒｅｄ邋ｃｈａｎｎｅｌ）邋ｆｏｒ邋２０邋ｍｉｎ．邋Ｎｕｃｌｅａｒ邋ＲｅａｄｙＰｒｏｂ
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R573

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