【摘要】：目的:探討IL-22對(duì)骨髓來源巨噬細(xì)胞相關(guān)炎癥因子iNOS,IL-1β和TNF-α表達(dá)的影響。方法:從小鼠的股骨分離骨髓細(xì)胞,使用巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)刺激骨髓細(xì)胞,經(jīng)過7天的分化培養(yǎng)獲得骨髓來源巨噬細(xì)胞(M0型巨噬細(xì)胞),再用脂多糖(LPS)刺激M0型巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)為M1型巨噬細(xì)胞。在骨髓來源巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中加入Iatex beads,用顯微鏡觀察骨髓巨噬細(xì)胞的吞噬情況,計(jì)算骨髓來源巨噬細(xì)胞的吞噬率。用不同濃度2.5ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml的IL-22分別干預(yù)骨髓來源巨噬細(xì)胞36h,用CCK8法檢測(cè)IL-22對(duì)骨髓來源巨噬細(xì)胞活性的影響。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)M0型巨噬細(xì)胞和M1型巨噬細(xì)胞的細(xì)胞標(biāo)志物,用IL-22(20ng/ml)干預(yù)M1型巨噬細(xì)胞36h后,采用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)LPS組、LPS+IL-22組M1型巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物;用ELISA分別檢測(cè)LPS組和LPS+IL-22組的M1型巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清的IL-1β、TNF-α分泌水平;IL-22(20ng/ml)不同時(shí)間12h、24h和36h分別干預(yù)M1型巨噬細(xì)胞,用RT-PCR分別檢測(cè)LPS組和LPS+IL-22組的M1型巨噬細(xì)胞相關(guān)炎癥因子iNOS,IL-1β,TNF-α的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:通過顯微鏡觀察到M0型巨噬細(xì)胞與M1型巨噬細(xì)胞形態(tài)有明顯的區(qū)別。經(jīng)過7天的分化培養(yǎng),骨髓來源巨噬細(xì)胞的純率為99.3±0.4%,成功獲得高純度的成熟M0型巨噬細(xì)胞。通過熒光顯微鏡觀察到骨髓來源巨噬細(xì)胞吞噬率達(dá)99%,說明誘導(dǎo)的骨髓巨噬細(xì)胞具備正常的吞噬功能。經(jīng)過CCK8檢測(cè)骨髓來源巨噬細(xì)胞活性后,本實(shí)驗(yàn)選擇IL-22的作用濃度為20ng/ml,未對(duì)骨髓來源巨噬細(xì)胞的活力構(gòu)成影響。用IL-22(20ng/ml)干預(yù)M1型巨噬細(xì)胞36h后,LPS+IL-22組CD11b+F4/80+iNOS+細(xì)胞的比例為68.8.9±2.6%,低于LPS組(P0.01),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與LPS組相比,LPS+IL-22組促炎細(xì)胞因子IL-1β(431±47 vs 296±55pg/ml,t=3.214,P=0.032)和TNF-α(629±74 vs 274±24pg/ml,t=7.896,P=0.001)分泌水平均降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-22(20ng/ml)不同時(shí)間12h、24h和36h分別干預(yù)M1型巨噬細(xì)胞后,與LPS組相比,LPS+IL-22組的促炎細(xì)胞因子iNOS,IL-1β,TNF-α的mRNA表達(dá)均有不同水平的降低,其中,TNF-αmRNA表達(dá)水平隨著IL-22干預(yù)時(shí)間延長而下降(P0.01);IL-1β的24h和36h組mRNA表達(dá)水平降低(P0.05);iNOS的24h和36h組mRNA表達(dá)水平也降低(P0.05),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而iNOS 12h組mRNA表達(dá)水平升高(P0.05),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:LPS誘導(dǎo)M0型巨噬細(xì)胞成M1型巨噬細(xì)胞后,其炎癥因子iNOS,IL-1β,TNF-α的表達(dá)增加。IL-22可抑制LPS誘導(dǎo)的M1型巨噬細(xì)胞炎癥因子iNOS,IL-1β,TNF-α的表達(dá),減輕其炎癥反應(yīng),抑制肝纖維化的進(jìn)程。本研究結(jié)果展示了IL-22對(duì)巨噬細(xì)胞的抗炎作用,為今后抗纖維化相關(guān)藥物的研發(fā)提供了堅(jiān)實(shí)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1 骨髓來源巨噬細(xì)胞形態(tài)(× 200 )A.M0 型巨噬細(xì)胞；B.M1 型巨噬細(xì)胞Fig.1 Morphology of bone marrow-derived macrophagesA.M0 macrophages;B. M1 macrophages(× 200 )2. 骨髓來源巨噬細(xì)胞的吞噬功能通過熒光顯微鏡觀察到骨髓來源巨噬細(xì)胞吞噬率達(dá) 99%（吞噬率%=吞噬 Iatex beads 細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)），說明誘導(dǎo)的骨髓巨噬細(xì)胞具備正常的吞噬功能，有正常的生理功能，見圖 2。

圖 1 骨髓來源巨噬細(xì)胞形態(tài)(× 200 )A.M0 型巨噬細(xì)胞；B.M1 型巨噬細(xì)胞Fig.1 Morphology of bone marrow-derived macrophagesA.M0 macrophages;B. M1 macrophages(× 200 )2. 骨髓來源巨噬細(xì)胞的吞噬功能通過熒光顯微鏡觀察到骨髓來源巨噬細(xì)胞吞噬率達(dá) 99%（吞噬率%=吞噬 Iatex beads 細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)），，說明誘導(dǎo)的骨髓巨噬細(xì)胞具備正常的吞噬功能，有正常的生理功能，見圖 2。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R575.2

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本文編號(hào)：2680451