發(fā)布時間：2020-05-25 10:13

【摘要】：目的:探究DDR1a在小鼠實驗性結(jié)腸炎中的作用及機制。方法:慢病毒篩選:將廠家提供的3組下調(diào)DDR1a表達的慢病毒(DDR1a-homo-1400、DDR1a-homo-1403、DDR1a-homo-1733),分別轉(zhuǎn)染IEC-6細(xì)胞,行Western-blot檢測DDR1a蛋白表達。動物實驗:將32只雌性Balb/c小鼠分為4組:正常對照組、模型組、治療組、陰性對照組。正常對照組自由飲用蒸餾水,其余3組小鼠連續(xù)7天飲用4%DSS后繼續(xù)飲用蒸餾水3天;治療組于第4天行尾靜脈注射lenti-DDR1a-sh RNA,陰性對照組經(jīng)尾靜脈注射scramble lenti-DDR1a-sh RNA。第11天處死小鼠,測量結(jié)腸長度,計算脾臟指數(shù)、疾病活動指數(shù)(DAI),行病理組織學(xué)評分(TDI),免疫組化及Western-blot檢測各組結(jié)腸組織中DDR1a和NF-κB p65,ELISA檢測各組結(jié)腸組織中IL-6、IL-8、TNF-α。細(xì)胞實驗:IEC-6分為四組:正常對照組、激活組、干預(yù)組和陰性對照組;干預(yù)組和陰性對照組分別成功轉(zhuǎn)染lenti-DDR1a-sh RNA和scramble lenti-DDR1a-sh RNA,除正常對照組外,其余三組細(xì)胞均需與I型膠原蛋白孵育,Western-blot檢測各組細(xì)胞中DDR1a和NF-κB p65,ELISA檢測各組細(xì)胞中TNF-α和IL-10。結(jié)果:1病毒篩選:Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染DDR1a-homo-1403組慢病毒后,IEC-6細(xì)胞中DDR1a表達下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。2動物實驗:(1)DAI評分及TDI評分:與正常對照組相比,模型組DAI評分及TDI分均顯著升高,而治療組中DAI評分及TDI評分均降低,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。(2)免疫組化和Western-blot檢測結(jié)果示:相對于正常組小鼠,模型組小鼠的DDR1a、NF-κB p65表達均明顯升高,而相對于模型組,治療組中DDR1a表達下調(diào),同時NF-κB p65表達降低,上述差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。(3)ELISA結(jié)果示:相對于正常對照組,模型組腸組織中TNF-α、IL-6、IL-8均高于正常組;而相對于模型組,治療組中上述細(xì)胞因子表達均降低,上述差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。3細(xì)胞實驗(1)Western-blot結(jié)果示:相對于正常對照組,激活組中DDR1a和NF-κB p65,表達均明顯升高,而相對于激活組,干預(yù)組中DDR1a表達下調(diào),NF-κB p65表達相應(yīng)降低,上述差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。(2)ELISA檢測結(jié)果示:相對于正常對照組,激活組中TNF-α和IL-10表達升高,而相對于激活組,干預(yù)組中上述細(xì)胞因子表達降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論1 DDR1a參與小鼠實驗性結(jié)腸炎的發(fā)病;2 DDR1a可能通過活化NF-κB p65,促進炎性因子的過量釋放。
【圖文】：

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 DDR1a 在小鼠實驗性結(jié)腸炎中的作用及機制2.5 實驗結(jié)果2.5.1 慢病毒侵染 IEC-6 的效果檢測下調(diào) DDR1a 表達的重組慢病毒侵染 IEC-6 細(xì)胞 72h 后，置于熒光顯微鏡下觀察，如圖 2.1。通過觀察幾組不同 MOI 值下重組慢病毒的侵染效果，發(fā)現(xiàn)當(dāng)MOI=10 時，有較多細(xì)胞表達 GFP，表明有部分細(xì)胞能穩(wěn)定表達目的基因片段，為進行進一步的細(xì)胞實驗奠定基礎(chǔ)。

圖 2.1 IEC-6 細(xì)胞慢病毒侵染 72h 結(jié)果 ×1002.5.2 Western blot 檢測重組慢病毒轉(zhuǎn)染前后 DDR1a 表達調(diào) DDR1a 表達的慢病毒成功轉(zhuǎn)染 IEC-6 后，行 Western blot 檢測 DDR1a況，結(jié)果示 DDR1a-homo-1043 序列慢病毒成功轉(zhuǎn)染后，DDR1a 表達明顯p＜0.05），DDR1a-homo-1400 及 DDR1a-homo-1733 組慢病毒轉(zhuǎn)染后，DDR1a 表低，，但未達到統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見圖 2.2 和圖 2.3。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R574.62

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本文編號：2679997