【摘要】：目的：采用高脂飲食誘導(dǎo)產(chǎn)生大鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfatty liver disease,NAFLD)模型，予以替米沙坦藥物干預(yù)，檢測大鼠大網(wǎng)膜、血清瘦素水平及肝組織瘦素受體的表達(dá)，以闡明替米沙坦對NAFLD大鼠瘦素及其受體的影響，為進(jìn)一步了解本病的發(fā)病機(jī)制及治療本病提供新的方法及思路。 方法： 1動物模型的制備： 選取雄性(Sprague Dawley)SD大鼠，正常對照組喂飼普通飼料，高脂對照組飼以84%普通飼料+高脂飼料，配方為：1%膽固醇、10%豬油、5%蛋黃粉，實驗動物自由進(jìn)食及飲水。 2實驗分組： 將35只SD大鼠隨機(jī)分為三組即：正常對照組(NC group, n=10)、高脂對照組(FC group, n=15)、高脂+替米沙坦干預(yù)組(FT group, n=10)。于飼養(yǎng)12周末時隨機(jī)各取NC及FC組5只做肝組織的HE染色，觀察肝組織病理變化，確定造模成功后，F(xiàn)T組給予替米沙坦(5mg/kg.d)灌胃并繼續(xù)予以高脂飲食，正常組及高脂對照組則按照體重以等容量的生理鹽水灌服，每日一次，共持續(xù)4周。 3大鼠體重的變化： 用電子天平稱取大鼠體重，并記錄每只大鼠體重的變化。 4肝組織學(xué)檢查： 應(yīng)用石蠟切片，采用蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin HE)染色的方法，在光鏡下觀察肝臟病理學(xué)的變化情況。 5大網(wǎng)膜瘦素、肝組織中瘦素受體及血清中瘦素的檢測： 大網(wǎng)膜瘦素、肝組織中瘦素受體采用免疫組化法檢測，血清中瘦素采用放射免疫法測定。 6血清生化學(xué)的檢測： 取血清樣本，應(yīng)用全自動血清生化分析儀檢測轉(zhuǎn)氨酶及血脂等生化指標(biāo)的變化。 7用放射免疫法測定空腹血清胰島素(fasting insulin,FINS)水平，按HOMA-IR模型計算空腹?fàn)顟B(tài)下胰島素抵抗指數(shù)IRI=(FINSxFBG)/22.5。 8用多功能病理圖象分析儀測定大網(wǎng)膜瘦素、肝脂變、肝臟瘦素受體表達(dá)面積百分比，每張切片選取四周及中央五個區(qū)域，20倍物鏡下計算平均面密度(陽性面積與統(tǒng)計場面積百分比)，結(jié)果取平均值。 結(jié)果： 1各組大鼠體重的變化： 大鼠剛購買時體重200g左右,經(jīng)1周平衡喂養(yǎng)(剛購買時為-7天,后平衡喂養(yǎng)1周時計為0天),后進(jìn)行完全隨機(jī)分組，實驗前比較不同組別之間體重?zé)o差異(219.00±2.00,203.78±8.12,204.38±8.23)(P0.05),說明這幾組體重基線一致,具有良好的可比性。 高脂組及治療組通過高脂飲食飼養(yǎng)12周后，大鼠體重均趨于平穩(wěn)，兩組大鼠體重?zé)o差別(368.78±27.65,332.67±13.01)(P0.05)，高脂飲食大鼠的體重均高于正常對照組(368.78±27.65,335.67±19.50)(P0.05)，藥物干預(yù)4周后，治療組(334.50±33.18)體重較高脂組(399.44±24.91)下降，但治療組體重仍高于正常組(332.67±13.01)，差別具有顯著性(P0.01)。 2肝組織病理學(xué)的變化情況： 正常組無肝細(xì)胞脂肪變性，且未見炎癥細(xì)胞浸潤；模型組肝細(xì)胞呈彌漫性的脂肪變性，中央靜脈周圍匯管區(qū)脂變的較為明顯，并可見程度不一的小葉內(nèi)炎癥和匯管區(qū)的炎癥，點片狀及局灶性壞死，甚至部分壞死融合成片，與正常組相比有顯著差異(P0.01)。替米沙坦治療組肝細(xì)胞的脂肪變及炎癥分級與模型組相比均明顯改善(P0.05)。 3血清生化指標(biāo)的變化： (1)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)： 模型組ALT(32.68±12.26)較正常組(15.21±1.01)顯著升高(P0.01)，治療組(16.71±1.11)較模型組顯著降低(P0.01)而與正常組無明顯差異；模型組AST(33.31±5.78)較正常組(21.64±1.20)顯著增高(P0.01)，治療組AST(20.76±2.20)較模型組下降(P0.01)，與正常組無明顯差異(P0.01)。 (2)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)： 正常組血清TC、TG(1.21±0.17,0.46±0.07)，模型組(2.02±0.18,0.82±0.07)顯著升高(P0.01,0.01)，治療組TC、TG(1.59±0.13,0.55±0.14)較模型組下降(P0.01,0.01)。 (3)血糖及HOMA-IR值： 正常組空腹血糖(5.79±0.23)，模型組(11.83±0.70)較正常組顯著升高(P0.01)；治療組(9.78±0.78)較模型組顯著降低(P0.01)。模型組的HOMA-IR值(14.70±1.37)與正常組(4.71±0.44)相比，，顯著升高(P0.01)；治療組(9.62±0.70)較模型組顯著降低(P0.01)。4大網(wǎng)膜瘦素、血清瘦素、肝臟瘦素及受體的變化： (1)大網(wǎng)膜瘦素的變化： 與正常組(0.12±0.01)相比，模型組(0.29±0.04)顯著升高(P0.01)，治療組(0.16±0.01)較模型組明顯降低(P0.01)。 (2)血清中瘦素的變化： 與正常組(1.41±0.06)相比，模型組(1.70±0.08)顯著升高(P0.01)；治療組(1.48±0.06)較模型組(1.70±0.08)明顯降低(P0.01)。 (3)肝臟瘦素分布的變化： 與正常組(0.07±0.02)相比，模型組(0.25±0.04)顯著升高(P0.01)；治療組(0.15±0.01)明顯低于模型組(P值0.01)。 (4)肝臟瘦素受體的變化： 與正常組(0.34±0.09)相比，模型組(0.13±0.01)顯著降低(P0.01)；治療組(0.24±0.02)明顯高于模型組(P0.01)。 結(jié)論：高脂飼料飲食12周可成功誘導(dǎo)大鼠非酒精性脂肪肝的形成。NASH時大網(wǎng)膜脂肪組織中瘦素的表達(dá)增高,以內(nèi)分泌的作用致血清中瘦素明顯升高，肝臟瘦素受體降低，說明存在了瘦素抵抗。替米沙坦可以改善糖脂代謝紊亂造成的胰島素抵抗、體重增長及肝功能異常，并可改善NASH時肝臟的損害；可降低大網(wǎng)膜瘦素的表達(dá)從而降低血清瘦素水平，并使肝臟的瘦素受體表達(dá)增加，改善了瘦素抵抗。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2680093