本文關(guān)鍵詞：HBV準(zhǔn)種異質(zhì)性在HBV母嬰宮內(nèi)傳播中作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的 HBV感染是一個(gè)全球性的健康問題，經(jīng)過(guò)20年的免疫接種，，15歲以下孩子中的HBsAg的攜帶率顯著下降（自10%下降至0.7%），然而，宮內(nèi)傳播不能被HBV免疫接種阻斷，通過(guò)這種途徑感染的新生兒90%成為慢性攜帶病毒者，是造成免疫失敗的主要原因，其中有10~25%發(fā)展為肝硬化及肝細(xì)胞癌。女性患者可通過(guò)妊娠將病毒再傳遞給她們的下一代。HBV宮內(nèi)傳播的途徑主要有胎盤途徑、外周血單核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）途徑及經(jīng)生殖細(xì)胞的傳播。其中胎盤的滲漏和胎盤細(xì)胞的感染是最主要的途徑，HBeAg可以經(jīng)過(guò)局部的胎盤滲漏通過(guò)胎盤，隨著胎盤屏障的破壞，造成母親的血液進(jìn)入到胎兒的循環(huán)中�；蛘咄ㄟ^(guò)“細(xì)胞途徑”，可能促進(jìn)了感染經(jīng)胎盤的傳播[8]。母親HBeAg血清型陽(yáng)性及高病毒載量為經(jīng)胎盤HBV宮內(nèi)感染明確的正相關(guān)因素。但高危因素的孕婦所生嬰兒“有的呈慢性感染，有的卻產(chǎn)生保護(hù)性抗體”，就這一現(xiàn)象的成因而言，病原學(xué)特征（HBV基因型、血清型、準(zhǔn)種）及環(huán)境暴露因素、宿主遺傳因素（宿主易感性、基因多態(tài)性、易感基因）可能各自均發(fā)揮了重要作用，更可能是兩者交互作用的結(jié)果。 妊娠狀態(tài)也改變了孕婦體內(nèi)HBV的多樣性、進(jìn)化速率及演變方向。病毒可能在選擇壓力下形成免疫逃逸株，感染胎盤，突破胎盤屏障導(dǎo)致胎兒宮內(nèi)感染。病毒在妊娠這一新環(huán)境下，不同種群中病毒株的進(jìn)化模式有何特點(diǎn)？核苷酸多態(tài)性分布有何差異？各蛋白編碼區(qū)在整體上的進(jìn)化演變規(guī)律如何？是否受到正選擇壓力的作用？突破胎盤屏障的免疫逃逸主要與哪一個(gè)或哪幾個(gè)位點(diǎn)有關(guān)？這些問題目的解答尚不明確。 HBV基因組包含四個(gè)開放閱讀框（ORF），分別編碼表面抗原（S區(qū)）、多聚酶（P區(qū)）、核心抗原（C區(qū)）以及X蛋白（X區(qū)）。病毒變異受到其自身復(fù)制特性、宿主遺傳背景、免疫壓力等的交互作用，由于HBV是以全長(zhǎng)序列為遺傳單位進(jìn)行復(fù)制和傳播，因此，母嬰宮內(nèi)傳播逃逸株的變異必然是全基因組范圍并且相互關(guān)聯(lián)的。基于此，對(duì)妊娠過(guò)程中HBV各編碼區(qū)（尤其是免疫原性較強(qiáng)的C區(qū)和S區(qū)）的監(jiān)測(cè)對(duì)于認(rèn)識(shí)HBV宮內(nèi)傳播的機(jī)制具有重要意義。 為探討上述問題，本研究收集2對(duì)病毒高載量（HBVDNA≥10~6copy/ml）和HBsAg及HBeAg雙陽(yáng)性的發(fā)生母嬰傳播HBV宮內(nèi)感染的母親和新生兒的靜脈血樣，提取血清HBV DNA，采用PCR-克隆測(cè)序-種系進(jìn)化分析方法，觀測(cè)母嬰的HBV種群之間的進(jìn)化發(fā)生特點(diǎn)，同時(shí)以這兩位母親為傳播組，同樣病毒高載量和HBsAg及HBeAg雙陽(yáng)性的未發(fā)生宮內(nèi)傳播的母親為對(duì)照組，用上述方法觀察HBV準(zhǔn)種全長(zhǎng)序列異質(zhì)性變化，分析HBV準(zhǔn)種全長(zhǎng)序列變異及進(jìn)化規(guī)律，從而進(jìn)一步探討HBV準(zhǔn)種異質(zhì)性在宮內(nèi)感染的作用。 主要結(jié)果： 一、發(fā)生宮內(nèi)傳播的兩對(duì)母嬰的HBV種群病毒株序列建立2個(gè)進(jìn)化樹，表現(xiàn)為兩種特點(diǎn)：第一種，大部分母親株聚集為一枝，但新生兒株與小部分母親株聚集在另一枝，母親株為新生兒株的起源；第二種，母親株與新生兒株未形成總的單源群，也沒形成各自的單源群，有一株新生兒的病毒株位于大部分母子序列的上游。 二、對(duì)照組和傳播組各對(duì)象HBV的種系發(fā)生具有各自的特征，經(jīng)“胎盤滲漏”途徑宮內(nèi)傳播的HBV種群進(jìn)化特點(diǎn)與未發(fā)生宮內(nèi)傳播的對(duì)照組的HBV種群進(jìn)化特征類似。 