【摘要】：目的：觀察丹參素對血小板衍生生長因子-BB（PDGF-BB）刺激下大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC）活化增殖，Ⅰ、Ⅲ型膠原合成與分泌，細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2）和磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）蛋白表達(dá)的影響，探討丹參素抗肝纖維化的分子機(jī)制。 方法：采用改良式膠原酶-鏈霉蛋白酶消化法分離大鼠HSC，，α-SMA免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定分離的HSC。用不同濃度丹參素（0.25、0.125、0.062mmol/L）、ERK通道特異性抑制劑UO126（20nmol/L）和PI3K通道特異性抑制劑LY294002（20nmol/L）分別作用于PDGF-BB（10ng/ml）誘導(dǎo)的HSC24小時，CCK8法檢測HSC增殖活性，免疫化學(xué)染色法測定I、Ⅲ型膠原合成，酶聯(lián)免疫吸附法觀察Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌，Western blot測定erk1/2、p-erk1/2、akt和p-akt蛋白表達(dá)。 結(jié)果：原代分離的HSC約為3.4×107/鼠，存活率大于98％，傳一代的HSC純度大于99％。PDGF-BB10ng/ml處理后，HSC增殖明顯增加，丹參素能抑制PDGF-BB刺激大鼠HSC增殖的作用，并隨丹參素濃度增加細(xì)胞增殖受到的抑制作用越強(qiáng)（P0.05），Ⅰ、Ⅲ型膠原合成及分泌均顯著減少（P0.05），p-erk1/2和p-akt蛋白表達(dá)均顯著降低（P0.05）。 結(jié)論：原代分離的大鼠HSC是體外研究肝纖維化的重要模型。丹參素可通過抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的HSC增殖和活化，同時抑制與肝纖維化密切相關(guān)的MAPK、PI3K途徑中erk、akt蛋白的磷酸化，負(fù)性調(diào)控肝纖維化過程，其機(jī)制可能與抑制ERK1/2和PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。
【圖文】：

圖 1-1 新分離的原代 HSC(×40)Fig1-1 hepatic stellate cells of primaryisolation（×40）圖 1-2 原代 HSC 培養(yǎng) 9 天(×100)Fig1-2 HSC after nine days in primaryculture（×100）圖 1-3 原代 HSC 培養(yǎng) 9 天(×200)Fig1-3 HSC after nine days in primary圖1-4 原代培養(yǎng)9天HSC細(xì)胞α-SMA染色鑒定圖(×200)

圖 1-1 新分離的原代 HSC(×40)Fig1-1 hepatic stellate cells of primaryisolation（×40）圖 1-2 原代 HSC 培養(yǎng) 9 天(×100)Fig1-2 HSC after nine days in primaryculture（×100）圖 1-3 原代 HSC 培養(yǎng) 9 天(×200)Fig1-3 HSC after nine days in primary圖1-4 原代培養(yǎng)9天HSC細(xì)胞α-SMA染色鑒定圖(×200)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R285.5;R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 李冬;戴立里;余斌斌;姜中華;;丹參素對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及NF-κB活性的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年08期

2 陳達(dá)凡;李建英;鄭偉達(dá);王小眾;;ERK信號通路與肝纖維化[J];國際消化病雜志;2007年05期

3 李金星;朱賢立;李玉;王

本文編號：2680685