三、傳播組和對(duì)照組間種群平均遺傳距離（mean distance）行兩樣本t檢驗(yàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但種群內(nèi)部配對(duì)比較所得的遺傳距離（pariwise distance）數(shù)據(jù)庫(kù)之間，各樣本間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。 四、克隆測(cè)序出的不同的病毒株之間全基因組核苷酸分析，U1基因多態(tài)性最高，U4、M1基因多態(tài)性較高，U2、U3基因多態(tài)性近似，而M2基因多態(tài)性最低。RT區(qū)、X區(qū)及前C/C區(qū)和前S/S區(qū)均有基因多態(tài)性分布。U1全基因組的多態(tài)性均較高，其最高峰位于前S區(qū)；M1基因多態(tài)性較高，在S區(qū)（與RT區(qū)重疊，nt378-480之間）、X區(qū)和前C/C區(qū)有高峰分布，其最高峰位于前C/C區(qū)，次高峰位于S區(qū)；U2、U3、U4各區(qū)高峰分布較均勻，最高峰位于X區(qū)或前C/C區(qū)，M2全基因組核苷酸序列總體多態(tài)性不高，最高峰位于S區(qū)（與RT區(qū)重疊，nt431-619之間)。 五、在種群進(jìn)化過(guò)程中，每個(gè)樣本內(nèi)部的各蛋白編碼區(qū)的非同義替換（dN）和同義替換（dS）距離均不相同。 六、各樣本均未發(fā)現(xiàn)正選擇位點(diǎn)。 主要結(jié)論： 一、發(fā)生HBV宮內(nèi)傳播的兩對(duì)母嬰的HBV病毒所建立的系統(tǒng)進(jìn)化樹的特點(diǎn)顯示，M1N1符合“胎盤滲漏”的感染模式，M2N2符合“細(xì)胞途徑”的感染模式。 二、傳播組與對(duì)照組之間HBV種群平均遺傳距離無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05，但每個(gè)樣本組內(nèi)病毒株兩兩之間的遺傳距離數(shù)據(jù)庫(kù)行兩樣本t檢驗(yàn)，則有顯著性差異，P＜0.05，進(jìn)一步說(shuō)明HBV具有準(zhǔn)種特性。 三、經(jīng)“細(xì)胞模式”途徑發(fā)生宮內(nèi)傳播的HBV病毒株種群，遺傳距離和核苷酸多態(tài)性較小，種群內(nèi)最大的核苷酸多態(tài)性區(qū)域位于與抗原和免疫逃逸有關(guān)的S基因及“a”抗原決定簇內(nèi)，并有一個(gè)與免疫接種逃逸有關(guān)的熱點(diǎn)氨基酸變異位點(diǎn)sT126A。說(shuō)明HBV宮內(nèi)感染可能與S基因及“a”抗原決定簇有關(guān)。 四、在種群進(jìn)化過(guò)程中，每個(gè)樣本內(nèi)部的各蛋白編碼區(qū)的非同義替換（dN）和同義替換（dS）距離均不相同，說(shuō)明各編碼區(qū)對(duì)選擇壓力的應(yīng)答均存在差異。 五、經(jīng)“細(xì)胞途徑”發(fā)生宮內(nèi)傳播的母親HBV準(zhǔn)種異質(zhì)性小于經(jīng)“胎盤滲漏”途徑發(fā)生宮內(nèi)傳播和未發(fā)生宮內(nèi)傳播的母親HBV準(zhǔn)種異質(zhì)性。
【關(guān)鍵詞】：乙型肝炎病毒 宮內(nèi)傳播 準(zhǔn)種 系統(tǒng)進(jìn)化
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R512.62
【目錄】：

• 英文縮寫詞表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 HBV 在宮內(nèi)傳播途徑的分子進(jìn)化特點(diǎn)研究15-30
• 前言15
• 材料與方法15-25
• 結(jié)果25-28
• 討論28-30
• 第二部分 宮內(nèi)傳播組與對(duì)照組母親 HBV 基因組全長(zhǎng)序列準(zhǔn)種特點(diǎn)的研究30-45
• 前言30-31
• 材料與方法31-33
• 結(jié)果33-42
• 討論42-45
• 全文總結(jié)45-47
• 致謝47-48
• 附圖48-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 文獻(xiàn)綜述 HBV 的生物學(xué)特點(diǎn)及母嬰傳播的途徑和影響因素58-70
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 攻讀碩士學(xué)位期間主要工作成績(jī)70

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：HBV準(zhǔn)種異質(zhì)性在HBV母嬰宮內(nèi)傳播中作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：268146